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乙型脑炎病毒E蛋白基因真核表达载体pEGFP-C1-JEV的构建及在BHK-21细胞中表达: 2012年; 目的构建乙脑病毒E蛋白基因片段的真核表达载体pEGFP-C1-JEV，旨在研究E蛋白基因在BHK-21细胞中的瞬时表达情况，为进一步深入研究提供基础资料。方法通过liT—PCR扩增目的基因，酶切并重组后成功构建绿色荧光蛋白标记的pEGrP—C1-JEV重组表达载体，利用脂质体介导将重组质粒转染BHK-21细胞，观察绿色荧光标记蛋白表达情况，同时提取细胞RNA，检查目的基因转录表达情况，并利用免疫组化和Westernblot法检测目的基因表达情况、表达蛋白在细胞中的定位以及表达蛋白抗原性。结果重组质粒pEGrP—C1-JEV构建成功，转染至BHK-21细胞中，绿色荧光标记蛋白正常表达，表达率较高，RT-PCR表明目的基因在BHK-21正常转录并表达，表达蛋白主要分布在BHK-21细胞的胞质和包膜中，且能与豚鼠抗JEV抗体特异性结合。结论pEGFP-C1-JEV质粒在BHK-21细胞中正常表达，且对细胞生长和形态不产生影响，真核表达抗原具有良好的抗原性，本研究可为进一步探讨乙型脑炎E蛋白基因体外真核表达及其功能和应用的研究提供基础资料。; 冯若飞张晓媛林贵鸿乔自林凡静静李向茸张海霞樊得英马忠仁; 关键词：乙型脑炎病毒绿色荧光蛋白真核表达

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甘肃省中青年科技研究基金(0806RPA008)