辽宁省教育厅高等学校科学研究项目(L2010625)
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 相关作者：赵晨阳何琳惠林萍李嵚于涛更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第四医院中国医科大学更多>>
- 发文基金：辽宁省教育厅高等学校科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 紫金牛三萜皂苷TSP02抑制人肝癌细胞增殖和侵袭作用机制研究被引量：7
- 2013年
- 目的:研究紫金牛三萜皂苷类化合物TSP02体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡和侵袭迁移的作用及其分子机制。方法:采用MTT比色法,检测不同时间、不同浓度的TSP02对人肝癌HepG2细胞和人正常肝HL-7702细胞的增殖抑制作用。采用流式细胞术检测药物处理后HepG2和HL-7702细胞周期和凋亡变化情况。进一步用Western blot法检测TSP02对周期调控蛋白CDK1,2和4,细胞凋亡相关蛋白Caspase-8,以及细胞迁移侵袭相关蛋白TGF-β1和E-cadherin表达水平的影响。最后通过细胞划痕实验和Transwell小室体外侵袭实验检测HepG2细胞经过TSP02处理后迁移侵袭能力的变化。结果:TSP02显著抑制人肝癌细胞HepG2的生长,抑制效果有明显的时间依赖性和浓度依赖性,而对人正常肝细胞HL-7702的作用不明显。与对照组比较,TSP02处理24 h在造成HepG2细胞S期细胞消失,细胞凋亡率明显增加的同时,还能够显著降低HepG2细胞中CDK1,2,4的表达,提高促凋亡蛋白Caspase-8的表达和活化,而对正常肝HL-7702细胞无论在周期和凋亡率上均无明显影响。此外,TSP02处理后的HepG2细胞移动和侵袭性下降的同时,分别下调和上调了肝癌侵袭相关蛋白TGF-β1和E-cad-herin的表达。结论:TSP02选择性促进人肝癌细胞HepG2凋亡并抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力。TSP02的这些体外抗肿瘤活性与其改变周期和凋亡调控蛋白,并影响侵袭相关TGF-β1和E-cadherin的表达有关。
- 赵晨阳惠林萍何琳李嵚
- 关键词：肝癌细胞周期凋亡
- 特异性杀伤肝癌细胞的噬菌体药物载体的构建被引量：1
- 2013年
- 目的以T4噬菌体为载体,构建特异性杀伤肝癌细胞的噬菌体药物载体,并对其选择性细胞毒活性进行初步评价。方法通过噬菌体文库筛选肝癌细胞特异性结合肽（tumor specific peptide,TSP）,利用分子克隆技术和噬菌体体外展示技术,将其与噬菌体小衣壳蛋白Soc重组,并展示在T4噬菌体表面。同时通过1-乙基（-3-二甲基氨基丙级基）碳酰二亚胺[1-ethyl-3-（3-dimethylaminopropyl）carbodiimide hydrochloride,EDC]化学法,将表阿霉素（epido-xorubicin,Epi）偶联在噬菌体衣壳表面,采用MTT法在细胞水平上检测噬菌体药物载体对人肝癌细胞Bel-7402和正常肝细胞HL-7702的选择性杀伤作用。结果 Soc-TSP融合蛋白以846拷贝/噬菌体颗粒的密度展示在T4噬菌体表面,Epi载药率达每个噬菌体颗粒表面近2 000个药物分子。与游离的Epi相比,构建的T4噬菌体药物载体对肝癌Bel-7402细胞的杀伤作用提高了4~6倍,而对正常肝细胞HL-7702的影响不大。结论肿瘤特异噬菌体药物载体可提高药物对肿瘤细胞的靶向性以及肿瘤细胞对药物分子的摄入,从而实现对肿瘤细胞的特异性杀伤。
- 李嵚赵晨阳惠林萍何琳于涛
- 关键词：噬菌体药物载体表阿霉素靶向
- 展示KDR胞外区VEGF结合域的T4噬菌体对肺癌细胞增殖侵袭的抑制作用
- 2013年
- 目的:构建展示KDR的T4噬菌体并在细胞水平上检测其抑制肿瘤细胞增殖侵袭的作用及机制。方法:利用SOE-PCR的方法将KDR膜外区D2和D3与T4噬菌体小衣壳蛋白SOC基因融合并克隆到pET28b表达载体中,经IPTG诱导表达并纯化后,利用体外展示技术将重组KDR-SOC蛋白展示在T4噬菌体表面,得到T4-KDR噬菌体。MTT法检测T4-KDR噬菌体对肺癌A549细胞的增殖抑制作用,并采用Transwell法检测其对VEGF促侵袭作用的影响。RT-PCR法检测T4-KDR对MMP-2和MMP-9 mRNA水平的影响,并通过Western blot方法检测其对VEGF诱导ERK1/2磷酸化及其下游CyclinD1,p27,Bcl-2和Bax表达水平的影响。结果:KDR-SOC在大肠杆菌中稳定表达,展示KDR的T4-KDR噬菌体具有结合VEGF-165的能力,并显著抑制肿瘤细胞增殖和侵袭活性,降低MMP-2和MMP-9基因mRNA水平。Western blot结果表明T4-KDR噬菌体抑制VEGF诱导ERK1/2的磷酸化,降低CyclinD1及Bcl-2表达的同时,提高p27和Bax的表达。结论:展示KDR的T4噬菌体具有抑制肺癌细胞增殖和侵袭作用,其对MEK/ERK信号通路及其下游调控因子的影响是其作用的重要分子机制。
- 李嵚何琳惠林萍赵晨阳于涛
- 关键词：T4噬菌体增殖血管内皮生长因子受体-2
