南京军区医学科技创新课题(09MA037)
- 作品数：4 被引量：26H指数：3
- 相关作者：陈复兴刘军权吕小婷张颂张娟更多>>
- 相关机构：解放军第97医院徐州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：南京军区医学科技创新课题更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 多种活化因子共刺激对人外周血单个核细胞体外增殖和表型的影响被引量：11
- 2012年
- 目的:观察多种活化因子共刺激后对人外周血淋巴细胞增殖和表型的影响。方法:用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMC),根据加入刺激因子(CD3 mAb、CD28 mAb、IFN-γ、IL-1α、IL-2、IL-15和IL-21)种类和方法不同将实验分为7组。用全自动五分类血液分析仪计数不同细胞因子诱导培养的PBMC增殖力、流式细胞术测定诱导后共刺激细胞表面CD3,CD4,CD8,CD28,CD16、CD56+CD16,CD3+CD8+,CD3+CD4+,CD3+CD56+,CD45RO等分子的变化、乳酸脱氢酶释放法测定诱导后的共刺激细胞对SGC-7901、SW-1990和SW-116细胞株的杀伤活性。结果:在PB-MC培养体系中加入不同的刺激因子其细胞增殖能力有明显的差异,以含刺激因子CD3、CD28、IFN-γ、IL-2、IL-1α、IL-15和IL-21组增殖倍数最高,在培养第10 d时该组的增殖倍数为255.3 6.3,明显高于仅含CD3、IFN-γ和IL-2培养体系组(166.6 5.5)(P<0.05)。在PBMC培养体系中加入不同的刺激因子其部分细胞表面标志有所差异,在培养体系中无IL-15时CD16+CD56+(NK细胞)细胞和CD3+CD56+细胞比例明显高于其他组;CD45RO+的记忆性T细胞以延迟3 d添加IL-15和IL-21组升高最明显。经不同活化因子刺激培养10 d的PBMC对SGC-7901、SW-1990和SW-1116细胞杀伤活性有明显差异,以延迟3 d添加IL-15和IL-21组最高(分别为76.2%、60.3%和70.6%),明显高于仅含CD3、IFN-γ和IL-2培养体系的细胞组(分别为54.9%、44.6%和50.4%)(P<0.05)。培养的细胞对胃腺癌细胞SGC-7901杀伤活性最强。结论:不同刺激因子活化的PBMC其增殖能力、表面标记和杀伤活性有明显差异,在培养体系中增加相应的刺激因子对细胞定向培养有一定价值。
- 刘军权朱云陈复兴张南征吕小婷周忠海张娟张颂陶征中李昳
- 关键词：共刺激单个核细胞增殖杀伤活性
- 一种体外扩增γδT细胞的新方法被引量：6
- 2011年
- 目的:建立一种新的γδT细胞扩增方法。方法:从健康人外周血中分离外周血单个核细胞(PBMCs),与用唑来膦酸预处理过的未成熟DCs按10:1混合,在含IL-2 400 U/ml和10%小牛血清的RPMI1640培养基中培养,用MTT法测定细胞增殖倍数。用流式细胞仪对γδT细胞进行表型分析并检测其细胞内的颗粒酶B、穿孔素和CD107a含量。用乳酸脱氢酶释放法(LDH)检测细胞杀伤活性。结果:经唑来膦酸预处理的树突状细胞与自身外周血单个核细胞共培养,到11天时γδT细胞增殖倍数达到(120±15)倍,第8天和11天γδT细胞百分率分别达到70.26%±3.56%、90.11%±4.67%。γδT细胞细胞内颗粒酶B、穿孔素及CD107a在第8天时分别为81.66%±4.32%、86.62%±5.21%和80.12%±3.78%,均高于对照组。培养的γδT细胞对SGC-7901、SW-1990、SW-480肿瘤细胞株杀伤活性至第8天时达到峰值。结论:此法能有效诱导γδT细胞体外扩增,培养的γδT细胞颗粒酶B、穿孔素及CD107a均显著高于对照组,并有较强的抗肿瘤活性。
