国家重点实验室开放基金(10-10)
- 作品数：7 被引量：17H指数：3
- 相关作者：李东亮王国红尹雅玲侯软玲魏林郁更多>>
- 相关机构：新乡医学院复旦大学上海医学院新乡医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金河南省科技发展计划项目河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脂多糖刺激N9小胶质细胞释放炎性因子的时间和剂量效应被引量：3
- 2013年
- 目的研究脂多糖刺激N9小胶质细胞释放炎性因子的时间和剂量效应。方法不同剂量脂多糖刺激N9小胶质细胞,在不同时间点,酶联免疫吸附试验检测培养基中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,硝酸还原酶法检测培养基中一氧化氮(NO)水平,Western blot检测细胞质和细胞核中核转录因子-κB(NF-κB)蛋白水平。结果刺激6、12 h后,各脂多糖组培养基中IL-1β和NO水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),刺激24 h后1 000、10 000μg.L-1脂多糖组培养基中的IL-1β和NO水平均较对照组升高(P<0.01)。刺激30 min后,各脂多糖组培养基中TNF-α水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),刺激6、24 h后,各脂多糖组培养基中TNF-α水平均较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.01),且1 000μg.L-1脂多糖组TNF-α水平最高。Westernblot检测结果显示,各脂多糖组细胞质和细胞核内NF-κB蛋白水平较对照组显著增多(P<0.01),其中1 000μg.L-1脂多糖组细胞质和细胞核中NF-κB蛋白水平最高。结论 1 000μg.L-1脂多糖是激活N9小胶质细胞诱发其炎症反应的最佳剂量,脂多糖作用6 h主要促进TNF-α的释放,作用24 h后则IL-1β和NO的释放明显增加。
- 王国红王颖侯软玲尹雅玲魏林郁李东亮
- 关键词：脂多糖白细胞介素1Β肿瘤坏死因子Α
- 不同氧糖剥夺时间和不同介质对N9小胶质细胞活力的影响被引量：2
- 2011年
- 目的研究不同氧糖剥夺(OGD)时间和不同介质对N9小胶质细胞活力的影响,以建立体外小胶质细胞的OGD模型。方法以平衡盐溶液(BSS)和无糖DMEM作为OGD介质,OGD 10、30和60 min并复氧复糖24 h后,倒置相差显微镜下观察N9小胶质细胞形态变化,四氮唑盐复合物(XTT)比色法检测细胞活力变化,比较分析不同OGD持续时间和不同介质产生的结果差异。结果氧糖剥夺/复氧复糖后,各OGD处理组不规则细胞比例增多,部分细胞发生皱缩,细胞轮廓不清,折光度较差,细胞密度减小。各BSS介质的OGD处理组与对照组相比,N9小胶质细胞的活力产生不同程度降低,差别均有统计学意义(P<0.01)。各OGD处理组相比,OGD 30 min组和OGD 60 min组细胞活力低于OGD 10 min组,差别有统计学意义(P<0.01)。各无糖DMEM介质的OGD处理组与对照组相比,N9小胶质细胞的活力产生不同程度降低,差别均有统计学意义(P<0.01),且随着OGD处理时间的延长,细胞活力逐渐减小,各OGD处理组间细胞活力差别有统计学意义(P<0.05)。OGD 10 min处理后,无糖DMEM介质组细胞活力比BSS介质组细胞活力高(P<0.01),OGD 30 min处理后,无糖DMEM介质组细胞活力仍比BSS介质组细胞活力高(P<0.05),OGD 60 min处理后,2组间差别无统计学意义(P>0.05)。结论 OGD处理后,N9小胶质细胞形态发生改变,细胞活力与OGD持续时间呈负相关,体外小胶质细胞的OGD模型制备成功。模型中,2种OGD介质对细胞活力影响的差别随着OGD处理时间的延长逐渐缩小并最终消失。
- 王国红侯软玲李东亮
- 关键词：氧糖剥夺细胞活力
- 三磷酸腺苷对N9小胶质细胞的损伤作用及机制研究
- 目的研究三磷酸腺苷对N9小胶质细胞的损伤作用及其机制。方法取对数生长期N9小胶质细胞,随机分为3组:①正常对照组:常规培养,不进行ATP处理;②ATP组:接种24h后行ATP处理;③KN-62干预组:KN-62孵育30m...
