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SEA联合K562细胞体外诱导正常人脐带血单核细胞TCRζ链表达的作用被引量：1: 2010年; 目的:研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞体外诱导脐血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:常规分离4例脐带血单核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体、单纯K562细胞、SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导T细胞活化增殖,并设空白对照组。刺激培养48 h后收集各组细胞提取mRNA并合成cD-NA,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-ΔΔCt计算TCRζ链表达差异倍数。结果:抗CD3单抗组、K562细胞组、SEA组、SEA联合K562细胞组诱导培养T细胞中TCRζ链表达差异倍数分别是(4.52±0.96)、(1.65±0.26)、(1.43±0.44)、(3.41±0.30),表明各组均有活化T细胞的作用,但各组TCRζ链表达水平有差异,其中SEA联合k562细胞组的T细胞ζ链基因表达均明显高于单纯k562组及单纯SEA组(P<0.01)。结论:超抗原SEA有助于增强K562细胞体外诱导T细胞活化作用。; 高永鹏林晨田红霞高珂郜世隽江振友陈少华沈琦李扬秋; 关键词：脐带血 BCR-ABL融合蛋白

BCR-ABL-SEA DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的免疫应答被引量：2: 2011年; 目的:了解BCR-ABL-SEA双表达DNA疫苗诱导BALB/c小鼠特异性细胞和体液免疫应答效应。方法:用已成功构建的重组双表达BCR-ABL多肽和SEA多肽的质粒BCR-ABL-pIRES-SEA(B-P-S)免疫小鼠,间隔14 d共3次。相同方法用单表达BCR-ABL多肽或SEA多肽的质粒BCR-ABL-pIRES和SEA-pIRES免疫小鼠作对照。利用CCK-8比色法检测小鼠脾脏T细胞对K562细胞株的杀伤活性;流式细胞术测定小鼠脾脏CD4+与CD8+T细胞表达情况;ELISA法检测小鼠血清中干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)生成情况;间接免疫荧光法检测血清中抗BCR-ABL抗体。结果:免疫后第7周时,双表达重组质粒B-P-S组小鼠脾脏CTL细胞针对K562杀伤率、血清中INF-γ含量均明显高于单表达BCR-ABL-pIRES组和SEA-pIRES组(P<0.05);CD4+/CD8+T细胞比值、血清中IL-4含量各组之间无明显差异(P>0.05);荧光显微镜检测到血清中有抗BCR-ABL抗体。结论:所构建的BCR-ABL-SEA重组双表达质粒可诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫应答效应。; 高永鹏林晨田红霞陈琛秦雅楠周羽竝李扬秋; 关键词：葡萄球菌肠毒素A 疫苗

BCR-ABL-pIRES-SEA重组质粒在BALB/c小鼠肌肉表达分析: 2012年; 检测BCR-ABL-pIRES-SEA重组基因疫苗在小鼠肌肉中的表达。用已构建BCR-ABL-pIRES-SEA重组质粒免疫BALB/c小鼠一侧后肢骨骼肌,每两周一次,每次注射200μg,第七周取材用RT-PCR及免疫组织化学染色法检测目的基因在注射部位肌肉中转录和表达。结果发现:实验小鼠骨骼肌内检测到BCR-ABL和金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因的转录,以及BCR-ABL蛋白的表达,证明所构建的BCR-ABL-pIRES-SEA重组质粒在小鼠体内可以有效地表达基因产物。; 高永鹏秦雅楠林晨田红霞陈琛周羽竝李扬秋; 关键词：BCR-ABL 金黄色葡萄球菌肠毒素A DNA疫苗慢性粒细胞白血病

超抗原SEA体外对Jurkat T淋巴细胞增殖活性与表面超微结构的影响: 2009年; 目的：通过显微形态观察和功能检测分析超抗原（SEA）对JurkatT淋巴细胞的影响。方法：应用CCK-8法，原子力显微镜（AFM）体外检测JurkatT淋巴细胞增殖活性、及其细胞膜超微结构的改变。结果：与对照组比较，不同浓度的SEA随着作用时间的增加，细胞膜超微结构与R且值明显发生改变。JurkatT淋巴细胞经过质量浓度为0．1—100mg／LSEA，作用48h期间，JurkatT细胞的表面超微结构（平均粗糙度，Ra）和增殖活性（A值）变化非常明显。其中，质量浓度10mg／LSEA作用24h，JurkatT淋巴细胞表面结构变化最明显，而细胞增殖活性在48h达最强。结论：SEA作为超抗原作用于JurkatT淋巴细胞后，JurkatT淋巴细胞的活化表现出表面形态结构改变先于代谢水平的改变，较后者更灵敏。; 郜世隽林晨龚超群杨力建李扬秋蔡继业田红霞高永鹏; 关键词：JURKAT 超抗原原子力显微镜 CCK-8 增殖活性

BCR-ABL与Src家族激酶相互作用介导CML对抗癌药物伊马替尼耐受的研究进展被引量：1: 2013年; BCR/ABL融合蛋白是慢性粒细胞白血病(CML)的分子标志,具有高激酶活性,其在疾病发生、发展中扮演了极其重要的角色。伊马替尼(Imatinib)靶向抑制BCR-ABL,为CML慢性期的一线治疗药。BCR/ABL与Src家族激酶(Src-family kinases,SFK)之间也存在相互活化作用,通过激活众多信号通路,导致CML向急变期发展,并导致伊马替尼耐药。对有关BCR/ABL与SFK两者的相互作用机制及其生物学效应的研究进行总结。; 王冠明林晨陈小华李扬秋; 关键词：伊马替尼耐药