- 吕小婷刘军权周忠海陈玲张娟张颂黄菲陈复兴
- 关键词：树突状细胞唑来膦酸ΓΔT细胞免疫治疗
- 舒林酸提高γδT细胞杀伤胃癌细胞机制研究
- 2010年
- 目的探讨舒林酸提高γδT细胞杀伤胃癌细胞的作用机制。方法常规方法培养γδT细胞,收集培养第9天的γδT细胞用不同浓度的舒林酸(1、2、4、8、16、32μmol/L)诱导24 h,收集培养上清液用于细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素12(IL-12)检测,沉淀细胞用于穿孔素、粒酶B、NKG2D流式细胞测定和用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞株(SGC-7901和BCG-823)活性。每组测试样本和指标均设未加药物诱导的对照组。结果舒林酸浓度在8μmol/L时,γδT细胞穿孔素和粒酶B达最高〔分别为(71.5±5.3)%和(78.3±7.1)%〕,明显高于对照组〔分别为(51.4±7.3)%和(60.9±7.1)%〕。γδT细胞经不同浓度的舒林酸诱导后培养上清液中IL-12和TNF-α浓度没有差异;舒林酸在8μmol/L时上清液中IFN-γ浓度达最高〔(246.1±20.7)ng/L〕,明显高于对照组〔(196.1±13.2)ng/L〕;当舒林酸浓度达32μmol/L时,γδT细胞分泌的3种细胞因子明显低于对照组,两者比较有显著性差异(P<0.05)。γδT细胞经舒林酸诱导后杀伤SGC-7901和BCG-823细胞活性在8μmol/L时达到峰值,此时对SGC-7901和BCG-823的杀伤活性分别为(73.6±3.9)%和(76.3±3.9)%,与对照组〔(60.1±3.7)%和(59.2±4.5)%〕比较有明显差异(P<0.05)。结论舒林酸诱导后γδT细胞杀伤SGC-7901和BCG-823活性明显增高的机制可能与γδT细胞表达穿孔素和粒酶B及分泌的IFN-γ有关。
- 刘军权陈复兴巩新建张宝福张颂吕小婷陶征中李佚张娟
- 关键词：ΓΔT细胞舒林酸穿孔素NKG2D
- 根皮素对人γδT细胞杀伤胃癌SGC-7901细胞的影响及机制探讨被引量：9
- 2011年
- 目的：探讨根皮素对人γδT细胞杀伤胃癌SGC-7901细胞的影响及其机制。方法：IPP法扩增人外周血γδT细胞,不同浓度的根皮素作用于γδT细胞及胃癌SGC-7901细胞48小时后,MTT法检测γδT细胞及SGC-7901细胞的生长曲线,FCM检测γδT细胞PFP及GraB的表达;LDH释放法检测γδT细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性;Western blot检测γδT细胞中Wnt3a的表达情况。结果：IPP作用10天后,γδT细胞比例由3.12%增加到79.6%。与对照组比较,浓度2.3518.75μg/ml的根皮素作用后γδT细胞的增殖率显著提高（P〈0.05）,75μg/ml根皮素对SGC-7901细胞生长抑制率显著提高（P〈0.05）,且2.3575μg/ml根皮素作用后的γδT细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性明显增强（P〈0.05）,γδT细胞中PFP、GraB及Wnt3a的表达较对照组显著增加（P〈0.05）。结论：根皮素能够增强γδT细胞对SGC-7901细胞的杀伤作用,其机制可能与根皮素促进γδT细胞的增殖,提高γδT细胞PFP、GraB表达及活化Wnt信号通路有关。
- 刘刚陈复兴刘军权吕小婷费素娟
- 关键词：ΓΔT细胞胃癌杀伤活性