- 王国红郭直岳尹雅玲魏林郁李新娟李东亮
- 关键词：P2X7受体
- 文献传递
- 米非司酮对孕酮防护PC12细胞氧糖剥夺损伤的影响被引量：2
- 2013年
- 目的:观察孕酮核受体阻断剂米非司酮对孕酮防护大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)氧糖剥夺(OGD)损伤的影响,从而研究孕酮对氧糖剥夺PC12细胞的防护作用是否是核受体介导的基因效应。方法:运用XTT法、台盼蓝拒染色、氧化酶法检测米非司酮阻断孕酮核受体前后氧糖剥夺PC12细胞活力、活细胞数及培养基中糖含量的变化。结果:米非司酮显著消除孕酮对氧糖剥夺损伤PC12细胞的防护作用。结论:孕酮防护PC12细胞氧糖剥夺损伤的作用可能主要是通过核受体介导的基因效应实现的。
- 吴春平王国红张勇李东亮
- 关键词：米非司酮孕酮氧糖剥夺核受体
- 孕酮对缺氧缺血新生鼠脑皮质HIF-1α表达的影响
- 2012年
- 目的:探讨孕酮(PROG)对缺氧缺血性新生鼠脑组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法:7日龄SD大鼠80只随机分成4组(n=10):正常对照组,假手术组,缺氧缺血组和孕酮组,动物造模成功24 h后处死动物,应用RT-PCR和免疫组织化学方法观察各组新生鼠大脑皮质中HIF-1α表达的变化。结果:孕酮组HIF-1αmRNA及HIF-1α蛋白表达均明显高于其他三组(P<0.01)。结论:孕酮对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用可能与其上调HIF-1α的表达有关。
- 白瑞樱刘雪琴王湜卿李东亮
- 关键词：孕酮缺氧缺血性脑损伤新生鼠低氧诱导因子-1Α
- 氯化钴诱导化学缺氧对N9小胶质细胞的损伤作用及机制被引量：8
- 2013年
- 目的研究氯化钴(CoCl2)对N9小胶质细胞的损伤作用及机制。方法不同剂量CoCl2处理N9小胶质细胞后,XTT法检测细胞活力;倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;硫代巴比妥酸(TBA)显色法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)含量;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期变化。结果 CoCl2(50～1 000μmol.L-1)处理24 h后,细胞活力明显降低(P<0.01),且呈剂量依赖性。细胞形态发生明显改变,部分细胞出现皱缩、破碎,细胞密度减小,随CoCl2剂量增大,细胞形态损伤程度进一步恶化。MDA含量检测结果显示,氯化钴处理后,细胞上清液中MDA含量明显增多(P<0.05)。Hoechst 33258染色结果显示,氯化钴处理组的细胞凋亡比例较对照组明显增多(P<0.01),且比例随CoCl2剂量增大而增多。细胞周期检测结果显示,CoCl2可使细胞周期阻滞于G1/G0期。结论 CoCl2可呈剂量依赖性损伤N9小胶质细胞,机制与诱导细胞凋亡、引发氧化应激反应及细胞周期阻滞有关。
- 王国红毕凌云李超堃侯软玲尹雅玲李东亮
- 关键词：氯化钴化学缺氧细胞损伤
- 三磷酸腺苷对N9小胶质细胞的损伤作用及其机制被引量：3
- 2012年
- 目的:研究三磷酸腺苷(ATP)对N9小胶质细胞的损伤作用及其机制。方法:取对数生长期N9小胶质细胞,随机分为3组:(1)正常对照组:常规培养,不进行ATP处理;(2)ATP组:接种24 h后行ATP处理;(3)KN-62(P2X7受体阻断剂)干预组:KN-62孵育30 min后行ATP处理,且KN-62存在于ATP作用整个过程。XTT法测各组N9小胶质细胞的活力;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;细胞免疫荧光检测P2X7受体表达;Western blotting检测细胞P2X7受体蛋白水平;ELISA检测细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)含量。