国家自然科学基金(30671963)
- 作品数：11 被引量：17H指数：2
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- HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统的作用
- 2009年
- 目的研究HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统作用。方法用5%高氯酸萃取兔胸腺组织,通过反相高效液相色谱进一步分离纯化蛋白,用Tricine-SDS-PAGE、AU-PAGE和Dot-blot进行鉴定。采用凝胶迁移阻滞试验(EMSA)检测HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统的结合作用;平板菌落记数法检测TA系统激活或非激活条件下,菌体过表达重组HMGN2和对照组对细菌存活百分率的影响。结果HMGN2可阻滞mazEF基因的泳动速率,且随HMGN2浓度增加,阻滞作用增强。利福平激活TA系统,菌体过表达重组HMGN2后,与对照组比较细菌存活量减少约30%,有统计学差异。而头孢哌酮不能激活TA系统,过表达重组HMGN2组和空质粒组CFU%分别为70.2%、68.9%,两者无明显差异。结论HMGN2可加强mazEF系统介导的细菌程序性死亡;HMGN2对TA系统的作用也可能是其抗大肠埃希氏菌作用的机制之一。
- 王薇陈军利黄宁邓璐霞陈善泽李夏吴桂霞曹玥范波赵静韩琴
- 关键词：HMGN2抗菌功能
- 影响肺炎克雷伯菌粘附上皮细胞作用的研究
- 2014年
- 目的:研究不同理化及生物因素对肺炎克雷伯菌粘附宿主细胞的影响,探讨其粘附宿主细胞的可能机制。方法:用肺炎克雷伯菌临床分离株K.pnueumoniae 03183(K.p03183)建立粘附宿主细胞模型,通过结晶紫染色及扫描电镜观察其粘附效率;以不同理化及生物因素预处理K.p03183,平板菌落计数法观察上述因素对K.p03183粘附细胞的影响;用基因芯片技术,检测HMGN2蛋白预处理细菌对于其粘附相关基因表达的影响。结果:K.p03183可粘附至A549、T24、HeLa等3种上皮细胞系,其粘附率与E.coli 25992接近;氯化锂和盐酸胍、高碘酸钠及热预处理可明显降低K.p03183对于A549和T24的粘附率(P<0.05);同时,胃蛋白酶及HMGN2蛋白预处理K.p03183,也可抑制其对A549和T24的粘附(P<0.01);但胰蛋白酶预处理却能增加细菌对于A549细胞的粘附(P<0.05);同时,HMGN2还可通过上调dksA基因表达,从而干扰细菌粘附细胞。结论:肺炎克雷伯菌可能借助细胞壁及其表面蛋白和碳水化合物等成分粘附至宿主上皮细胞,通过非共价键结合表面蛋白或消除碳水化合物成分,抑制细菌粘附至宿主细胞。
- 李娜范波吴桂霞沈晓飞郑爽任来彬杨晓龙郭小娟王馨苑滕燕李婧瑜王晓樱黄宁
- 关键词：肺炎克雷伯菌粘附上皮细胞HMGN2
- LPS刺激对人结肠癌SW480、肺癌A549细胞HMGB1以及HBD-1表达的影响被引量：3
- 2010年
- 目的观察脂多糖(LPS)刺激对SW480、A549细胞HMGB1、HBD-1表达的影响。方法以浓度为5、10、50和100 ng/μl LPS刺激SW480、A549细胞24 h后,提取细胞RNA,并用RT-PCR法检测HMGB1以及HBD-1基因mRNA的表达水平。结果SW480以及A549细胞,HMGB1以及HBD-1均有较高的表达。在SW480细胞中,不同的LPS刺激浓度下,5ng/μl LPS即可上调HMGB1基因mRNA的表达,但其表达量并不随LPS浓度的增高而有所增加;而同样刺激条件下HBD-1基因mRNA表达水平未见明显变化(P>0.05)。在A549细胞中,不同的LPS刺激浓度下HMGB1以及HBD-1基因mRNA表达量未见明显变化(P>0.05)。结论HMGB1及HBD-1固有表达于肠道及呼吸道上皮细胞。LPS能上调SW480细胞HMGB1的表达,其表达量无浓度依赖性,但LPS不能上调HBD-1的表达。在A549细胞,LPS不能诱导HMGB1以及HBD-1的表达。
