国家教育部博士点基金(200802460044)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 相关作者：王海杰谭玉珍张大勇王强利王存更多>>
- 相关机构：复旦大学上海医学院浙江大学城市学院同济大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 生后不同时间乳鼠心肌细胞的形态结构和功能特征被引量：1
- 2009年
- 目的观察生后不同时间乳鼠心肌细胞的形态结构和功能特征,建立理想的分离和纯化乳鼠心肌细胞技术。方法采用胰蛋白酶消化和机械分离,结合两次差速贴壁法以及使用溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）,从生后1~7d乳鼠心脏分离和纯化心肌细胞。观察细胞的形态和自发性搏动,并用心肌特异性肌钙蛋白丁（cTnT）免疫细胞化学染色进行鉴定。利用原位透射电镜术观察细胞超微结构,并观察其对肾上腺素和异丙肾上腺素的反应。结果从乳鼠心脏分离的细胞95%以上为心肌细胞,存活率为95%以上。乳鼠心肌细胞包括短柱状或杆状细胞和不规则形细胞。生后1~3d鼠大部分杆状细胞呈现幼稚心肌细胞的超微结构特征。6~7d鼠的杆状细胞具有类似于成熟心肌细胞的超微结构特征,cTnT呈高表达,横纹明显。不规则形细胞含有少量肌丝束,排列不规则。少数体积较小的细胞呈现未分化细胞的超微结构特征。培养72h后80%以上的细胞出现自发性搏动。肾上腺素和异丙肾上腺素刺激后,搏动细胞数目增多,搏动增强。生后6~7d鼠杆状细胞的药物反应较强。结论两类心肌细胞的超微结构特征、自发性搏动和对肾上腺素和异丙肾上腺素的反应不同。生后6~7d鼠心肌细胞较适合于成熟心肌细胞的体外实验研究。本实验建立...
- 谭玉珍王海杰
- 关键词：心肌细胞超微结构自发性搏动免疫细胞化学染色乳鼠
- 不同年龄大鼠骨髓源性心肌干细胞生物学特性的比较
- 2009年
- 目的研究不同年龄大鼠骨髓源性心肌干细胞（MCSCs）形态和衰老相关指标的差异,探讨年龄因素对MCSCs增殖、存活和向心肌细胞分化的影响。方法利用单细胞克隆培养技术从幼年、成年和老年雄性SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,透射电镜下观察细胞超微结构改变。SA-β-半乳糖苷酶染色和活性氧（ROS）染色检测细胞衰老变化,流式细胞术分析细胞周期分布。Annexin V/PI双标流式细胞术和Hochest33342染色检测细胞存活和凋亡。用骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导不同年龄组MCSCs向心肌细胞分化,通过RT-PCR检测诱导后心肌早期转录因子和心肌特异基因的表达,并通过免疫细胞化学染色检测各年龄组细胞经（BMP-2）诱导后细胞内心肌特异性肌钙蛋T（cTnT）表达的变化。结果老年组MCSCs核质比减小,胞质内可见髓样小体。随着年龄增长,处于增殖期的MCSCs比例下降,β-半乳糖苷酶和ROS阳性细胞数目增多。老年组存活细胞比例较幼年组降低。用BMP-2诱导后4周,幼年组细胞的Nkx2.5、GATA-4和cTnT、Cx-43 mRNA表达明显,成年组和老年组细胞表达低于幼年组,差异有显著性意义。免疫细胞化学染色显示,BM...
- 王存谭玉珍王海杰国海东张大勇崔晓军
- 关键词：骨髓源性心肌干细胞骨形态发生蛋白-2细胞分化Β-半乳糖苷酶流式细胞术
- Wnt/β-catenin信号通路与干细胞衰老被引量：2
- 2011年
- Wnt/β-catenin信号通路作为一条进化保守的信号通路,有着广泛的生物学作用。研究发现,Wnt/β-catenin信号通路与干细胞衰老之间存在联系。激活Wnt/β-catenin信号通路可导致干细胞发生衰老变化,而抑制Wnt/β-catenin信号通路可延缓干细胞的衰老。本文对Wnt/β-catenin信号通路与干细胞衰老之间的关系及其作用机制作一综述。
- 张大勇谭玉珍王海杰
- 关键词：干细胞衰老WNT/Β-CATENIN信号通路
- 发育心肌和心肌干细胞分化后心肌特异蛋白表达的比较研究
- 2011年
- 为探讨MCSC移植修复缺血性心肌的可能性,观察了大鼠发育心肌和MCSC分化为心肌细胞的cTnT和Cx-43表达特点。结果表明从胚胎发育至成年,心肌cTnT mRNA表达逐渐上调;用BMP-2诱导1周的MCSC可检测到cTnT mRNA表达,3～4周表达显著升高,诱导2周能观察到cTnT蛋白,3～4周可见cTnT呈现横纹样结构。胚胎第11 d心肌可检测到Cx-43 mRNA表达,生后7 d达高峰,以后逐渐降低,17 d趋于稳定。胚胎期Cx-43蛋白多分布于肌膜下,生后10 d位于细胞连接处。诱导的MCSC中Cx-43 mRNA表达特征与cTnT mRNA相似,2周可观察到Cx-43蛋白,3～4周可见Cx-43位于相邻细胞连接处。本研究结果提示,在BMP-2诱导下MCSC可分化为心肌细胞,表现为成熟心肌细胞的结构特征。MCSC有望成为治疗缺血性心脏病的理想种子细胞。
- 贺其志谭玉珍王海杰孙丽莉
- 关键词：骨髓源性心肌干细胞心肌分化心肌肌钙蛋白T缝隙连接蛋白43
- 纤维蛋白凝胶承载内皮祖细胞在移植梗死心肌后的细胞自噬变化
- 2013年
- 目的观察心肌梗死后移植内皮祖细胞(EPCs)时的细胞自噬变化,探讨自噬维持移植细胞存活和纤维蛋白凝胶保护细胞的作用。方法通过结扎左冠状动脉的前降支建立大鼠心肌梗死模型后,在正常区、梗死边缘区和梗死区分别注射从人脐带血中分选的EPCs。2 h后取注射处组织,作半薄切片,观察纤维蛋白凝胶承载的EPCs分布。定位后作超薄切片,透射电镜下观察EPCs的自噬结构变化以及纤维蛋白凝胶与EPCs和心肌的相容性。结果与正常区相比,梗死边缘区发生自噬的EPCs增多,细胞内自噬结构也增多。梗死区的移植细胞的自噬显著增强,有的细胞坏死或凋亡。纤维蛋白凝胶与移植细胞和心肌的相容性良好,移植的EPCs在纤维蛋白凝胶中充分伸展,有的EPCs与心肌细胞黏附。结论在梗死边缘区移植EPCs后,轻度缺血刺激细胞发生自噬,这有利于维持移植细胞存活。纤维蛋白凝胶承载EPCs可避免细胞丢失和促进存活。
- 张丹王海杰谭玉珍王强利伍金红李志华权哲
- 关键词：内皮祖细胞纤维蛋白细胞移植透射电镜