结果:500μmol/L ATP和1 mmol/L ATP对细胞活力损伤程度较小,作用24 h后,细胞活力仍可达88.5%±5.5%和88.2%±8.4%。当ATP浓度达到或高于2 mmol/L时,细胞活力迅速降低,细胞发生皱缩,且随ATP作用时间延长,细胞活力逐渐降低,细胞密度逐渐减少,细胞皱缩程度加重,而KN-62干预后细胞活力较ATP组明显增多,细胞密度及形态明显好于ATP组。细胞周期及凋亡检测结果显示,ATP可使细胞周期阻滞于S期,细胞凋亡比例明显较对照组增多(P<0.01),KN-62干预可显著减轻ATP引起的细胞周期阻滞,细胞凋亡比例显著减少(P<0.01)。免疫荧光显示,ATP及KN-62干预对N9小胶质细胞上P2X7受体的表达分布没有影响。Western blotting显示,正常对照组、ATP组及KN-62干预组间P2X7受体蛋白水平没有明显差异(P>0.05)。ELISA结果显示,ATP及KN-62干预对IL-1β的释放没有作用。结论:高剂量ATP可诱发N9小胶质细胞损伤,其机制可能与P2X7受体介导的细胞周期阻滞和细胞凋亡有关,而与小胶质细胞的炎症反应无关。
- 王国红郭直岳尹雅玲魏林郁李新娟李东亮
- 关键词：三磷酸腺苷小胶质细胞
- 孕酮保护氧糖剥夺PC12细胞是基因效应吗?
- ＜正＞尽管脑外伤、脑卒中的治疗现状不容乐观,但孕酮带给人们期待的希望。遍及全球25个独立实验室,用22种不同的损伤模型,在细胞、形态和功能方面都证明孕酮可产生可靠、恒定的神经保护作用。然而,孕酮对缺氧缺血脑细胞的保护是通...
- 吴春平沈慧李娜张勇王国红李超堃路承彪李东亮
- 文献传递
- 三磷腺苷损伤PC12细胞的剂量和时间依赖性观察
- 2012年
- 目的探讨细胞外三磷腺苷(ATP)对PC12细胞损伤作用的剂量和时间依赖性特点。方法将对数生长期的PC12细胞分别用0.00、0.03、0.10、0.30、0.50、1.00、2.00、3.00、5.00、7.00和9.00 mmol·L-1ATP处理3 h后,光学显微镜下观察细胞形态的变化,甲氮甲唑蓝(XTT)比色法检测细胞死亡率,锥虫蓝染色检测细胞存活率。将对数生长期的PC12细胞分别在7.00 mmol·L-1ATP作用0、1、2、3、6、12、24 h时,用XTT比色法检测细胞死亡率。结果 (1)XTT比色法检测结果显示,0.03、0.10、0.30、0.50、1.00和2.00 mmol·L-1ATP组PC12细胞死亡率与0.00 mmol·L-1ATP组比较差异无统计学意义(P>0.05)。随着浓度升高,ATP诱导PC12细胞死亡作用逐渐增强,3.00、5.00、7.00和9.00 mmol·L-1ATP明显增加细胞的死亡率,与0.00 mmol·L-1ATP组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)锥虫蓝染色检测结果显示,0.03、0.10、0.30、0.50和1.00 mmol·L-1ATP组细胞存活率与0.00 mmol·L-1ATP组比较差异无统计学意义(P>0.05);2.00、3.00、5.00、7.00和9.00 mmol·L-1ATP组细胞存活率与0.00 mmol·L-1ATP组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。(3)XTT法检查7.00 mmol.L-1ATP处理细胞死亡率显示,1、2 h组与0 h组比较差异有统计学意义(P<0.05),3、6、12、24 h组与0 h组比较差异更显著(P<0.01),3、6、12、24 h组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ATP对PC12细胞毒性作用具有剂量和时间依赖性特点。
- 张勇吴春平李娜李东亮
- 关键词：三磷腺苷PC12细胞
