国家自然科学基金(30471879)
- 作品数：20 被引量：67H指数：5
- 相关作者：龚树生罗凌惠谢静薛秋红鄢开胜更多>>
- 相关机构：华中科技大学首都医科大学武汉科技大学附属医院更多>>
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- 凋亡相关基因与中耳胆脂瘤
- 2008年
- 中耳胆脂瘤是慢性化脓性中耳炎的一种类型，其特征是中耳腔内存在高度增殖的角化鳞状上皮和邻近骨质的破坏以及细胞的加速凋亡。以往关于中耳胆脂瘤的研究主要集中于上皮细胞的高度增生和骨质破坏等方面，而有关中耳胆脂瘤细胞凋亡的报道较少，本文就几种凋亡相关基因在中耳胆脂瘤细胞凋亡中的作用研究做一综述。
- 李泽文王国鹏杨志敏龚树生
- 关键词：细胞凋亡基因
- 强噪声暴露下豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡及Caspase-3的表达被引量：10
- 2007年
- 目的探讨强噪声能否诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞(sprial ganglion cell,SGC)的凋亡及SGC的凋亡是否与凋亡蛋白酶Caspase-3信号转导有关。方法选用健康雄性白色豚鼠20只,随机分为4组,每组5只,其中3组为实验组,1组为对照组。将实验组动物暴露于4kHz、120dB SPL窄带噪声中4h,分别测试噪声刺激停止后1、4、14d及对照组豚鼠听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)。通过透射电镜和脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(ternial-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeing,TUNEL),检测SGC凋亡细胞,免疫组织化学方法检查Caspase-3蛋白的表达。结果透射电镜观察发现实验组SGC出现了凋亡细胞的特征性改变。实验组SGC的TUNEL染色明显增强,Caspase-3的表达增高,与对照组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论强噪声可以诱导SGC凋亡;SGC凋亡与caspase-3的激活有关。
- 薛秋红陈佳龚树生谢静罗凌惠
- 关键词：螺旋神经节细胞细胞凋亡强噪声CASPASE-3
- Fas和caspase-8信号通路在外周听觉系统老化中的作用和机制研究
- 2008年
- 目的检测老年大鼠耳蜗Fas受体及caspase-8mRNA表达水平变化，研究细胞死亡受体途径在外周听觉系统老化中的作用和机制。方法以老年Wistar大白鼠（20～22月龄）及成年Wistar大白鼠（2～3月龄）各10只为实验对象，采用半定量逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerasechain reaction．RT-PCR）的方法检测耳蜗组织Fas受体及caspase-8基因mRNA的含量。结果老年组耳蜗组织Fas受体及caspase-8mRNA的表达水平均高于成年组，差异均有显著统计学意义（P〈0．01）。结论老年大鼠耳蜗Fas及caspase8表达明显升高，说明耳蜗的老化与fas途径的凋亡密切相关；Fas及caspase-8信号通路增强可能在老年性聋发病机制中有重要作用。
- 罗凌惠龚树生
- 关键词：FAS受体耳蜗半定量逆转录聚合酶链反应
- 腺病毒介导bcl-2基因转染对顺铂所致大鼠螺旋神经节细胞损伤的拮抗作用被引量：4
- 2009年
- 目的通过腺病毒（adenovirus，Ad）载体介导bcl-2基因转染体外培养的新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞（spiral ganglion cells，SGC），探讨bcl-2蛋白过度表达对顺铂所致SGC损伤的拮抗作用。方法体外培养新生大鼠SGC，携带绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）基因的腺病毒载体Ad—GFP转染SGC，并行神经丝蛋白（NF200）免疫细胞化学染色鉴定，激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察。携带bcl-2基因的腺病毒载体Ad—bcl-2转染SGC，蛋白质印迹法（WesternBlot）检测bcl-2蛋白表达。设立Ad—bcl-2转染加顺铂组（A组），Ad．GFP转染加顺铂组（B组），顺铂组（C组）和正常对照组（D组），顺铂作用浓度为2ug/ml；NSt3作用48h后，行各组SGC计数，并通过ImageJ软件测量各组SGC轴突长度。结果成功分离并培养新生大鼠SGC。激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察到腺病毒载体可安全高效转染体外培养的SGC。Ad—bcl-2转染3d后，Western Blot检测有外源性人bcl-2基因的高效表达，而Ad—GFP转染组和顺铂组未检测到表达。顺铂作用后。A、B、C组部分SGC细胞突起变短、萎缩，胞体缩小、变圆，甚至浮起。A组SGC数目明显多于B组和C组（P值均〈0．01），但少于D组（P〈0．05）；A组SGC轴突长度明显长于B组和C组，但短于D组（P值均〈0．01）。结论腺病毒能够安全高效地转染体外培养的新生大鼠SGC。bcl-2蛋白过表达对顺铂所致SGC损伤有一定的拮抗作用。
- 王国鹏谢静刘英鹏罗凌惠鲁海涛董继华龚树生
- 关键词：腺病毒科转染螺旋神经节基因BCL-2顺铂
- 鼠尾胶原在原代培养耳蜗血管纹边缘细胞中的应用被引量：5
- 2006年
