国家自然科学基金(30471888)
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
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- 相关机构：浙江大学医学院附属第二医院浙江大学浙江大学医学院附属口腔医院更多>>
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- 牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导THP-1细胞分泌IL-1β、TNF—α、IL-6能力及其相关Toll样受体的差异性被引量：2
- 2008年
- 目的探讨牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）脂多糖（LPS）诱导人单核-巨噬样细胞THP-1分泌IL-1β、TNF—α、IL-6能力及相关Toll样受体（TLR）的差异。方法采用酚水法提取赡ATCC33277株脂多糖（Pg-LPS），并用红外光谱法和鲎试验进行鉴定。采用ELISA试剂盒定量检测Pg—LPS作用的THP-1细胞分泌IL-1β、TNF-α和IL-6水平。采用TLR2或TLR4单克隆抗体阻断试验联合ELISA检测，了解Pg-LPS结合靶细胞上Toll样受体的类型。实验中采用大肠杆菌O111：B4株脂多糖（E—LPS）作为对照。结果1μg／ml Pg-LPS作用THP-1细胞，分别于0．5、6和6h检测分泌IL-1β、TNF-α和IL-6的水平明显升高（P〈0．01）；1μg／ml E—LPS作用THP-1细胞，分别于6、24和24h检测分泌IL-1β、TNF-α和IL-6水平亦明显升高（P〈0．01）。Pg—LPS和E—LPS诱生的上述细胞因子最高浓度相近（P〉0．05）。TLR2或TLR4单抗均可有效阻断Pg-LPS作用的THP-1细胞分泌IL-1β或IL-6（P〈0．05），但仅TLR2单抗显示了阻断TNF-α分泌的作用（P〈0．05）。E-LPS诱导THP-1细胞分泌上述3种细胞因子的活性仅可被TLR4单抗所阻断（P〈0．05）。结论Pg-LPS诱导THP-1细胞分泌IL-1β、TNF-α和IL-6活性略高于E—LPS，TLR2而非TLR4是Pg—LPS介导靶细胞分泌上述细胞因子的主要受体。
- 楼小戟张迪亚严杰李盛来陈莉丽
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌THP-1细胞TOLL样受体
- 牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人单核细胞株THP-1前列腺素E2合成通路的影响
- 2008年
- 目的探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖（lipopolysaccharide of Porphyromonas gingivalis，Pg-LPS）在诱导细胞前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）合成通路上是否具有不同于大肠杆菌脂多糖（lipopolysaccharide of Escherichia coli，Ec-LPS）的特点。方法用Pg-LPS和Ec-LPS分别作用于人单核细胞株THP-1，用酶免疫法检测PGE2的浓度。用液闪计数法观察花生四烯酸释放水平的变化。用反转录聚合酶链反应和Western blotting法分别检测胞质磷脂酶A：（cytosolic phospholipaseA2，cPLA2）、环氧化酶2（cyclooxygenase-2，COX-2）和微粒体前列腺素E合成酶1（microsomal prostaglandin Esynthase-1，mPGES-1）的mRNA和蛋白表达水平。结果Pg-LPS诱导PGE2合成和释放花生四烯酸的水平明显弱于Ec-LPS（P〈0．05）。PGE2水平增高在Pg-LPS作用6h出现，24h达峰值，为（221．40±29．46）ng／L；或Ec-LPS作用1～48h，为（161．80±17．31）～（379．80±37．35）ng／L。COX-2和mPGES-1的最高表达出现在Pg-LPS作用16h，或Ec-LPS作用8h和16h时。cPLA2的抑制剂AACOCF3可降低LPS诱导的花生四烯酸释放水平的增高，但对PGE2的合成无明显作用。COX-2阻断剂NS-398可显著减少PGE2产生。结论Pg-LPS对PGE2合成通路的作用弱于Ec-LPS。Pg-LPS作用下PGE2的合成主要是COX-2和mPGES-1表达增高所致，与cPLA2关系不大。