- 陈善泽邓璐霞黄宁吴桂霞曹玥范波李夏赵静韩琴高祥
- 关键词：SW480细胞HMGB1
- HMGN2对大肠埃希氏菌黏附Hela细胞的影响被引量：1
- 2010年
- 目的探讨HMGN2对大肠埃希氏菌黏附Hela细胞的影响。方法采用Hela细胞模型,光镜以及扫描电镜观察大肠埃希氏菌ATCC25922黏附Hela细胞模型的建立。用以下三组不同方式,观察梯度抑菌浓度下(分别为5、10、15μg/ml)HMGN2对细菌黏附的影响。黏附抑制组:HMGN2、细菌、细胞共同孵育1小时;干扰模型组:细菌、细胞孵育1小时后,PBS洗去未黏附细菌,再加入HMGN2孵育2小时;细菌预处理组:HMGN2、细菌孵育2小时,离心洗去HMGN2,收集细菌,所得细菌再与细胞孵育1小时。用平板菌落计数法观测细胞内、外活菌数,并计算黏附指数以及黏附抑制率。结果光镜及扫描电镜可见细菌黏附于细胞表面,黏附模型构建成功。三组的结果均提示:在HMGN2梯度抑菌浓度下,细菌的黏附指数随着HMGN2的浓度的升高而减小;黏附抑制率则随着其浓度的升高而逐渐增大(P<0.05)。结论抑菌浓度下的HMGN2:对大肠埃希氏菌ATCC25922黏附Hela细胞有明显的抑制作用;可减低已经黏附于细胞表面的细菌的黏附能力;可能直接作用于细菌,导致其黏附能力降低。
- 李夏邓璐霞吴桂霞曹玥范波赵静韩琴陈善泽高祥黄宁
- 关键词：HMGN2细菌HELA细胞
- 人血红蛋白及其片段体内外抗菌活性研究被引量：10
- 2008年
- 目的分离人血红蛋白及其片段,进行体外抗菌活性分析和比较,并对血红蛋白体内抗菌活性进行初步探讨。方法利用阳离子交换及分子筛分离人血红蛋白α、β链;溴化氰法裂解α/β链,反相高效液相色谱技术纯化其片段;琼脂糖弥散法抑菌实验检测抗菌活性;构建大鼠大肠埃希菌阴道感染模型,设立实验组（血红蛋白组）和对照组,观察各组大鼠阴道组织形态学变化。结果体外抑菌实验示：血红蛋白、α/β链及其片段有抑菌作用,但其主要针对的是革兰阴性菌大肠埃希菌;而且除α1~32的抑菌作用较弱外,血红蛋白、α/β链及其片段三者抑菌活性比较,其效能基本相似。大鼠体内抗菌实验示：与基质对照组（感染后不治疗）比,血红蛋白组阴道复层扁平上皮表层较平滑,固有层内炎细胞浸润明显减少,且组织内充血明显减轻。结论人血红蛋白及其片段具有体外抑菌活性,而且血红蛋白在大鼠体内能减轻大肠埃希菌阴道感染炎症程度。
- 周新娥欧阳运薇潘小玲何跃东李恒邓璐霞石艳娥彭媛媛赵媛黄宁
- 关键词：人血红蛋白片段抑菌
- 人宫颈黏液HMGN2鉴定及在宫颈组织的表达
- 2008年
- 为探讨人子宫颈黏液的抗菌机制,采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高压液相色谱技术,从人子宫颈黏液酸溶性提取物鉴定出对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抗菌活性的多肽HCP-21和HCP-26.蛋白质N端氨基酸序列测定和精确质谱分子质量测定证明,HCP-21为HMGN2,HCP-26为SLPI片段.提取原代培养宫颈上皮细胞的总RNA,采用RT-PCR技术扩增出一条与HMGN2 cDNA大小相同(270bp)目的基因片段,表明在生理状况下,宫颈上皮细胞即可表达其mRNA.制备HMGN2多克隆抗体,对生理状态下宫颈组织切片和宫颈黏液涂片进行HMGN2分子免疫组化分析表明,该分子主要分布于子宫颈黏膜层,并存在于子宫颈黏液.HMGN2分子在宫颈黏膜上皮组织和黏液中固有表达,可能在子宫颈天然免疫防御中起重要作用.
