国家自然科学基金(30371500)
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
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- 空肠弯曲菌多价DNA疫苗对周围神经的安全性和保护性被引量：3
- 2007年
- 目的评价空肠弯曲菌多价DNA疫苗对周围神经的免疫安全性和保护性。方法以空肠弯曲菌HS:19全菌抗原免疫为阳性对照组,将不同效价的空肠弯曲菌DNA疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠,采用ELISA法检测免疫后小鼠血清抗GM1抗体水平;采用组织病理学检查观察免疫后小鼠坐骨神经组织结构改变。将上述小鼠免疫后4周的血清注射于健康BALB/c小鼠坐骨神经外膜下,4周后观察被注射坐骨神经组织病理学改变;在此基础上,采用空肠弯曲菌HS:19重复攻击方式进行灌胃攻击,以对该疫苗的免疫保护作用进行评价。结果空肠弯曲菌HS:19全菌抗原经鼻免疫小鼠后诱发了周围神经显著的免疫性损伤,坐骨神经原纤维病变发生率高达66.3%,主要表现为广泛的轴索变性,同时伴有血清抗GM1抗体增高,末次免疫后第4周其P/N值达8.13;将免疫后的小鼠血清注射于健康小鼠坐骨神经外膜下后发生了更加严重的免疫性损伤。而空肠弯曲菌多价DNA疫苗却不能诱导血清抗GM1抗体增高,以其免疫后的血清行神经外膜下注射亦无明显周围神经免疫性损伤发生;另外,其诱导的特异性免疫应答可有效保护小鼠免遭空肠弯曲菌感染,显著降低被攻击小鼠周围神经组织病变的发生率。结论空肠弯曲菌多价DNA疫苗对周围神经具有安全无毒性和免疫保护作用。
- 郑惠蔡方成钟敏邓兵张晓萍
- 关键词：空肠弯曲菌DNA疫苗周围神经安全性
- 空肠弯曲菌Pen:19cadF基因真核表达重组质粒的构建与表达被引量：2
- 2006年
- 目的:构建空肠弯曲菌Pen:19 cadF基因真核表达重组质粒,并证实其能在COS-7细胞中表达。方法:以含有KpnI和EcoRI酶切位点的同一对引物行PCR反应,获得空肠弯曲菌Pen:2、Pen:8、Pen:19和Pen:21 cadF基因DNA片段。并选择与格林-巴利综合征最为相关的空肠弯曲菌Pen:19 PCR产物为目的基因片段,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,以构建重组质粒pcDNA3.1(+)-cadF。重组质粒经双酶切、PCR反应鉴定和DNA双向测序确认后转染至COS-7细胞。运用RT-PCR方法检测重组质粒在细胞m RNA水平的表达。结果:双酶切反应、PCR反应和DNA双向测序证实cadF基因插入成功。采用RT-PCR方法能够从重组质粒转染的COS-7细胞中扩增出与目的基因大小一致的DNA片段。结论:空肠弯曲菌Pen:19 cadF基因真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-cadF构建成功,并能在COS-7细胞中表达。为空肠弯曲菌DNA疫苗的研究奠定了良好的基础。
- 郑惠蔡方成邓兵钟敏
- 关键词：空肠弯曲菌重组质粒DNA疫苗
- 壳聚糖-DNA疫苗预防空肠弯曲菌感染的实验研究被引量：7
- 2007年
