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人类红细胞膜带3蛋白C端域Lys892～Phe895在Cl^-转运过程中作用的研究被引量：6: 2003年; 采用酵母表面展示系统 ,表达带 3蛋白膜段结构域 (Gln4 0 4～Val911)至酵母细胞膜 ,功能研究表明 ,表达后的膜段结构域具有离子转运的活性 ,同时 ,带 3蛋白抑制剂 4 ,4′ 二异硫氰 2 ,2′ 二黄酸芪 (DIDS)能够抑制其离子转运的功能 .利用PCR方法 ,以 pFAST Bac mdb3为模板扩增出带 3蛋白膜段结构域的 4种截断突变体 ,分别去除带 3蛋白C端域后 4个 (Ala90 8～Val911)、 16个 (Asp896～Val911)、 2 0个 (Lys892～Val911)、 32个(Asn880～Val911)氨基酸序列 ,测序后将其克隆至表达载体 pYD1上 ,构建酵母表达质粒 pYD1 Trunc4、pYD1 Trunc16、pYD1 Trunc2 0和 pYD1 Trunc32 ,诱导 4组突变体的蛋白质表达 .然后测定Cl-的转运活性 ,结果发现去除后 2 0个 (Lys892～Val911)氨基酸残基后 ,离子转运活性明显下降 ,而去除后 32个 (Asn880～Val911)后 ,离子转运没有进一步下降 ,说明Lys892～Phe895 4个氨基酸残基在带; 刘利梅傅国辉王天英姜晓姝郭卓维史从宁; 关键词：带3蛋白

GST-p16融合蛋白的表达、纯化及鉴定: 2004年; 目的　利用GST融合基因表达系统表达、纯化及鉴定GST p16融合蛋白。方法　以质粒pM p16为模板 ,扩增出p16基因片段 ,将其克隆至大肠杆菌表达载体pGEX 6P 1,将所构建的重组质粒pGEX p16转化大肠杆菌BL2 1并诱导表达 ,采用GST蛋白纯化系统进行纯化 ,所得产物进行SDS PAGE及Westernblot鉴定。结果　大肠杆菌细胞经诱导高效表达出约 4 2kD蛋白 ,其分子量与GST p16融合蛋白相符。Westernblot结果显示该蛋白能够被p16抗体特异性识别。结论　本实验在大肠杆菌表达系统中高效表达了有活性的GST; 史从宁吕凤祥王天英郭卓维傅国辉; 关键词：P16 WESTERN BLOT

阴离子交换蛋白1在HEK293t细胞中的高效表达与鉴定: 2005年; 目的　在人胚肾HEK2 93t(2 93t)细胞高效表达具有阴离子转运活性的阴离子交换蛋白1(AE1)。方法　用传统磷酸钙转染法将质粒pRBG4- AE1转入2 93t细胞,免疫荧光及Westernblotting验证蛋白表达及正常的细胞膜定位后,应用6 - 甲氧基- N- (3- 磺丙基)喹啉铵(SPQ)观察表达的AE1是否具有阴离子转运活性。结果　在2 93t细胞中,显示AE1高效表达。转染pRBG4 - AE1后2 93t细胞相对于正常以及转染空载体对照组的阴离子交换功能明显增强。结论　利用传统磷酸钙转染法,在2 93t可高效表达具有正常跨膜拓扑结构及阴离子转运活性的AE1,为进一步研究其相关功能奠定了基础。; 席玉慧白淑芝傅国辉; 关键词：蛋白表达