- 王莉莉何跃东黄宁李明熊文碧冯云吴琦王伯瑶潘小玲
- 关键词：女性生殖道子宫颈抗菌肽HMGN2
- HMGN2对肺炎克雷伯氏杆菌耐药性的影响
- 2009年
- 目的探讨HMGN2对肺炎克雷伯氏杆菌耐药性的影响。方法分离、纯化并鉴定兔胸腺组织HMGN2。用质粒提取试剂盒提取耐药肺炎克雷伯杆菌中的质粒pMG252,PCR扩增其耐药基因qnrA;凝胶阻滞实验检测HMGN2与耐药质粒pMG252及qnrA基因结合;用不同浓度的HMGN2刺激培养肺炎克雷伯氏杆菌,然后用试管二倍稀释法测定环丙沙星对其MIC值的改变,微量法测定细菌的生长曲线,检测HMGN2对耐药菌株耐药性的逆转效果;将重组HMGN2及耐药质粒pMG252转化到大肠杆菌DH5α中,检测重组HMGN2对细菌耐药性的影响。结果HMGN2可明显阻滞pMG252质粒及qnrA基因的泳动速率,且随HMGN2浓度增加,qnrA基因的泳动速率逐渐减慢;15μg/ml HMGN2与细菌共孵育后,环丙沙星对耐药肺炎克雷伯氏杆菌的MIC值明显下降,且该耐药株的生长与对照组和低剂量组相比明显的受到抑制;pET-32a-c(+)-HMGN2重组表达质粒可时环丙沙星对大肠杆菌DH5α的MIC值明显小于其对照组,下降到其1/16。结论HMGN2能有效逆转含耐药质粒pMG252的肺炎克雷伯氏杆菌等对喹诺酮类抗生素的耐药性。
- 陈军利王薇黄宁邓璐霞陈善泽李夏吴桂霞曹玥范波赵静韩琴
- 关键词：HMGN2耐药性逆转耐药性逆转
- 小鼠HMGN2干扰质粒psilence-cmv-4.1-HMGN2构建及体内干扰效果鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的:构建小鼠HMGN2干扰质粒psilence-cmv-4.1-HMGN2,以进一步明确HMGN2的生物学作用。方法:将HMGN2-shRNA片段退火后与小鼠psilence-cmv-4.1链接,饲养孕小鼠,尾静脉注射法导入shRNA表达质粒,提取8.5d胚胎RNA,用RT-PCR检测胎HMGN2的表达量进行鉴定。结果:测序结果显示psilence-cmv-4.1-HMGN2干扰质粒构建成功,RT-PCR结果显示HMGN2在8.5d胎儿表达较高广泛表达,且Psilencer-cmv-4.1-HMGN2尾静脉注射后有明显的抑制效果。结论:成功构建对8.5d胎鼠HMGN2基因具有显著干扰效率的psilencer-4.1-HMGN2干扰质粒,为进一步研究HMGN2基因的功能打下了基础。
- 韩琴邓璐霞赵静吴桂霞曹玥范波李夏陈善泽高祥黄宁
- 关键词：HMGN2
- 小鼠胚胎神经系统发育过程中mBD-4的表达被引量：1
- 2010年
- 目的观察β-防御素4(mouseβdefensin 4,mBD-4)在小鼠胚胎神经系统发育不同时期的基因表达及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导孕鼠后mBD-4在胚鼠神经系统的的表达情况。方法孕鼠分为LPS组(n=10)和正常对照组(n=10),取不同时期(5.5、8.5、11.5、17.5天)小鼠胚胎,LPS组于胚胎提取1天前母鼠腹腔注射LPS,正常对照组同时间注射同量的生理盐水,胚胎取出后石蜡包埋切片,免疫组化方法和RT-PCR技术检测mBD-4的阳性表达。结果 mBD-4在小鼠胚胎早期第5.5天的神经组织中未见固有表达,到胚胎第8.5天开始有少量固有表达,到胚胎中晚期,固有表达含量增多;LPS组中胚胎神经组织中自5.5天有阳性表达,且随着胚胎的发育其阳性表达越强。结论①mBD-4在小鼠胚胎神经系统中固有表达,在胚胎第8.5天有少量表达,且随着神经系统的发育成熟,mBD-4在其神经组织中表达含量越多。③mBD-4在LPS的诱导下,其在神经组织中表达明显增高。
- 韩琴邓璐霞黄宁赵静吴桂霞曹玥李夏范波陈善泽高祥
- 关键词：Β-防御素胚胎LPS
- HMGN2基因干扰质粒构建及干扰效率测定
- 2010年
- 目的:构建HMGN2基因的干扰质粒,为深入研究HMGN2基因在信号通路中的作用提供有效手段。方法:根据文献选择两个HMGN2基因的干扰位点,合成两个干扰片段定向克隆到psilencer-4.1的干扰载体并测序验证。将干扰质粒转染至A549细胞,并通过检测RT-PCR产物量以获得干扰效率。结果:RT-PCR产物检测结果显示干扰质粒psilencer-4.1-HMGN2-2干扰效率最高,其HMGN2表达量降低了70%左右。结论:成功构建了对HMGN2基因具有显著干扰效率的psilencer-4.1-HMGN2干扰质粒,为进一步研究HMGN2基因的功能打下了基础。
- 赵静邓璐霞韩琴吴桂霞曹玥李夏范波陈善泽高祥黄宁
- 关键词：RNA干扰
