内蒙古自治区自然科学基金(2012MS0411)
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 相关作者：李海军杜晨光王秀梅于泊洋张伶俐更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学内蒙古医科大学更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金国家自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 绵羊卵丘-卵母细胞复合体石蜡切片技术的改良被引量：3
- 2017年
- 【目的】在绵羊有腔卵泡发育过程中,多层卵丘细胞紧密包绕着卵母细胞形成卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complex,COCs)特殊结构,存在于卵泡腔内。卵泡成熟后,绵羊COC从卵泡内排出,进入输卵管,等待受精。现有的卵丘-卵母细胞复合体蛋白鉴定技术,或者将包含各级卵泡的卵巢组织直接进行切片处理,或者将COCs从卵泡内分离,在完整卵丘-卵母细胞复合体水平上进行免疫染色。但这两种方法在检测绵羊有腔卵泡COCs中目的蛋白表达时,存在显著缺陷。研究旨在对常规石蜡组织切片技术进行改进,以期满足绵羊COCs蛋白鉴定需求。【方法】首先采用抽吸法从绵羊有腔卵泡内获得COCs,以石蜡包埋方式人为构建了一种可以进行切片处理的"包含多枚绵羊卵丘-卵母细胞复合体的仿组织结构"。然后以该特殊结构与健康绵羊卵巢组织为研究对象,分别采用改良与传统的石蜡组织免疫化学技术流程,检测了目的蛋白,尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)与其受体(urokinase-type plasminogen activator recepter,uPAR),在绵羊COCs中的表达情况,比较了两种技术的免疫染色效果与染色流程差异。【结果】将所构建的绵羊COCs仿组织结构与正常绵羊卵泡组织,进行石蜡组织切片处理,经切片、贴片与脱蜡等步骤,分别形成了散在分布于载玻片上的COCs薄片与包含卵泡的卵巢组织薄层(厚度5μm)。经间接免疫染色处理后,结果显示:①目的蛋白在两种结构COCs中的表达是一致的,即uPAR在绵羊卵丘与卵母细胞上都有表达,而uPA只存在于绵羊卵丘细胞中;②在绵羊COCs薄片结构中,COCs整体形态完好,卵母细胞与外围卵丘细胞层次清晰,蛋白定位清楚,染色效果良好;在卵巢薄层结构中,绵羊卵泡内壁颗粒细胞与COCs等形态结构相对完整,卵母细胞蛋白定位清楚,但是卵丘细胞层次与蛋白表达较不清晰
- 李海军于泊洋段云娇刘星宇翁娅政杜晨光王秀梅
- 关键词：绵羊卵巢组织石蜡切片蛋白表达
- uPA对体外成熟牛卵母细胞生发泡破裂的影响
- 2018年
- 为了探明尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）对体外成熟牛卵母细胞核成熟的可能作用,试验根据uPA及其特异性抑制剂（amiloride）的有效浓度分成4组,即对照组、uPA（0.5 ng/mL）组、amiloride（1μg/mL）组及联合添加（uPA＋amiloride）组,然后采用地衣红染色方法分别研究体外成熟培养6 h与12 h后uPA对牛卵母细胞生发泡破裂（GVBD）的影响,采用ELISA方法研究体外成熟培养6 h后uPA对牛卵丘-卵母细胞复合体（COCs）中cAMP水平变化的可能调节作用。结果表明：减数分裂不同时期（GV期、GVBD期及MⅠ~MⅡ期）卵母细胞染色质（体）形态呈现不同特征。卵母细胞在体外成熟培养6 h后各组细胞均处于GV^GVBD期,其中uPA组GVBD期卵母细胞率（12.72%）显著低于对照组（24.83%）与联合添加组（30.42%,P〈0.05）;体外成熟培养12 h后,uPA组GVBD期卵母细胞率（54.81%）显著高于对照组（37.49%）与联合添加组（25.64%,P〈0.05）,uPA组MⅠ~MⅡ期卵母细胞率（44.85%）显著低于对照组（62.51%）与联合添加组（74.36%,P〈0.05）;体外成熟培养6 h后,uPA组cAMP水平显著高于对照组与联合添加组（P〈0.05）。说明uPA通过上调cAMP水平阻滞牛卵母细胞的减数分裂进程。