放疗对恶性肿瘤患者红细胞膜带3蛋白表达和功能的影响被引量：2: 2006年; [目的]研究放疗对恶性肿瘤患者红细胞膜带3蛋白的表达和功能的影响。[方法]随机抽取8例恶性肿瘤患者并取其治疗前后的红细胞,应用Clˉ荧光探针6-甲基-3-磺丙基-1-喹啉-水化合物(SPQ)检测其治疗前后红细胞膜带3蛋白的阴离子转运活性,并通过Westernblot检定治疗前后带3蛋白表达量的变化。[结果]8例恶性肿瘤患者放疗后红细胞膜带3蛋白的离子转运活性均明显减弱,其中6例患者红细胞膜带3蛋白表达减少。[结论]带3蛋白的表达和功能与肿瘤细胞的增殖和凋亡相关。; 刘晓滨吴昊白淑芝姜晓姝傅国辉; 关键词：带3蛋白肿瘤放射疗法

恶性肿瘤患者红细胞膜带3蛋白表达及其对K562细胞生长的影响被引量：3: 2005年; 背景与目的:带3蛋白介导Cl-/H CO3-的跨膜交换,从而调节细胞内pH值。有学者证实,Cl-/H CO3-交换的异常可引起细胞内pH值明显改变,使细胞发生增殖或凋亡。本研究旨在探讨红细胞膜带3蛋白的表达及其对K562细胞生长的影响。方法:以SPQ为荧光探针测定8例恶性肿瘤患者红细胞膜带3蛋白的阴离子转运活性,W estern blot检测带3蛋白表达。转染带3蛋白膜段结构域cDNA至K562细胞,观察带3蛋白膜段结构域表达后对K562细胞阴离子转运活性及细胞增殖的影响。结果:7例恶性肿瘤患者红细胞膜带3蛋白的离子转运活性明显增强,5例蛋白质表达增强。同时发现带3蛋白膜段结构域表达于K562细胞膜后,对K562细胞生长有一定促进作用。结论:带3蛋白在部分恶性肿瘤患者红细胞膜表达增强,可作为恶性肿瘤的一种潜在标志物。; 白淑芝刘晓滨席玉慧王天英傅国辉; 关键词：带3蛋白肿瘤

带3蛋白6种跨膜截断体阴离子转运功能的研究被引量：1: 2004年; 目的　探寻带 3蛋白膜段域不同跨膜片段在带 3蛋白离子转运过程中的作用。方法　构建编码带 3蛋白膜段域片段的重组质粒 ,将其转入酵母细胞诱导表达 ,并以蛋白免疫印记及荧光探针的方法检测目的蛋白。结果　拥有前 1 0个跨膜α螺旋的带 3蛋白片段TM1 1 0具有氯离子转运活性 ,而TM1 8,TM1 9则完全失去功能。此外 ,删除C末端后 1 6个氨基酸的带 3蛋白膜段域片段功能与拥有全长膜段域的带 3蛋白相仿。结论　TM1 0在带; 郭卓维史从宁吕凤祥王天英傅国辉; 关键词：阴离子转运功能氨基酸

p16蛋白过表达对哺乳动物细胞带3蛋白阴离子交换功能的影响被引量：3: 2004年; 目的 :研究p16过表达对HeLa细胞带 3蛋白 (band 3)阴离子交换功能的影响。方法 :细胞免疫组织化学法检测HeLa细胞中p16和带 3蛋白的表达。采用PCR方法将p16cDNA亚克隆到pEGFP -C1上 ,经双酶切和DNA测序鉴定后将其转染HeLa细胞 ,在荧光显微镜下观察细胞转染效率。应用 6甲基 - 3-磺丙基 - 1-喹啉 -水化合物 (SPQ)荧光探针检测带 3蛋白的阴离子交换功能。结果 :在HeLa细胞中p16和带 3蛋白表达均为阳性。双酶切和DNA测序结果证明所扩增的p16cDNA序列与报道序列相同。细胞转染后在荧光显微镜下可观察到 6 0 %以上的细胞发出荧光。转染pEGFP -C1-p16后细胞的阴离子交换功能增强。结论 :p16对HeLa细胞带 3蛋白的阴离子交换功能有促进作用。; 田丽峰席玉慧白淑芝王天英姜晓姝钟志玖傅国辉; 关键词：蛋白质P16 HELA细胞

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