山东省自然科学基金(ZR2012CM014)
- 作品数：8 被引量：46H指数：6
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- 相关机构：青岛农业大学烟台工贸技师学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 花生β-1,3-葡聚糖酶基因启动子的克隆及功能分析被引量：10
- 2013年
- 植物β-1,3-葡聚糖酶属于一种重要的植物病程相关蛋白(PR蛋白),容易受到激发子的诱导而积累。用1.5 mmol/L水杨酸(SA)对花生品种花育20号幼苗进行诱导处理0.5、12、24、36、48和72 h后,提取RNA进行荧光定量检测β-1,3-葡聚糖酶基因(Ah-Glu)的表达量。结果表明,经诱导24 h后β-1,3-葡聚糖酶基因的表达量达到最高,是未经SA诱导的1.8倍。根据前期已克隆的花生β-1,3-葡聚糖酶基因序列(GenBank JQ801335),在其5'端设计3个嵌套的特异性引物扩增其上游启动子序列。以花育20号基因组DNA为模板,利用TAIL-PCR方法,扩增得到973 bp的花生β-1,3-葡聚糖酶基因启动子片段,在NCBI网站注册序列号为GenBank KC290400,并命名为Ah-Glu-Pro。PLACE和PlantCARE在线预测分析表明,Ah-Glu-Pro序列中含有TATA-box和CAAT-box等核心元件,还含有病原菌及水杨酸响应的顺式调控元件。根据Ah-Glu-Pro序列设计上下游引物,采用普通PCR法从花育20号扩增得到931 bp的启动子序列,命名为Ah-Glu-P。将Ah-Glu-P取代pCAMBIA1301质粒中的CaMV35S启动子,构建植物表达载体pCAMBIA1301-Ah-Glu-P。通过农杆菌介导法将pCAMBIA1301-Ah-Glu-P转化洋葱表皮细胞,经5 mmol/L SA诱导处理48 h后进行GUS染色。结果表明:经SA诱导后的洋葱表皮细胞GUS组织化学染色显示为蓝色,未经SA诱导的洋葱表皮细胞GUS组织化学染色未显示蓝色,说明Ah-Glu-P是一个可被诱导的启动子,可能含有对SA响应的顺式调控元件。
- 王合春陈新利隋炯明毕英娜王晶珊乔利仙
- 关键词：花生诱导型启动子染色体步移
- 花生与其近缘野生种间细胞融合及杂种愈伤组织的形成被引量：2
- 2012年
- 本研究旨在为体细胞杂交法在花生育种中的应用奠定基础。将花生栽培种Krapts和野生种A.stenosperma幼叶解离的原生质体,用PEG方法融合后,置于添加2mg/L毒莠定(Pic)、0.1mg/L苯基噻二唑基脲(TDZ)、2%的椰乳、5g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和0.1%2-吗啉乙磺酸(MES)的改良MSB5(MS无机盐+B5有机成分)液体培养基中进行浅层培养。5周后将形成的小愈伤组织转移到添加3mg/L玉米素(ZT)、0.2mg/L6-苄氨基嘌呤(BAP)、0.1mg/L萘乙酸(NAA)的固体培养基上进行培养,促使愈伤组织增殖。观察发现,融合处理的原生质体在液体培养基上培养4天后开始分裂,2周后形成直径约300μm的细胞团,5周后小愈伤组织直径可达2～3mm。当将小愈伤组织转移到固体培养基上后,愈伤组织迅速增殖,并获得大量愈伤组织。提取愈伤组织DNA进行PCR检测,部分愈伤组织扩增出了双亲特异的DNA条带或双亲都不具有的新条带,说明愈伤组织来自于融合细胞。
- 乔利仙孙海燕隋炯明徐丽娟孙世孟王晶珊
- 关键词：花生细胞融合愈伤组织PCR检测
- 平阳霉素离体诱变花生M_2农艺性状分析被引量：6
- 2014年
- 以花生(Arachis hypogage L.)品种花育22号成熟种子胚小叶为诱变材料,培养在添加平阳霉素的体胚诱导培养基中进行诱变处理,将成活的形成体胚的外植体转移到添加NaCl的体胚萌发培养基中进行耐盐定向筛选。对获得的再生植株M2的部分农艺性状进行观察测定,结果显示,花生胚小叶经平阳霉素离体诱变和NaCl定向筛选获得的再生植株后代表现型存在广泛变异,如主茎高、侧枝长、分枝数、单株结果数、荚果形状和大小、种皮颜色等均发生明显的变异。从后代变异规律可以看出,利用高效低毒的平阳霉素作为诱变剂与组织培养结合可作为创造花生新种质的一种有效手段。
- 乔利仙隋炯明赵丽兰雷萍萍孙世孟郭宝太王晶珊
- 关键词：花生平阳霉素离体诱变农艺性状
- 离体筛选花生抗逆突变体及其后代特征特性研究被引量：6
- 2012年
