国家自然科学基金(30971277)
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
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- 阿糖胞苷诱导人MDS细胞株MUTZ-8细胞凋亡过程中活性氧水平的变化被引量：3
- 2012年
- 目的探讨阿糖胞苷诱导人MDS细胞株MUTZ-8细胞凋亡的可能机制。方法将细胞分为以下5组:阴性对照组、0.1μmol/L Ara-c组、1μmol/L Ara-c组、10μmol/L Ara-c组、10μmol/L Ara-c+62.5μmol/L ALA组。用MTT法测定阿糖胞苷对各组细胞抑制率的影响,用Annexin V-FITC/PI双染法及Hoechst33258荧光染色观察阿糖胞苷对各组细胞凋亡的影响,并用流式细胞仪检测各组细胞线粒体膜电位的变化。运用二氢二氯荧光素(DCFH-DA)为细胞内活性氧探针,通过荧光显微镜及流式细胞仪检测各组细胞内活性氧水平的变化。结果 MTT结果提示,阿糖胞苷处理组细胞增殖抑制率高于阴性对照组,二者相比差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪结果提示,不同浓度的阿糖胞苷作用MUTZ-8细胞后,凋亡率明显升高,线粒体膜电位明显下降,与阴性对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪及荧光显微镜检测均显示,阿糖胞苷作用后细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)明显上升。而加入抗氧化剂α-硫辛酸后细胞内ROS表达水平下降。结论阿糖胞苷明显抑制了人MDS细胞株MUTZ-8的生长并诱导其凋亡,可能与阿糖胞苷影响了细胞内ROS水平有关。
- 罗静叶兴伟蒋文周洪静杨泽松刘林王利
- 关键词：细胞凋亡阿糖胞苷活性氧
- 重组人SPARC蛋白对SKM-1细胞生物活性的研究
- 2019年
- 富含半胱氨酸的酸性分泌性糖蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine, SPARC)在疾病细胞衰老过程中具有复杂且多效的生物学作用。然而, SPARC在继发性急性髓性白血病(secondary acute myeloid leukemia, sAML)中的作用尚未完全阐明。该研究旨在探讨人重组SPARC(rh-SPARC)对sAML的生物学及免疫调节相关作用。差示扫描量热法、CCK-8法、流式细胞术、蛋白质印迹分析(Western blot)和等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry, ITC)等评估rh-SPARC的特征和生物活性。结果表明, rh-SPARC蛋白以浓度依赖性方式抑制SKM-1而非K562细胞的增殖于细胞周期G0/G1期。rh-SPARC和Ara-C联合使用对SKM-1的增殖抑制更显著。ITC结果显示, rh-SPARC和Ara-C之间没有直接的相互作用。Western blot结果显示, rh-SPARC和Ara-C联合作用显著降低SKM-1中pAkt的相对表达水平。以上结果表明, rh-SPARC对白血病细胞具有选择抑制性, rh-SPARC和Ara-C之间存在协同作用, rh-SPARC通过降低Akt磷酸化,以增强SKM-1对Ara-C的敏感性。
- 潘晖周晓佳王利
- 关键词：SPARC阿糖胞苷
- 骨髓增生异常综合征的分子生物学研究进展被引量：4
- 2012年
- 骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)的发病机制目前尚不完全清楚,可能主要与MDS的高度异质性密切相关。研究显示,致病基因异常表达、表观遗传学异常及造血干细胞的异常等分子生物学改变都与MDS的发病密切相关。因此,本文拟对近年来发现的一些与MDS发病密切相关的分子生物学特性的改变作一综述。
- 罗静刘林王利
- 关键词：血液肿瘤
