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鸡生长激素的原核表达、纯化及活性研究被引量：2: 2016年; 鸡生长激素(cGH)是由脑垂体前叶合成并分泌的一种重要的多肽类激素,对于鸡的生长发育具有至关重要的调控作用。为实现cGH的原核表达,将其序列插入原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a-cGH,并转化大肠杆菌BL21(DE3),挑选阳性菌落液体培养IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测显示,诱导产物在25 ku处含有与预期大小一致的蛋白条带;通过镍柱纯化,得到了较高纯度的cGH重组蛋白;用纯化得到的cGH重组蛋白处理鸡肝癌LMH细胞,检测其IGF-Ⅰ基因mRNA水平上调,证明所得到cGH蛋白具有生物学活性。研究结果为进一步研究cGH的结构、功能和生产应用奠定了基础。; 何赛周欢庆陈昱希李洁郁建锋顾志良; 关键词：生长激素原核表达蛋白纯化活性研究

鸡生长激素在毕赤酵母中的表达、纯化和活性鉴定: 2016年; 生长激素(growth hormone,GH)与受体结合调节靶细胞的功能在机体的生长发育及代谢过程中起着极其重要的作用。为获得高纯度具有生物学活性的鸡生长激素(chicken growth hormone,cGH),试验将C端融合了6个组氨酸的cGH成熟片段基因序列克隆入毕赤酵母表达载体pPIC9K中,使用电转法将重组质粒导入毕赤酵母GS115,以1%的甲醇诱导重组菌(GS115-pPIC9K-cGH)96h,表达大小约为25ku的目的蛋白cGH,经Ni离子亲和层析和聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶层析获得95%以上的cGH重组蛋白。实时荧光定量检测结果表明,纯化的cGH重组蛋白可刺激鸡肝癌细胞LMH内的胰岛素样生长因子Ⅰ(insulin-like growth factorⅠ,IGF-Ⅰ)基因的mRNA表达上调,表明所发酵纯化的重组蛋白cGH具有生物学活性,这为其结构和功能的研究及生产应用奠定了基础。; 郁建锋何赛金泽楷周欢庆董小敏龚道清顾志良; 关键词：鸡生长激素毕赤酵母纯化生物学活性

肉鸡IGF-I基因mRNA的时空表达模式被引量：1: 2014年; 采用实时荧光定量PCR技术,以β-actin为内参,检测了白羽AA肉鸡在4周龄时其胸肌、腿肌、脂肪、心、肝、脾、肺、肾、腺胃、肌胃、肠、脑共12个组织和在1日龄及1、2、3、4、5、6、7周龄时腿肌、肝脏、脂肪中类胰岛素生长因子-I(IGF-I)的表达量变化.结果显示,除肾外其余组织均表达一定量的IGF-I mRNA表达,且在肝脏中表达量显著高于其他组织;腿肌6周时IGF-I mRNA表达量达到最大值,其余各时期也都高于1日龄时的表达;肝脏中表达量最高时期是3周,然后又呈下降趋势;脂肪中在3周时表达量最高,然后其表达量随年龄增长而逐渐下降.本实验结果揭示了生长早期肉鸡IGF-I基因mRNA的时空表达特征,为进一步研究生长轴相关基因对肉鸡早期生长发育的调控作用奠定了基础.; 顾海娟王星果王慧娟邵芳顾志良; 关键词：肉鸡 IGF-I基因

Stat5及JAK-Stat5通路被引量：8: 2012年; 信号转导与转录因子(Stats)家族是一个由7个成员组成的转录调控家族,其中Stat5由于在多种细胞因子刺激时均可起到重要作用而引起了广泛的关注。Stat5具有两种不同类型,即Stat5a和Stat5b,它们均可被多种细胞因子所激活,启动JAK-Stat5信号通路,从而调节相应基因的表达。在两种Stat5的激活中,特殊位点的丝氨酸和酪氨酸的磷酸化对Stat5的激活起重要的作用。对信号通路严格的控制对于生物体来说具有重要的意义,在JAK-Stat5信号通路中,以SOCS3为代表的SOCS家族对JAK-Stat5的负反馈调节具有重要作用。; 杨磊韩曜平顾志良; 关键词：STAT5 信号通路磷酸化