- 在课题组前期研究确立的花生体胚诱导及高频率植株再生体系和确立的适宜平阳霉素(PYM)诱变浓度基础上,进行花生离体诱变及定向筛选抗逆突变体研究。以花生品种花育20号成熟种子胚小叶为诱变材料,在含3mg/L PYM的诱导培养基上培养4周进行诱变处理。以羟脯氨酸(HYP)作为筛选压力添加于培养基中,确定体胚萌发阶段培养基中添加4mg/L HYP,以及体胚萌发后添加8mg/L HYP为适宜浓度的筛选方法。2011年将获得的HYP耐性苗经嫁接移栽田间,成熟后13株耐性嫁接苗获得种子。2012年将13个单株的部分种子分别播种于田间,生长发育阶段观察发现,12个耐性植株后代在株高、茎枝颜色、株型、开花习性等方面与诱变亲本不同,明显表现出变异,并且大部分植株后代性状发生分离。13个耐性单株中的7个单株收获的其他种子分别播种于塑料大棚,苗期进行干旱处理后,大部分植株生长正常,而诱变亲本的生长明显受到抑制;取干旱处理后的叶片测定POD活性和SOD活性,结果显示,这7个耐性单株中的5个单株后代SOD活性高于亲本,这5个单株后代中的4个POD活性也高于亲本。
- 赵明霞孙海燕隋炯明乔利仙范乾程王晶珊
- 关键词：花生离体诱变
- 不同基因型对花生胚小叶植株再生的影响被引量：6
- 2012年
- 以不同类型18个花生品种成熟种子的胚小叶为外植体,对不定芽诱导及植株再生进行了研究,旨在为花生遗传转化和离体诱变等提供培养方法。将胚小叶外植体培养在添加1mg/LNAA和6mg/LBAP的诱导培养基上,4周后转移到添加4mg/LBAP的培养基上进行培养。结果表明,所有的供试品种芽点诱导率均高于60%,但5大类型间及品种间（62.2%~95.5%）存在显著差异,龙生型平均诱导率最高（87.2%）,其次是珍珠豆型（81.5%）,多粒型最低（63.1%）。将形成芽点的外植体转移到添加4mg/LBAP的培养基上后,部分外植体从芽点上分化出不定芽,继续培养不定芽伸长并再生植株。植株再生率也存在显著性差异,最高的是珍珠豆型（83.5%~97.1%）,最低是多粒型（14.8%~22.0%）。
- 隋炯明乔利仙赵明霞徐丽娟王晶珊
- 关键词：花生丛生芽诱导植株再生
- 花生体胚诱导及植株再生被引量：5
- 2012年
- 以成熟种子胚小叶为外植体,对花生体胚诱导及植株再生进行了研究,旨在为花生体细胞杂交、离体诱变及遗传转化提供培养方法。将花生5大类型17个品种的胚小叶外植体分别培养在添加10mg/L2,4-D的培养基上诱导体胚形成。培养4周后将形成体胚的外植体转移到添加4mg/LBAP的培养基上进行培养,促使体胚萌发成苗。结果表明,不同类型间体胚诱导率和植株再生率存在明显差异,中间型供试品种获得了较高的胚诱导率(84.1%～91.2%)和植株再生率(81.1%～97.0%);珍珠豆型和普通型内供试品种间体胚诱导率差异较大,分别为43.9%～85.0%和42.2%～82.2%,而植株再生率均较高,分别为94.3%～96.5%和88.1%～98.7%;多粒型品种体胚诱导率(32.2%～50.0%)和植株再生率(41.2%～55.1%)均最低;而龙生型体胚诱导率(61.1%～87.8%)和植株再生率(63.7%～87.6%)均表现为中间。再生苗经嫁接驯化后移栽于田间,植株正常生长和结实。本研究结果说明,花生不同类型间再生能力存在显著差异,多粒型品种再生能力最低。
- 乔利仙隋炯明谭玲玲郭宝太孙世孟王晶珊
- 关键词：花生胚胎发生植株再生
- 农杆菌介导的花生遗传转化体系的优化被引量：11
- 2012年
- 以花生胚小叶及其诱导形成的愈伤组织为转化受体,采用农杆菌介导法,通过评估外植体GUS基因瞬时表达率,优化花生遗传转化条件。结果表明,侵染液中添加表面活性剂2-氮吗啉乙烷磺酸(MES)150mg/L或烟草提取物0.5ml/30ml有利于提高胚小叶外植体GUS瞬时表达率;采用针刺法辅助农杆菌介导转化,其胚小叶外植体多点GUS瞬时表达率(29.1%)明显高于未针刺的对照(12.1%);利用愈伤组织作为转化受体,其多点GUS瞬时表达率高达70.1%。利用此优化体系进行花生遗传转化,获得的抗性苗2011年经嫁接、移栽于试验田,PCR检测获得了T0代转基因植株,2012年部分T1代植株也检测出目的条带。
- 乔利仙于新玲隋炯明范乾程孙世孟王晶珊
- 关键词：HYPOGAEA遗传转化体系针刺法
- 花粉管通道法验证花生Oleosin基因启动子的特异性表达被引量：8
- 2013年
- 油体蛋白(Oleosin)是一类覆盖在油体表面且仅在种子中特异表达的低分子质量蛋白,能维护油体的稳定性。研究利用花生Oleosin基因的启动子替换了pCAMBIA1301的35S启动子,构建了重组表达载体pCAMBIA1301-Oleosin-pro,并利用花粉管通道法导入花生。对T0代转基因植株进行了PCR鉴定和GUS组织化学染色,结果显示:50株转基因植株有9株能扩增出目的条带,阳性率为18%,9株阳性转基因植株中有5株的子叶能被GUS染色。对GUS染色成阳性的转基因植株的子叶进行切片观察,结果显示Oleosin基因启动子驱动的GUS基因在油体蛋白中能够表达。
- 范乾程谭玲玲王亚乔利仙王晶珊隋炯明
- 关键词：花生特异性表达花粉管通道法GUS染色
