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miR-191通过调控C/EBPβ转录影响猪前体脂肪细胞分化被引量：4: 2013年; 对实验室前期Solexa结果进行深入挖掘,结合生物信息学分析从不同发育阶段猪皮下脂肪组织差异表达的miRNAs中筛选出高丰度差异极显著的候选miR-191.采用腺病毒过表达miR-191,实时定量PCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测等技术方法,初步研究miR-191对猪前体脂肪细胞分化的影响.结果发现,miR-191随着猪前体脂肪细胞的分化表达量逐渐增加.与对照组相比,过表达miR-191的猪前体脂肪细胞中miR-191转录本显著增加,并引起CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、PPARγ和aP2的mRNA水平降低,抑制了猪前体脂肪细胞分化.同时,Western blot结果显示,与对照组相比过表达miR-191的猪前体脂肪细胞在48 h C/EBPβ蛋白水平下降了55%.更重要的是,通过TargetScan等算法正向筛选以及MicroInspector反向筛选联合获得miR-191候选靶基因,经双荧光素酶报告基因检测结果证实,miR-191可直接作用于C/EBPβ3′UTR,从而降低萤火虫荧光素酶活性.综上所述,miR-191可能通过抑制脂肪细胞分化早期标志基因C/EBPβ的表达,从而抑制了猪前体脂肪细胞的分化.; 刘帅宁小敏李美航仇杨李艳杰董培越杨公社; 关键词：猪前体脂肪细胞表达谱腺病毒

MiR-125a-5p抑制3T3-L1前体脂肪细胞分化被引量：2: 2014年; MicroRNAs(miRNAs)是一类在脂肪组织发育中发挥重要作用的小非编码RNA.为探明miR-125a-5p在3T3-L1前体脂肪细胞中的作用,采用实时qPCR检测了miR-125a-5p在小鼠各组织及3T3-L1前体脂肪细胞分化过程中的表达;使用经化学修饰的miR-125a-5p模拟物agomir及抑制剂antagomir转染3T3-L1前体脂肪细胞,采用实时qPCR和Western印迹检测成脂标志基因Pparγ和aP2的表达,油红O染色观察脂肪细胞脂质积累.结果显示,miR-125-5p在小鼠脂肪组织中高丰度表达,在3T3-L1前体脂肪细胞分化过程中表达下降.过表达miR-125a-5p,与对照组相比,成脂标志基因Pparγ和aP2在mRNA和蛋白质水平均明显下降;油红O染色及定量结果显示脂质积累减少.抑制剂处理结果显示,Pparγ和aP2在mRNA和蛋白质水平均有不同程度上升,但油红O染色及定量结果差异不显著.以上结果表明,miR-125a-5p在脂肪细胞分化中发挥负调控作用.; 纪洪雷宋成创李优磊李岳峰郑雪莉杨公社; 关键词：3T3-L1 脂肪细胞分化

过表达miR-191抑制猪ADSCs向脂肪细胞分化被引量：3: 2013年; 在脂肪组织发育过程中存在许多差异表达的microRNAs(miRNAs),而miR-191是从实验室前期Solexa测序结果中筛选出的差异表达miRNAs之一.本研究对不同物种miR-191的成熟及前体序列进行同源性分析,并检测其在猪不同发育阶段各组织中的表达情况,发现miR-191的成熟及前体序列在不同物种间都非常保守,通过real-time qPCR检测发现,miR-191在猪脂肪组织不同发育阶段呈高丰度差异表达,其与Solexa测序结果一致.为了更好地研究miR-191在脂肪细胞分化过程中的功能,通过基因克隆的方法,利用Ad-Easy体系,构建过表达miR-191的腺病毒载体,转染293A细胞,成功包装出重组miR-191腺病毒并能高效侵染猪脂肪基质细胞(adipose derived stromal cells,ADSCs).通过real-time qPCR检测表明,感染重组miR-191腺病毒后的ADSCs能大量表达miR-191;油红O染色可以观察到,过表达miR-191的猪ADSCs在诱导分化后与对照组相比,脂滴明显减少.进一步研究发现,miR-191过表达的猪ADSCs中,SREBP-1C(sterol regulatory element binding protein-1C)和LPL(lipoprotein lipase)的mRNA水平显著降低,脂解关键基因HSL(hormonesensitive lipase)和ATGL(adipose triglyceride lipase)mRNA水平显著升高.同时,Western印迹结果显示,过表达miR-191的猪ADSCs在诱导分化过程中,PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptorγ)、C/EBPα(CCAAT/enhancer binding proteinα)和A-FABP(adipocyte fatty acid binding protein)的蛋白表达水平显著下调.实验表明,过表达miR-191抑制了猪ADSCs的分化过程.这为深入研究miR-191在猪ADSCs分化过程中的调控机制奠定基础.; 刘帅仇杨董培越何晶晶程佳米琳杨公社; 关键词：重组腺病毒

过表达miR-103促进猪前体脂肪细胞分化被引量：14: 2012年; 为阐明miR-103在猪前体脂肪细胞分化过程中的调控作用,采用Real-time PCR检测猪前体脂肪细胞成脂分化过程中的miR-103表达谱,明确了其在分化过程中的表达趋势;使用miR-103的腺病毒超表达载体感染猪原代脂肪细胞,随后采用Real-time PCR和Western blotting分别检测成脂标记基因PPARγ、aP2的mRNA和蛋白表达量变化;油红O染色观察腺病毒miR-103侵染的前体脂肪细胞诱导分化第8天的成脂情况。结果显示,miR-103的表达量随着脂肪细胞分化而增加,在miR-103超表达的猪原代脂肪细胞的诱导分化过程中,成脂标记基因PPARγ、aP2的表达量与对照相比显著升高,分化第8天观察到明显的脂滴。说明miR-103能够促进猪前体脂肪细胞分化。; 李美航仇杨刘帅董培越宁小敏李艳杰杨公社孙世铎; 关键词：猪前体脂肪细胞腺病毒

miR-143-3p促进C2C12成肌细胞分化被引量：5: 2013年; MicroRNAs(miRNAs)是一类小非编码RNA,近年研究发现其在骨骼肌发育调控中发挥重要作用.为探明miR-143-3p在C2C12成肌细胞分化中的调控作用,采用real-time PCR检测了miR-143-3p在小鼠各组织及C2C12成肌细胞分化过程中的表达;使用miR-143-3p的模拟物和特异性抑制剂分别处理细胞,采用real-time PCR和Western印迹分别检测成肌因子MyoG和成肌标志基因MyHC mRNA和蛋白水平的变化;用免疫荧光染色的方法观察肌管的形成.结果显示,miR-143-3p在小鼠各组织中均有表达,并且随着细胞分化表达量逐渐增加;C2C12成肌细胞过表达miR-143-3p,与对照组相比,成肌调控因子MyoG和成肌标志基因MyHC的mRNA和蛋白表达均显著升高,肌管数量明显增多;抑制剂处理结果显示,细胞分化被显著抑制.检测miR-143-3p对MyHC各亚型表达的影响发现,miR-143-3p表达的变化并不直接影响MyHC各亚型的表达.以上结果说明,miR-143-3p在骨骼肌和成肌细胞中均有表达,能够促进C2C12成肌细胞分化,但并不直接调控MyHCs的表达.; 云青吴国芳魏欢庞卫军杨公社沈清武; 关键词：微RNA 成肌分化

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国家自然科学基金(31072014)

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