超抗原SEA对K562细胞诱导脐带血单个核细胞上CD3ε链表达的影响被引量：2: 2010年; 目的:探讨金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞诱导正常人脐带血单个核细胞(MNCs)中CD3ε链基因表达的影响。方法:常规分离4例脐带血单个核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体(mAb)、单纯K562细胞、单纯SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导MNCs活化增殖,并设空白对照组。刺激培养48 h后,收集各组细胞提取mRNA并合成cDNA,以β2微球蛋白基因作为内参照,采用实时荧光定量PCR检测在各组MNCs中CD3ε链基因的表达,并根据公式2-△△C t对CD3ε链表达的差异倍数进行相对定量分析。结果:K562细胞组MNCs中CD3ε链基因表达的水平略有降低,抗CD3 mAb组、SEA组、SEA联合K562细胞组的诱导活化的MNCs中CD3ε链基因的表达均有增强,而SEA联合K562细胞组MNCs中CD3ε链基因的表达明显高于单纯SEA组(P<0.01)。结论:超抗原SEA可以增加K562细胞在体外诱导脐带血MNCs中CD3ε链基因的表达。; 田红霞高永鹏林晨陈少华杨力建李扬秋; 关键词：K562细胞脐带血单个核细胞

甲氰咪呱对K562细胞诱导脐血T细胞TCR Vβ亚家族克隆性的影响被引量：3: 2009年; 目的研究甲氰咪呱(cimetidine)对K562细胞体外诱导脐血T细胞TCR Vβ亚家族克隆性的影响。方法体外分别将甲氰咪呱、K562细胞、甲氰咪呱+K562细胞与正常人的脐带血单个核细胞(mononuclear cells,MNC)混合培养2周,检测诱导增殖T细胞的特异杀伤活性,同时利用RT-PCR基因扫描技术分析培养后T细胞的TCR Vβ亚家族谱系的选择性利用和克隆性增殖情况。结果经甲氰咪呱、K562细胞、甲氰咪呱+K562细胞诱导培养2周后,各组均不同程度诱导细胞增殖,其中甲氰咪呱联合K562细胞诱导组的T细胞对K562细胞的特异性杀伤作用显著增强(P<0.01)。3组均呈现不同程度的T细胞TCR Vβ亚家族选择性利用,均有TCR Vβ21亚家族呈克隆性增殖。结论甲氰咪呱可协助增强bcr-abl抗原刺激的特异性抗CML T细胞作用。; 田红霞林晨陈少华杨力建江振友高珂郜世隽李扬秋; 关键词：甲氰咪呱 T细胞受体VΒ基因脐血

SEA对PML-RARα多肽体外诱导外周血单个核细胞TCRζ链表达的作用被引量：1: 2008年; 目的:了解金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)联合PML-RARα融合多肽体外诱导正常人外周血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:利用T细胞液体培养法分别与正常人外周血淋巴细胞加入PML-RARα融合多肽、SEA和SEA联合PML-RARα多肽诱导培养T细胞,其中SEA刺激包括培养初始或培养第5天加入SEA两组(PS、PSI),并设空白对照组(不加多肽及SEA)。分别收集各组培养20 d后细胞提取mRNA并合成cDNA,采用SYBR G reenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-△△C t分析TCRζ链表达差异。结果:与空白组相比,联合诱导组在培养初始加入SEA及第5天加入SEA的培养T细胞中TCRζ链表达上升,而单独SEA诱导组的TCRζ链表达下降。结论:超抗原SEA联合PML-RARα多肽体外诱导T细胞可使TCRζ链基因表达水平升高,有望为研制急性早幼粒细胞白血病疫苗提供新的切入点。; 高珂林晨白雪陈少华杨力建陈思B.N.Selvakumar李扬秋; 关键词：实时定量PCR 金黄色葡萄球菌肠毒素A T细胞受体

超抗原SEA对Molt-4细胞线粒体膜电位的影响: 2012年; 目的:超抗原葡萄球菌肠毒素A(SEA)诱导Molt-4细胞活化与线粒体膜电位变化的关系。方法:应用CCK-8法体外检测不同浓度和时间SEA刺激传代T细胞株Molt-4细胞增殖活性,应用JC-1标记细胞线粒体,利用流式细胞术测定比较不同时间点SEA刺激对Molt-4细胞线粒体膜电位的影响。结果:经CCK-8检测,SEA的浓度在1 mg/L时Molt-4细胞的增殖最显著,以该浓度的SEA作用于Molt-4细胞180、60、30、10 min,10 min时间点膜电位升高明显高于其他时间点。SEA刺激10、30 min后线粒体膜电位升高低于有丝分裂原PHA刺激的结果。结论:SEA可诱导Molt-4细胞线粒体膜电位升高,且升高作用主要发生在细胞增殖的早期阶段。其升高作用略低于有丝分裂原PHA。; 秦雅楠田红霞王冠明张鹏林晨李扬秋; 关键词：MOLT-4细胞超抗原线粒体膜电位

T细胞受体基因谱系分析在AITD中的应用价值: 2008年; 自身免疫性甲状腺疾病（AITD）的特征是甲状腺组织中存在大量T细胞浸润。对T细胞表面的抗原识别受体（TCR）α、β链可变区进行基因谱检测，对于分析与确定特异性自身反应性T细胞克隆具有重要意义。研究发现，无论是AITD还是甲状腺炎动物模型，甲状腺组织内浸润的T细胞TCRα、β可变区的某些特定亚家族不同程度选择性高表达。以表达特定TCR亚家族的特异性T细胞为靶抗原，基于TCR的单克隆抗体、多肽疫苗和DNA疫苗可能是治疗AITD的有效手段。; 熊玉冰林晨李扬秋; 关键词：自身免疫性甲状腺疾病疫苗

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