- 目的:建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。方法:制作鼠尾胶原,并观察利用自制的鼠尾胶原所培养出大鼠耳蜗边缘细胞的效果。结果:自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞,细胞角蛋白18表达阳性,免疫组织化学结果和扫描电镜证实所培养的细胞具有典型的分泌上皮细胞特征。结论:成功建立了利用自制鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法,并且制作简便,成本低廉。
- 鄢开胜罗凌惠付勇陈广理龚树生
- 关键词：耳蜗血管纹细胞培养鼠尾胶原
- 微量元素硒对噪声性聋防护作用的实验研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨微量元素硒(Se)对豚鼠噪声性听力损伤的保护作用。方法雄性杂色豚鼠40只,体重250～350g,随机分为正常对照组、Se组、Nacl+噪声组和Se+噪声组,每组10只。正常对照组不作任何处理,Se组仅连续5d腹腔注射亚硒酸钠(Na2SeO30.7mg/kg,1次/d),Nacl+噪声组在噪声暴露前连续5d腹腔注射等量生理盐水(0.9%Nacl),Se+噪声组在噪声暴露前连续5d腹腔注射Na2SeO3,均为每日1次。采用窄带噪声,中心频率4kHz,强度为120dBSPL,持续4h。所有动物均于噪声暴露前行脑干诱发电位检测(ABR);噪声暴露后每组各取5只立即断头处死,取出双侧耳蜗测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,各组剩余的5只于1、10d后测ABR,最后一次测完ABR后处死,取基底膜铺片染色。结果 Nacl+噪声组和Se+噪声组于1、10d后的ABR阈值较噪声暴露前有明显提高,差异有统计学意义;Nacl+噪声组在噪声暴露前后的阈移较Se+噪声组高,差异有统计学意义。Se组的GSH-Px活性比正常对照组及Se+噪声组比Nacl+噪声组高,差异有统计学意义。耳蜗基底膜铺片可见Nacl+噪声组和Se+噪声组中的凋亡、坏死和缺失的细胞,Nacl+噪声组的受损率高于Se+噪声组,具有统计学差异。结论硒能增加耳蜗组织中GSH-Px的活性,而GSH-Px作为一种抗氧化酶可能中和一部分因噪声刺激而产生的氧自由基/活性氧,对噪声性耳蜗损伤具有一定的防护作用。
- 李泽文龚树生何源萍杨志敏丁珠华
- 关键词：亚硒酸钠噪声性聋脑干听觉诱发电位谷胱甘肽过氧化物酶活性
- 氧化损伤与噪声性听力损失被引量：1
- 2008年
- 噪声性聋是一种常见的职业病，随着人们对该疾病认识的逐渐深入，针对其发病机制也提出了不同的防治方法。现就目前已得到大多数学者认同的氧化损伤机制及针对该机制的一些防治措施做一综述。
- 李泽文龚树生曾旭东杨志敏
- 螺旋神经节细胞无血清培养方法的研究被引量：11
- 2006年
- 目的:通过对比不同培养条件下螺旋神经节细胞(SGCs)的生长特性,从而确定一种可以获得足够数量和纯度的SGCs体外培养的最佳方法。方法:采用出生3d内的SD大鼠,取螺旋神经节组织,观察有血清培养基及无血清培养基,加或不加阿糖胞苷(Ara-C)对体外培养SGCs纯度及活性的影响。免疫组织化学鉴定培养的螺旋神经节细胞。结果:使用DMEM/F12培养基及B27添加剂,联合5μmol/L Ara-C作用48h,能有效抑制非神经细胞增殖,得到比较纯的SGCs。通过hochest33258及PI双标,发现Ara-C对SGCs毒性较小。得到的细胞经免疫组织化学抗神经丝蛋白抗体证实为SGCs。结论:本实验建立的方法,所获得的SGCs纯度较高,细胞活性保持良好,为体外研究外周听觉系统疾病提供了重要方法。
- 罗凌惠龚树生宋鹏鄢开胜
- 关键词：螺旋神经节神经元原代培养
- 腺病毒介导Bcl-2基因对原代螺旋神经节细胞存活的促进作用被引量：3
- 2008年
- 目的研究外源性细胞凋亡相关基因Bcl-2对原代培养的螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGCs)存活及突起生长的影响,以期找到保护SGCs的有效方法。方法大鼠螺旋神经节细胞原代培养,免疫印迹法(western blot)检测转染AdEasy系统构建携带Bcl-2和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)的腺病毒后SGCs表达Bcl-2蛋白的水平。免疫细胞组织化学染色鉴定螺旋神经节细胞,计数SGCs的数目。结果AdEGFP/Bcl-2组SGCs的存活数目分别高于AdEGFP组及空白对照组,AdEGFP组的存活SGCs细胞数略少于空白对照组。结论Bcl-2蛋白能促进体外SGCs细胞存活,腺病毒本身有轻微的细胞毒性,但表达外源性Bcl-2基因却可以保护SGCs不受腺病毒细胞毒性损害。
- 罗凌惠龚树生
- 关键词：基因,BCL-2螺旋神经节
- 谷氨酸对体外培养螺旋神经节细胞的损伤作用被引量：5
- 2006年
- 目的:探讨谷氨酸对体外原代培养的大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGC)兴奋性毒性作用。方法:SGC在体外培养4d,加入1mmol/L谷氨酸,继续培养24h后,用荧光显微镜观察Annexin-V-FITC和PI双标的细胞形态改变,以及用激光共聚焦方法观察细胞内游离钙离子浓度的变化。结果:体外培养4d的SGC,用1mmol/L谷氨酸处理24h后,与对照组相比,出现大量的细胞受损,表现为死亡或凋亡(P<0.05);用Fluo-3染色,激光共聚焦显微镜观察,加入谷氨酸后,80%的SGC细胞内钙离子迅速增加,150s达到高峰。结论:谷氨酸诱导的SGC钙离子内流与细胞受损有明显的关系。
- 鄢开胜薛秋红罗凌惠龚树生
- 关键词：谷氨酸细胞培养螺旋神经节细胞