- 吴燕岷陈莉丽孙伟莲严杰
- 关键词：紫单胞菌脂多糖类地诺前列酮
- 牙龈卟啉菌脂多糖诱导HL-60细胞分泌IL-1β、TNF-α、IL-6能力及其相关Toll样受体和信号通路的差异
- 2007年
- 目的探讨牙龈卟啉菌(Porphyronumas gingivalis,Pg)脂多糖诱导人粒细胞HL-60分泌IL-1β、TNF-α、IL-6能力差异及其相关Toll样受体和信号通路。方法采用酚水法提取牙龈卟啉菌ATCC33277株脂多糖(Pg-LPS)。采用ELISA试剂盒定量检测Pg-LPS作用的HL-60细胞分泌IL-1β、TNF-α和IL-6水平。采用TLR2或TLR4单克隆抗体阻断试验联合ELISA检测,了解Pg-LPS结合靶细胞上Toll样受体的类型。采用JNK、P38MAPK和NF-κB通路特异性阻断剂的阻断试验联合ELISA检测,了解Pg-LPS诱导HL-60细胞分泌IL-1β、TNF-α和IL-6的相关胞内信号传导通路。实验中采用大肠杆菌O111:B4脂多糖(E-LPS)作为对照。结果1μg/ml Pg-LPS分别作用24、48和48 h或1μg/ml E- LPS分别作用48、48和72 h,HL-60细胞分泌的IL-1β、TNF-α和IL-6水平明显升高(P<0.01);Pg-LPS诱生的TNF-α最高浓度与E-LPS相近(P>0.05),但诱生的IL-1β和IL-6最高浓度明显高于E-LPS(P <0.05)。TLR2单抗可抑制Pg-LPS诱导HL-60细胞分泌IL-1β、TNF-α或IL-6的活性(P<0.05),但E- LPS诱导HL-60细胞分泌上述3种细胞因子的活性仅可被TLR4单抗所抑制(P<0.05)。Pg-LPS诱导HL-60细胞分泌IL-1β、TNF-α和IL-6的信号通路分别为JNK和NF-κB、JNK和P38MAPK及NF-κB、JNK和P38MAPK(P<0.05),E-LPS则分别为JNK和P38MAPK及NF-κB、P38MAPK和NF-κB、P38MAPK和NF-κB(P<0.05)。结论Pg-LPS诱导HL-60细胞分泌IL-1β、TNF-α和IL-6活性高于E-LPS。TLR2和TLR4分别可能是Pg-LPS和E-LPS的受体。Pg-LPS诱导HL-60细胞合成上述细胞因子的信号传导通路与E-LPS明显不同,不同细胞因子合成的胞内信号传导通路也不尽相同。
- 张迪亚严杰李盛来陈莉丽
- 关键词：牙龈卟啉菌脂多糖HL-60细胞信号传导通路
- 比较牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导THP-1和HL-60细胞分泌IL-1β能力及相关信号通路受体的差异被引量：2
- 2008年
- 目的探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis,Pg-LPS)诱导人单核巨噬细胞株THP-1和人粒细胞白血病细胞株HL-60分泌白介素-1β(interleukin,IL-1β)能力差异,并了解其相关Toll样受体。方法采用酚水法提取牙龈卟啉单胞菌ATCC33277株脂多糖(Pg-LPS)。采用ELISA试剂盒定量检测Pg-LPS作用的THP-1和HL-60细胞分泌IL-1β水平。采用TLR2或TLR4抗体阻断试验联合ELISA检测,了解Pg-LPS结合不同靶细胞上Toll样受体的类型。实验中采用大肠杆菌脂多糖(E-LPS)作为Pg-LPS对照。结果1μg/mlPg-LPS作用6h或1μg/mlE-LPS作用24h,THP-1细胞分泌的IL-1β水平明显升高(P<0.01),但Pg-LPS和E-LPS诱生的细胞因子最高浓度相近(P>0.05)。而1μg/mlPg-LPS作用24h或1μg/mlE-LPS分别作用48h,HL-60细胞分泌的IL-1β水平明显升高(P<0.01),且Pg-LPS诱生的最高浓度明显高于E-LPS(P<0.05),但HL-60细胞分泌的上述胞因子最高浓度均明显低于THP-1细胞(P<0.01);TLR2和TLR4抗体均可有效阻断Pg-LPS诱导THP-1细胞分泌IL-1β的活性(P<0.05),但仅发现TLR2抗体可阻断Pg-LPS诱导HL-60细胞分泌IL-1β的活性(P<0.05)。E-LPS诱导THP-1细胞或HL-60细胞分泌IL-1β的活性仅可被TLR4抗体所阻断(P<0.05)。结论Pg-LPS诱导THP-1和HL-60细胞分泌IL-1β高于E-LPS。TLR2和/或TLR4作为Pg-LPS受体取决于细胞种类。
