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不同激活条件和培养基对兔卵母细胞孤雌激活和胚胎发育的影响被引量：3: 2008年; 对新西兰兔成熟卵母细胞在不同方式激活后的发育潜能和孤雌胚胎在不同培养体系中的发育进行了研究。结果发现电击激活和化学激活单独使用不能很好的激活兔卵母细胞,两次电击和化学激活配合使用能够较好的激活兔卵母细胞。通过比较发现B2培养基支持兔孤雌胚胎发育的能力显著高于其他培养基。试验建立了和体内受精时间过程相似的卵母细胞活化和培养系统,为兔的核移植技术优化了条件。; 李善刚陈学进李宏滨魏彩虹杜立新; 关键词：卵母细胞孤雌激活胚胎发育胚胎培养

成体兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因的打靶研究: 2010年; 目的构建兔HPRT基因打靶载体。方法在已经筛选到含有兔全长次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（Hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase，HGPR乃基因BAC克隆（LBNL1—304M19）的基础上，利用Red重组系统，从此克隆上将一段12．5kb无启动子的HGPRT基因组片段克隆到pKS-质粒上，产生pKS-HGPRT质粒。然后基于pKS-HGPRT和pEGFP—C1-SD1211质粒，构建了含有绿色荧光蛋白（GFP）及新霉素（neo）筛选标记基因的打靶载体pKS-HGPRT-GFP—neo。结果将线性化的打靶载体通过脂质体转染的方法整合到成体兔成纤维细胞基因组中，利用G418及6-TG进行细胞克隆的抗药物筛选，共得到抗性细胞克隆20个。对细胞克隆进行PCR及测序初步鉴定，获得8个发生同源重组的细胞克隆，还需利用Southern blotting做进一步验证。结论成功快速地构建了且PR丁基因敲除型打靶载体，为下一步进行体细胞核移植制备HGPRT基因敲除转基因克隆兔奠定基础。; 王伟张传山郭毅谷瑞环丁雷姚刚陈学进; 关键词：基因敲除细胞筛选

电穿孔介导外源基因转染兔成体成纤维细胞的初步研究被引量：5: 2010年; 目的采用电穿孔方法，介导质粒载体pEGFP-cl转入兔成体成纤维细胞，探讨建立电穿孔介导外源基因转染兔成体成纤维细胞的基本条件。方法电穿孔介导质粒载体pEGFP—cl转入7．10代兔耳成体成纤维细胞系GG，研究不同电压、电容、DNA剂量，孵育温度的条件下，观察细胞存活数，流式细胞仪测试GFP的含量。结果以PBS作为电击基础液、细胞浓度2×10^6个／ml，电压250V、电容700μF，DNA用量30μg时，兔耳成纤维细胞的转染率和存活率最佳。且电击前冰浴10min，电转染后37℃孵育10min有利于提高细胞的转染率和存活率。结论在合适电压、电容、DNA剂量条件下，电转染提供了外源基因转染兔耳成体成纤维细胞适用性；电转染前的一定时间冰浴和电转染后一定温度孵育可使电转染效率得到改善。; 谷瑞环李善刚宋伟杰王伟丁雷张艳邢凤英李垚陈学进; 关键词：电穿孔转染

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国家自然科学基金(30770324)