- 段云娇刘新宇塔娜赵玉芬于泊洋钱英红李海军
- 关键词：卵母细胞尿激酶型纤溶酶原激活剂减数分裂环磷酸腺苷
- Ghrelin和GHS-R1a mRNA在牛卵母细胞体外成熟过程中的表达被引量：1
- 2013年
- 【目的】探讨Ghrelin和GHS-R1a mRNA在牛卵母细胞体外成熟过程中的表达及二者表达与FSH之间的关系。【方法】利用实时定量RT-PCR技术检测体外成熟进程中牛卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA水平表达变化,观察不同浓度FSH对Ghrelin和GHS-R1a mRNA表达的作用以及FSH与FSH受体抑制剂的组合对Ghrelin和GHS-R1a基因表达的影响。【结果】实时定量RT-PCR结果揭示牛卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA的相对表达量随着成熟过程的延长而呈现一定变化规律,即Ghrelin和GHS-R1a mRNA在卵母细胞体外成熟过程中从8 h开始显著下降并持续此低表达水平到24 h;不同浓度FSH显著抑制卵母细胞Ghrelin及GHS-R1a mRNA的表达,而FSH受体抑制剂明显减弱FSH的抑制作用而促进二者表达。【结论】Ghrelin和GHS-R1a mRNA在卵母细胞体外成熟过程中的表达可能随着培养液中FSH升高而降低。
- 米焱张伶俐李海军杜晨光曹贵方
- 关键词：卵母细胞体外成熟FSHGHRELIN
- 组织型纤溶酶原激活剂在体外成熟过程中对牛卵丘细胞扩散的影响
- 2013年
- 为了研究组织型纤溶酶原激活剂(tPA)在牛卵丘-卵母复合体(COCs)体外成熟过程中对卵丘细胞扩散的影响,试验采用实时定量PCR技术检测了添加不同浓度tPA(0,0.1,1,10 ng/mL)对体外成熟培养16 h后牛卵丘细胞中透明质酸合成酶2(HAS2)和环氧合酶2(COX2)基因相对表达变化,并对成熟培养16 h后COCs中卵丘细胞扩散程度的影响进行了统计。结果表明:在COCs体外成熟16小时时,各添加组牛卵丘细胞HAS2基因的相对表达水平均低于未添加组,且1 ng/mL组最低,差异显著(P<0.05);COX2基因的相对表达水平随着tPA添加浓度的增加而升高。各添加组卵丘细胞扩散程度均低于对照组,其中1,10 ng/mL组与对照组相比差异显著(P<0.05)。说明在体外成熟过程中,tPA对COX2基因的表达有正向调节作用,同时tPA对HAS2基因的表达与卵丘细胞扩散有抑制作用,tPA可能是牛卵丘细胞在体外成熟过程中扩散的重要反向调节因子。
- 张伶俐米焱李海军徐晓静杜晨光曹贵方苏布登王秀梅
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂扩散环氧合酶2
- uPA对体外培养牛卵丘颗粒细胞周期变化与凋亡的影响
- 2018年
- 探讨uPA对体外培养牛卵丘颗粒细胞周期与凋亡的影响。在建立稳定传代的牛卵丘颗粒细胞体外培养体系的基础上,利用细胞周期检测技术,探讨了尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinasetype plasminogen activator,uPA)活性对调节体外培养牛卵丘颗粒细胞周期的变化和凋亡的的影响。试验结果表明Amiloride能显著增加处于S和G2/M期的细胞比率,且对细胞凋亡没有影响。本研究结果对于进一步深入理解牛卵泡发育与闭锁机制有重要意义。
- 刘新宇胡吉图段云娇赵玉芬于泊洋苏布登格日勒杜晨光李海军
- 关键词：尿激酶型纤溶酶原激活剂周期凋亡
