国家重点基础研究发展计划(2004CCA02400)
- 作品数：7 被引量：31H指数：4
- 相关作者：王斌辛晓妮闫志勇罗玮王斌更多>>
- 相关机构：青岛大学青岛市市立医院青岛大学医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划青岛市自然科学基金项目山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生理学一般工业技术更多>>
- 重组沙蚕溶栓活性蛋白酶的纯化及其性质研究被引量：4
- 2007年
- 目的表达、纯化重组沙蚕溶栓活性蛋白酶并对其性质进行研究。方法将表达栽体pMAL-PPA转化入E.coli DH5α构建工程菌,IPTG诱导工程茵大量表达麦芽糖结合蛋白-沙蚕溶栓活性蛋白酶(MBP- PPA),细胞裂解液中融合蛋白经Amylose-resin亲和层析与DEAE-Sepharose FF离子交换层析得到了纯化．用Factor Xa切割融合蛋白后经酪蛋白平板法检测其纤维蛋白溶酶原激活活性．然后对其部分性质进行了研究。结果构建了表达MBP—PPA的工程菌,经纯化得到相对分子质量约51kDa的融合蛋白,Factor Xa切割融合蛋白后,重组沙蚕溶栓活性蛋白酶(PPA)体外具有纤维蛋白溶酶原激活活性,性质研究表明PPA热稳定性好,最适pH为8.0,该酶在pH6.0～9.0范围内有较好的稳定性,酶活在有机溶剂中至少维持20d,25 mmol．L^(-1)PMSF能完全抑制其活性。结论证实PPA是一种纤溶酶原激活荆,且将来有望成为一种新型溶栓药物。
- 李荣贵赵峰杨宏杜桂彩汪靖超王斌
- 关键词：沙蚕纯化
- SiO_2/稀土Eu(Ⅲ)配合物核-壳复合粒子的制备及发光性能研究被引量：6
- 2011年
- 采用Stober法制备了粒径为40-60nm的单分散纳米SiO2微球，以氧化铕为原料、α-噻吩甲酰三氟丙酮和邻菲哆啉为配体制备了稀土铕的三元配合物，并将其成功包覆在SiO2微球表面，形成核-壳复合粒子。采用红外光谱和元素分析表征配合物的结构。透射电镜照片表明，稀土有机配合物在SiO2微球表面形成了致密的纳米级包覆层，包覆层厚度随配合物用量的增加而增加。复合粒子呈现出很强的Eu配合物发光，纳米SiO2核对配合物有荧光增强作用，但配合物浓度较高时荧光增强效应有所减弱。
- 黄震唐建国王蕊王瑶刘继宪
- 关键词：单分散核-壳结构表面包覆稀土稀土配合物
- 嗜麦芽寡养单胞菌D2株单加氧酶基因的克隆与表达
- 2010年
- 构建嗜麦芽寡养单胞菌D2株荧光素样单加氧酶基因表达克隆载体,并进行融合表达。PCR扩增出嗜麦芽寡养单胞菌D2菌株基因组DNA中包含单加氧酶基因约1300bp的核酸片段,将其克隆到T载体pMD-18中进行序列测定,所得序列申请并获得GenBank登记号（GQ122330）。DNA star软件分析发现该基因片段中含有一个996bp的完整开放读码框架（ORF）,与GenBank中收录的S.maltophilia R551-3（CP001111/GenomeProject17107）和K279a（AM743169）的MO基因核酸序列同源性分别为90%和89%,氨基酸序列同源性分别为93%和90%。根据该ORF序列设计分别含有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的表达克隆扩增引物,PCR扩增、双酶切后将产物亚克隆到pET32a载体中,经过双酶切验证,证实成功获得了表达重组载体pET32a/MO;将其转化宿主菌E.coli BL21,IPTG诱导后成功表达出54.2ku的MO融合蛋白,为该酶进一步的功能研究和开发奠定了基础。
- 辛晓妮闫志勇杨丽吴瑶王斌宋旭霞罗玮
- 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌单加氧酶克隆原核表达
- 沙蚕提取物的抗氧化活性研究被引量：12
- 2007年
- 目的探讨沙蚕提取物的抗氧化活性。方法采用DPPH法观察沙蚕提取物的抗氧化活性。通过Sephadex LH-20凝胶过滤,对沙蚕提取物中的抗氧化物质进行了初步分离纯化。结果与结论沙蚕提取物具有较强的清除自由基(DPPH)的能力,通过定性分析方法确定该物质为一类小分子量的多肤类物质。
- 黄琳段磊李荣贵王斌
- 关键词：双齿围沙蚕自由基抗氧化性
- 嗜麦芽寡养单胞菌蛋白酶纤溶活性及其机制的研究
- 2011年
- 目的自双齿围沙蚕消化道内分离得到1株嗜麦芽寡养单胞菌,前期研究发现该菌株可大量胞外分泌一种具有纤溶活性的蛋白酶。文中旨在观察嗜麦芽寡养单胞菌蛋白酶(S.maltophiliaprotease,SMP)在体内外的纤维蛋白溶解活性,并探讨其纤溶机制。方法试管凝块法和纤维蛋白平板法体外观察SMP对纤维蛋白和纤维蛋白原的溶解作用,计算其比活性;建立SD大鼠动-静脉旁路血栓模型,分别给予不同剂量的SMP、等渗盐水和蚓激酶,观察各组血栓重量及表面情况,检测血浆优球蛋白溶解时间(euglobulin lysis time,ELT)、纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)、纤维蛋白降解产物(fibrin degradation prod-uct,FDP)和D-二聚体等指标,并比较血浆中组织型纤溶酶原激活物(tissue plasminogen activator,t-PA)和血浆纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor type-1,PAI-1)的变化。结果 SMP同时具有溶解纤维蛋白原和纤维蛋白的活性,且活性呈一定的量效关系;SMP不依赖纤溶酶原的激活而直接溶解纤维蛋白,并可在动物体内迅速发挥溶栓活性,溶解已经形成的血栓;其溶栓活性发挥不依赖t-PA,也不抑制PAI-1的活性。结论 SMP具有良好的溶栓活性,有望开发成为一种新型的溶栓药物。
- 毕春霞宋广辉闫志勇辛晓妮罗玮王斌
- 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌蛋白酶纤溶活性溶栓
- 1株高产蛋白酶嗜麦芽寡养单胞菌的分离鉴定及其酶学活性的研究被引量：7
- 2010年
- 双齿围沙蚕消化道中分离1株高产蛋白酶菌株D2（CGMCC保藏号：1868）,经形态学、生理学、16S rRNA基因序列测定及系统发育分析确定为嗜麦芽寡养单胞菌。Lowry法检测显示该菌株产酶能力为1104 U/mL,最佳产酶条件为pH 8.0、25℃培养48 h;酪蛋白酶图谱法和凝胶成像分析证实其蛋白酶分子量约为42 ku,在培养上清液中纯度大于97%;该酶对粗酶品比活性为301 U/mg,酶活性的最适pH值为9,是一种碱性蛋白酶;最适温度为60℃;在55℃以下及pH 6-10的环境中具有较好的稳定性。嗜麦芽寡养单胞菌D2株有望成为一种新的蛋白酶生产资源。
- 闫志勇毕春霞辛晓妮罗玮代玉梅王斌
- 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌蛋白酶活性