- 李盛来张迪亚严杰陈莉丽
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌细胞IL-1Β
- Association between infection of different strains of Porphyromonas gingivalis and Actinobacillus actinomycetemcomitans in subgingival plaque and clinical parameters in chronic periodontitis被引量：4
- 2007年
- WU Yan-minYAN JieCHEN Li-liGU Zhi-yuan
- 关键词：口腔疾病传染病
- 牙龈卟啉菌蛋白酶基因rgpA与rgpB蛋白酶区的克隆和表达被引量：2
- 2008年
- 目的克隆牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)rgpA、rgpB蛋白酶区,构建rgpA、rgpB蛋白酶区原核表达系统。方法采用聚合酶链式反应(PCR)从PgATCC33277菌株中扩增rgpA、rgpB蛋白酶区,T-A克隆后测定核苷酸序列,构建pET42a的rgpA/rgpB蛋白酶区表达载体,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导其表达。结果所克隆的PgATCC33277菌株rgpA、rgpB基因蛋白酶区的核苷酸序列与报道的相应核苷酸序列同源性分别为98.9%、99.0%,氨基酸序列同源性分别高达99.2%、99.1%。pET42a-rgpA/rgpB-E.coli BL21DE3系统的蛋白表达量为细菌总蛋白的60%左右。结论本研究成功地构建PgrgpA、rgpB蛋白酶区高效表达系统,为测定RgpA、RgpB免疫原性及作用提供前提。
- 石卓瑾严杰陈莉丽
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌
- 牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导不同细胞分泌炎性细胞因子的差异性被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)脂多糖(LPS),诱导人口腔上皮细胞KB和人牙龈成纤维细胞HGF-1及人单核-巨噬样细胞THP-1,分泌炎性细胞因子的能力及其差异。方法:采用酚水法提取PgATCC33277株的脂多糖(Pg-LPS)。采用鲎试验和红外光谱对提取的Pg-LPS进行鉴定。采用ELISA试剂盒,定量检测不同浓度和时间Pg-LPS作用的上述3种细胞培养物上清中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8变化水平。实验中采用商品化大肠杆菌O111:B4脂多糖(E-LPS)为对照。结果:Pg-LPS和E-LPS凝固鲎试剂所需最低浓度均为15ng/ml,其红外光谱也极为相似。在Pg-LPS或E-LPS作用下,HGF-1细胞分泌的TNF-α和IL-1β水平呈单峰形增高(P<0.01),但THP-1细胞为持续性升高(P<0.01)。Pg-LPS或E-LPS具有促HGF-1和THP-1细胞持续性增强IL-6分泌的作用(P<0.01)。Pg-LPS和E-LPS均可诱导THP-1细胞增强IL-8的分泌(P<0.01),但对HGF-1细胞仅Pg-LPS有促IL-8分泌的效应(P<0.01)。Pg-LPS和E-LPS均不能诱导KB细胞分泌上述细胞因子。结论:Pg-LPS有很强的促靶细胞分泌多种炎性细胞因子的生物学活性,从而引发初始的局部炎症反应。Pg-LPS致炎作用与E-LPS相似,但诱导不同炎性细胞因子的模式颇有差异。KB细胞不能作为LPS致炎作用的效应靶细胞。
- 陈云芳严杰张迪亚陈莉丽
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌致炎作用
