国家自然科学基金(30471866)
- 作品数：3 被引量：14H指数：3
- 相关作者：王宜强董晓光王瑶徐海峰陈焓更多>>
- 相关机构：山东省眼科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金青岛市科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠视网膜微血管内皮细胞的分离和培养被引量：7
- 2005年
- 目的探讨大鼠视网膜毛细血管内皮细胞(rat retinal capillary endothelial cells,RRCEC)的体外分离和选择性培养方法。方法采用单纯视网膜剪碎法获得的视网膜微血管碎片,结合0.25%胶原酶消化,经细胞筛网过滤,原代细胞悬液接种于纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)包被的培养皿中,培养液为含20%胎牛血清(FBS)、100×103U·L-1肝素钠、10mg·L-1碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的DMEM液。原代培养5～6d细胞较少时,采用机械除杂法进行细胞分离,而在传代时利用进行选择性消化和贴壁法除杂分离以获得较纯RRCEC。应用Ⅷ因子相关抗体通过免疫组化方法对所培养的RRCEC进行鉴定。结果大鼠视网膜组织经过胶原酶适当消化后,产生大量具有良好生长能力的微血管碎片,贴壁后可见RRCEC自微血管碎片中游出,融合后呈铺路石样单层生长。传代培养时5～6d可融合生长。选择性培养获得的RRCEC纯度高,能连续传代,保持性状不变。对Ⅷ因子相关抗体染色阳性。结论视网膜剪碎、胶原酶、FBS、bFGF、培养皿处理及机械除杂法分离,选择性消化和贴壁等应用可获得较纯的RRCEC,方便简单,具有良好的重复性。
- 陈焓董晓光陈楠王瑶王宜强
- 关键词：细胞培养内皮细胞视网膜微血管
- 高糖对人视网膜色素上皮细胞Na-K-ATP酶表达的影响被引量：3
- 2007年
- 目的观察高糖对人视网膜色素上皮(RPE)细胞Na-K-ATP酶基因与蛋白表达的影响。方法采用ARPE-19细胞,培养4周后分为高糖组(葡萄糖浓度30mmol/L)与对照组(葡萄糖浓度7mmol/L),继续培养2周、4周,RT-PCR法检测Na-K-ATP酶α1、Na-K-ATP酶β1的mRNA表达水平的变化,Western blot法检测Na-K-ATP酶β的蛋白表达情况。结果高糖抑制Na-K-ATP酶α1与β1的mRNA表达,2周、4周时α1与β-actin光密度比值分别为0.17、0.23,对照组分别为0.37、0.36;β1与β-actin光密度比值分别为0.69、0.41,对照组分别为0.98、0.83;Na-K-ATP酶β蛋白表达水平较对照组降低,2周、4周时与β-actin的比值分别为0.51、0.25,对照组分别为0.65、0.68。结论高糖环境下人RPE细胞Na-K-ATP酶基因与蛋白表达水平降低,可能参与了黄斑水肿的发生。
- 徐海峰王宜强王瑶董晓光
- 关键词：视网膜色素上皮细胞糖尿病黄斑水肿
- 曲安奈德对人视网膜色素上皮细胞活性与屏障功能的影响被引量：4
- 2005年
- 目的观察曲安奈德(TA)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞活性与屏障功能的影响。方法用ARPE-19细胞,96孔板中培养至4周,加入不同浓度的TA(0.02、0.05mg/ml),继续培养3d或7d,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;将细胞培养在多聚酯滤膜上,4周时记录跨上皮电阻(TER),然后分别在培养液中加入0.02、0.05mg/mlTA继续培养1周,再次测量TER,并以辣根过氧化物酶(HRP)作示踪剂、酶联免疫吸附试验(ELISA)法评价不同浓度TA组ARPE-19细胞的通透性。结果在含0.02mg/mlTA培养液中培养3d或7d,细胞平均存活率分别为93.70%和90.63%,其细胞活性与对照组相比,差异无统计学意义(P=0.147,0.091);在含0.05mg/mlTA培养液中培养相同时间后,细胞活性较对照组显著降低(平均存活率为87.75%、88.98%;P=0.025,0.043);经过1周培养,2个处理组的TER与对照组相比均有极显著降低(P均<0.001);两个处理组HRP的通透性均显著高于对照组(0.001
- 徐海峰王宜强王瑶董晓光
- 关键词：色素上皮药物作用曲安奈德视网膜细胞活性通透性
