国家自然科学基金(30671865)
- 作品数：4 被引量：19H指数：2
- 相关作者：马永平宋方洲刘革力姜柯安王荣荣更多>>
- 相关机构：重庆医科大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人轮状病毒vp4全基因原核穿梭表达质粒的构建及鉴定被引量：8
- 2011年
- 目的构建人轮状病毒(Rotavirus,RV)vp4全基因原核穿梭表达质粒,经大肠杆菌表达验证后转化入双歧杆菌。方法从pMD19-T simple-vp4质粒中扩增RV vp4全基因,克隆至pBEX载体中,构建重组表达质粒pBEX-vp4,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,电转化法将重组质粒转化入双歧杆菌,提取质粒,进行PCR及双酶切鉴定。结果重组表达质粒pBEX-vp4经酶切、PCR和测序证明构建正确;在大肠杆菌BL21(DE3)中可表达相对分子质量约87 000的重组VP4蛋白,表达量较低,以包涵体形式表达,可与羊抗人轮状病毒多克隆抗体特异性结合;经PCR及双酶切鉴定,重组质粒pBEX-vp4已成功转入双歧杆菌中。结论重组表达质粒pBEX-vp4可在大肠杆菌中表达RV VP4蛋白,并可经电转化法有效地将重组表达质粒转化入双歧杆菌,为下一步在双歧杆菌中进行表达及研制基于双歧杆菌表达系统的RV重组亚单位口服活疫苗奠定了基础。
- 李世彬李江贺志良姜柯安张璐渝刘革力马永平
- 关键词：轮状病毒疫苗VP4双歧杆菌
- 利用球孢链霉菌发酵液消化双歧杆菌细胞壁提取质粒的研究被引量：2
- 2008年
- 目的寻找一种经济适用的提取双歧杆菌质粒的方法。方法利用球孢链霉菌发酵产生的变溶菌素来消化双歧杆菌细胞壁,提取质粒,并与商业化溶菌酶法比较。结果球孢链霉菌发酵液与溶菌酶均成功提取到质粒。结论利用球孢链霉菌发酵液提取质粒经济简便。
- 罗耀玲黄雪萍武向梅丁嵩涛马永平宋方洲
- 关键词：双歧杆菌质粒
- LTB抗原表位PT8A与重组轮状病毒VP8~*亚单位疫苗融合后的免疫效应研究被引量：1
- 2018年
- 为评价LTB（大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位）抗原表位PT8A与人轮状病毒（rotavirus,RV）VP8＊基因融合后对VP8＊亚单位疫苗（VP8）免疫效果的影响,将PT8A分别融合到VP8＊基因的C-端和N-端,然后构建重组表达质粒p ET32a-PT8A-VP8和p ET32a-VP8-PT8A。表达的重组蛋白PT8A-VP8和VP8-T8A纯化后分别经鼻腔免疫BALB/c免疫小鼠,收集血清,间接ELISA法检测血清抗体水平。经测序鉴定,重组质粒p ET32a-PT8A-VP8和p ET32a-VP8-PT8A构建成功。6×His-VP8-PT8A、6×His-PT8A-VP8融合蛋白主要以包涵体形式表达,相对分子质量（Mr）约为34 k D。重组VP8-PT8A和PT8A-VP8表达成功,融合蛋白主要以包涵体形式表达。间接ELISA测量血清Ig G和肺s Ig A的滴度,与VP8组相比较,VP8＋LTB组和VP8-PT8A组OD值有显著性差异（p〈0.05）,PT8A-VP8组OD值没有显著性差异（p〉0.05）。即PT8A融合在VP8基因的C端后对重组轮状病毒VP8＊亚单位疫苗有显著性免疫佐剂活性。
- 陈思静王秋娟甘思杰马永平
- 关键词：轮状病毒抗原表位
- 重叠PCR法合成轮状病毒抗原基因VP4被引量：8
- 2009年
- 用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得轮状病毒VP4基因。根据Genbank中鼠VP4基因的序列设计34对引物,用overlap PCR法合成VP4全基因的两个片段A、B,将A、B分别连入pMD19-T simple载体,测序结果显示,成功合成了VP4全基因。证明了重叠延伸PCR法是获得目的基因的有效方法。
- 冉丹霞王荣荣郝亚宁宋方洲马永平
- 关键词：轮状病毒VP4基因重叠延伸PCR