GH调控鸡原代肝细胞中GH/IGF-Ⅰ信号通路相关基因mRNA表达的研究被引量：9: 2013年; 为研究离体条件下鸡肝脏中表达的GH/IGF-Ⅰ信号通路相关基因受生长激素(GH)调控的mRNA表达情况,以4～5周龄雌性商品代AA肉鸡为试验材料,采用改良的半原位两步灌流法并结合消化法分离肝细胞,进行原代培养;采用SYBR green荧光定量PCR方法,检测GH处理后鸡肝细胞中GH/IGF-Ⅰ信号通路中相关基因IGF-Ⅰ、HNF-1α、HNF-1β、HNF-3β、CIS、SOCS-1、SOCS-2和SOCS-3的表达情况。结果表明:胶原酶消化法获得的肝细胞分离良好,形态完整,铺板4h后完全贴壁,继续培养24h即可用于GH处理试验;GH能引起鸡肝细胞中IGF-Ⅰ、SOCS-2、SOCS-3和CIS基因mRNA表达上调,而对HNF-1α、HNF-1β、HNF-3β、SOCS-1基因mRNA的表达无影响。; 王慧娟杨磊邵芳王星果郁建锋顾志良; 关键词：原代肝细胞生长激素

动物GH/IGF-Ⅰ轴调控机制的研究进展被引量：10: 2011年; 生长轴是动物体内下丘脑-垂体-靶器官一系列激素及其受体所组成的神经内分泌系统。通过提高生长轴中生长激素(GH)和胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)水平,促进增重、提高饲料转化率和改善肉品质,是畜禽生长调控的一种新途径。GH通过IGF-Ⅰ介导调节动物生长和细胞分化等,文章综述了GH/IGF-Ⅰ轴的组成、功能,以及GH调控IGF-Ⅰ表达的分子机理。; 顾志良王慧娟郁建锋; 关键词：生长激素

动物生长轴中STAT调控胰岛素样生长因子Ⅰ表达的研究进展被引量：3: 2012年; IGF-Ⅰ能够促进细胞的增殖分化和代谢过程,而其表达是受STAT介导的,该通路最终受到生长激素(GH)的调控。生长激素与生长激素受体结合激活JAK家族,使得STAT家族成员,特别是STAT5磷酸化。磷酸化的STAT5进入细胞核内,与IGF-Ⅰ基因上的STAT5结合位点结合,激活胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)的表达,IGF-Ⅰ再通过血液循环到达机体的局部组织,促进组织细胞的生长和分化。作者对动物生长轴中STAT和IGF-Ⅰ的组成、功能以及STAT调控IGF-Ⅰ表达的分子机理的研究进展作一综述。; 王慧娟郁建锋顾志良; 关键词：STAT

鳡胰岛素样生长因子1基因的克隆及其组织特异性表达分析被引量：4: 2012年; 为克隆鳡(Elopichthys bambusa)的胰岛素样生长因子1(IGF1)全长cDNA和启动子序列及明确其组织表达特征,采用反转录PCR(RT-PCR)、cDNA末端快速扩增(RACE)和染色体步移等技术,从鳡肌肉中获得了IGF1基因的全长cDNA(844bp)和上游启动子部分序列(627bp)。结果表明:IGF1基因包含218bp的5′端非翻译区、140bp的3′端非翻译区和486bp的开放性阅读框(ORF),编码161个氨基酸,包含前44个氨基酸残基为信号肽、70个氨基酸残基的4个功能结构域和C端47个氨基酸残基的延伸肽结构域。启动子无TATA框,但含有一成肌分化抗原(Myo D)结合位点。氨基酸同源性和系统发育分析发现,鳡IGF1与鲤形目其他鱼类的同源性较高(94.41%～99.38%),亲缘关系最近。半定量RT-PCR结果显示,IGF1在鳡的肝脏中表达最高,而心脏中未见其明显表达。该研究为明确IGF1参与鳡生长发育的机制研究及其在鳡的繁殖育种中的应用奠定了基础。; 郁建锋李建林徐建荣卢祥云柏洁顾志良; 关键词：胰岛素样生长因子1 启动子

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