- 目的研究壳聚糖-DNA 疫苗预防空肠弯曲菌感染的效力。方法采用壳聚糖分别包裹空肠弯曲菌主要外膜蛋白和黏附蛋白编码基因 cadF 和 peblA 的真核表达重组质粒 pcDNA3.1(+)-cadF 和 pcDNA3.1(+)-peblA,制备壳聚糖-DNA 疫苗。以未干预、空质粒、单纯壳聚糖组为对照,分别将含60μg DNA 的不同效价疫苗于实验开始的0、7、14和21d 滴鼻免疫 BALB/c 小鼠,末次免疫后8周采用空肠弯曲菌 HS:19重复攻击的方式进行灌胃攻击。攻击后,对该疫苗的临床保护效-率和防御空肠弯曲菌感染的效应进行评价。结果空肠弯曲菌壳聚糖-DNA 疫苗滴鼻免疫小鼠后,不仅诱导了高水平的血清 IgA 和 IgG 抗体,而且诱导了高水平的黏膜 IgA 抗体,末次免疫后第4周其 P/N 值分别达20.58、30.13和6.87,末次免疫后第8周其肠壁 SIgA 免疫组织化学染色显示呈"+++"反应。并且,其诱导的特异性免疫应答能有效保护免疫后小鼠免遭空肠弯曲菌的感染攻击,其疫苗的有效性高达93.70。结论壳聚糖-DNA 疫苗能有效预防空肠弯曲菌的感染攻击。
- 郑惠蔡方成钟敏邓兵李欣张晓萍
- 空肠弯曲菌多价DNA疫苗的免疫保护效应被引量：1
- 2007年
- 目的研究空肠弯曲菌多价DNA疫苗的免疫保护效应。方法以壳聚糖包裹含空肠弯曲菌主要结构蛋白cadF和peb1A编码基因的重组质粒pcDNA3.1(+)-cadF和pcDNA3.1(+)-peblA,制备空肠弯曲菌多价DNA疫苗。以含60μgDNA的不同效价的DNA疫苗于实验开始的0、7、14和21d滴鼻免疫BALB/c小鼠4次,检测其诱导特异性免疫应答的效应。末次免疫后8w,分别采用空肠弯曲菌HS∶19或HS∶2单次和HS∶19重复攻击的方式进行灌胃攻击。攻击后,对该疫苗的免疫保护作用进行评价,包括该疫苗阻止空肠弯曲菌肠道定植和肠外扩散的效力,以及防御空肠弯曲菌感染导致周围神经、小肠和肝脏组织损伤的效应。结果空肠弯曲菌多价DNA疫苗滴鼻免疫小鼠后,不仅诱导了高水平的血清IFN-γ、IL-4和IgA、IgG,而且诱导了高水平的粘膜IgA抗体,末次免疫后第4w其P/N值分别达4.82、4.61、20.58、30.13和6.87;其免疫小鼠外周血CD+4、CD+8T细胞数也显著性升高,分别达56.46%和12.84%;同时,伴有肠壁SIgA的同步性分泌增强。并且,其诱导的特异性免疫应答能有效保护免疫后小鼠免遭空肠弯曲菌的感染攻击,明显减少该细菌的肠道定植和血行扩散,其抑制空肠弯曲菌肠道定植效应为99.3%,其抵御感染向肝脏扩散的效力高达100.0%;显著降低被攻击小鼠周围神经、小肠及肝脏组织的病变发生率。结论空肠弯曲菌多价DNA疫苗在抗空肠弯曲菌感染的过程中具有明显的免疫保护作用。
- 郑惠蔡方成钟敏邓兵李欣张晓萍
- 关键词：免疫保护
- 空肠弯曲菌Pen:19 peblA基因序列分析及其真核表达重组质粒的构建被引量：4
- 2006年
- 目的针对空肠弯曲菌基因组序列为一超变量序列,测序比较空肠弯曲菌Pen∶2和Pen∶19peblA基因的同源性,以证实peblA基因的保守性。在此基础上,构建空肠弯曲菌Pen∶19peblA基因真核表达重组质粒。方法以含有KpnⅠ和EcoRⅠ酶切位点的同一对引物行PCR反应,获得空肠弯曲菌Pen∶2、Pen∶8、Pen∶19和Pen∶21peblA基因DNA片段,测序比较Pen∶2和Pen∶19peblA基因的同源性。并选择与格林-巴利综合征最为相关的空肠弯曲菌Pen∶19peblA基因PCR产物为目的片段,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),以构建重组质粒。重组质粒经双酶切鉴定、PCR鉴定和测序确认后转染至COS-7细胞,RT-PCR方法检测其瞬时表达。对阳性克隆培养基上清中PEB1蛋白的表达用ELISA分析。结果测序证实空肠弯曲菌Pen∶19peblA基因序列与Pen∶2peblA基因序列一致。采用RT-PCR方法能够从重组质粒转染的COS-7细胞中扩增出与目的基因大小一致的DNA片段。ELISA分析表明PEB1蛋白在COS-7细胞上清中获得表达。结论空肠弯曲菌peblA基因具有良好保守性,以此成功构建的重组质粒能在COS-7细胞中表达,为空肠弯曲菌DNA疫苗的研究奠定了良好的基础。
- 郑惠蔡方成邓兵钟敏
- 关键词：空肠弯曲菌重组质粒DNA疫苗