- RPS14基因RNAi慢病毒载体构建及在SKM-1细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 背景:有研究表明,造血干/祖细胞内RPS14表达减少可导致造血细胞病态造血,尤其是向红系分化受阻,提示RPS14的正常表达有助于维持机体的正常造血。目的:构建RPS14基因RNAi慢病毒载体,并观察该基因在人骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1细胞中的表达。方法:针对已经筛选确定的RPS14基因RNAi有效靶序列,构建GC-shRPS14慢病毒载体并测序鉴定。用GC-shRPS14、pHelper1.0载体和pHelper2.0载体共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,测定病毒滴度;并将获得的RPS14shRNA慢病毒载体GC-shRPS14转染人骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1,用Western Blot检测靶细胞内RPS14蛋白的表达。结果与结论:经测序证实,构建出了RPS14shRNA的慢病毒载体GC-shRPS14。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为2×109TU/mL。荧光显微镜下能直接观察到转染组细胞的GFP表达,转染效率为75%,WesternBlot检测到转染后RPS14在靶细胞中表达明显被抑制。说明成功构建RPS14基因RNAi慢病毒载体,转染人SKM-1细胞株后RPS14蛋白表达沉默。
- 蒋文罗静刘林肖青杨泽松王利
- 关键词：骨髓增生异常综合征RNA干扰慢病毒载体
- SPARC基因RNAi慢病毒载体的构建及其在SKM-1细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 目的:构建SPARC基因RNAi慢病毒载体获得稳定产毒的细胞,并观察其对人MDS细胞株SKM-1细胞的转染效率及其对SPARC基因的抑制效率。方法:针对已经筛选确定的SPARC基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生GC-shSPARC慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆并进行测序鉴定。用GC-shSPARC、pHelper1.0和pHelper 2.0载体共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度,并将获得的重组慢病毒GC-shSPARC转染SKM-1细胞,通过荧光显微镜检测转染后GFP表达情况,测定转染效率;RT-PCR和Western blot分别验证转染后SKM-1细胞SPARC mRNA及蛋白的表达。结果:经测序证实,构建出了SPARC shRNA的慢病毒载体GC-sh SPARC。包装、浓缩病毒悬液的滴度为1×109TU/mL。荧光显微镜下能直接观察到转染组细胞的GFP表达,转染效率为70%,RT-PCR、Western blot技术分别检测到GC-shSPARC慢病毒转染SKM-1细胞SPARC mRNA、SPARC蛋白表达水平较空白组明显降低(P<0.05)。结论:成功构建SPARC基因RNAi慢病毒载体,其能高效干扰SKM-1细胞SPARC基因的表达。
- 罗静叶兴伟蒋文周洪静肖青杨泽松刘林王利
- 关键词：SPARCRNA干扰慢病毒SKM-1
- RPS14基因重组慢病毒载体的构建及其在MUTZ-8细胞中的表达
- 2011年
- 目的构建携带人RPS14基因重组慢病毒载体获得稳定产毒的细胞,并观察其在人MDS细胞株MUTZ-8细胞中的表达。方法通过反转录方法,获得目的基因RPS14;将目的基因克隆入慢病毒表达质粒pGC-FU Vector,构建含有RPS14基因的重组慢病毒载体pGC-FU RPS14,经PCR、酶切及测序鉴定其正确性;在Lipofectamine 2000介导下,将成功构建的质粒pGC-FU RPS14与慢病毒包装质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,通过实时定量PCR法测定病毒滴度,并将获得的重组慢病毒载体pGC-FU RPS14转染人MDS细胞株MUTZ-8,用流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR检测靶细胞内RPS14 mRNA的表达。结果含有RPS14基因的重组慢病毒载体经PCR、酶切和测序鉴定构建正确,且测定的病毒滴度为2.0×109 TU/ml。流式细胞仪检测其转染效率为68.41%,RT-PCR检测到转染后RPS14 mRNA在靶细胞中的稳定表达。结论构建了携带人RPS14基因的慢病毒载体,转染人MUTZ-8细胞株后能够稳定表达RPS14基因。
- 罗静蒋文刘林王利
- 关键词：慢病毒载体骨髓增生异常综合征
