江苏省社会发展科技计划(BS2007019)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：朱进唐奇曹伯良张大为王小英更多>>
- 相关机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京医科大学江苏省血液中心更多>>
- 发文基金：江苏省社会发展科技计划南京市科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人源抗Met基因工程抗体scFv的改造与特性分析
- 2009年
- 目的:将已制备的抗Met单链抗体基因与人IgGFc基因片段融合,表达有活性的融合蛋白分子,以增强单链抗体的可溶性。方法:从人淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增并制备人IgG的Fc基因片段,并克隆于已构建好的pBAD-scFv原核表达载体中,转化大肠杆菌Top10,经阿拉伯糖诱导表达融合蛋白scFv-Fc。所表达的可溶性蛋白经亲和层析纯化、SDS-PAGE、Westernblot分析鉴定,并用ELISA检测抗体效价。结果:序列分析表明重组质粒pBAD-scFv-Fc基因序列正确;SDS-PAGE分析表明,scFv-Fc融合蛋白分子量为60ku,且为可溶性蛋白;该蛋白经过His亲和层析纯化、ELISA检测,结果表明,该融合蛋白能够与抗原分子Met特异性结合。结论:改造后的抗体融合蛋白scFv-Fc能与人Met特异性结合,增加了抗体蛋白溶解度,有利于抗体的大量制备。
- 熊林张爱霞李芸茜张大为曹伯良朱进唐荣才
- 关键词：MET基因工程抗体融合蛋白
- 人源抗EGFR抗体-鱼精蛋白融合蛋白的制备及活性分析被引量：1
- 2011年
- 目的:构建人抗EGFR单链抗体(scFv)/鱼精蛋白截短体(truncated protamine,tP)融合蛋白基因,在大肠杆菌中表达并纯化,分析该融合蛋白的生物学活性。方法:设计引物扩增人抗EGFR单链抗体编码序列,将其克隆于原核表达载体pBAD-A;人工合成tP序列,将其克隆于原核表达载体pBAD-AscFv上,构建成scFv/tP融合基因,在大肠杆菌TOP10F′中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用His-trap镍亲和层析柱纯化。ELISA分析scFv/tP融合蛋白抗原亲合活性,凝胶迁移阻滞实验检测scFv/tP融合蛋白与DNA的结合活性。结果:成功构建了人源抗EGFR抗体/tP融合基因,经L-Ara诱导后在大肠杆菌中实现了可溶性表达。表达的scFv/tP融合蛋白保持了与抗原的结合活性,同时具有结合DNA的能力。结论:scFv与tP融合后,同时具有与抗原和DNA结合的活性,该scfv/tP融合蛋白为EGFR表达阳性肿瘤的靶向基因治疗奠定了基础。
- 张峰王小英唐奇刘玉张慧林苏亦平冯振卿朱进
- 关键词：EGFR
- 全人源抗Met双价抗体的制备与特性分析
- 2008年
- 目的以抗HGF受体Met特异性的全人抗体Fab基因为模板,合成并表达双价抗体Diabody。方法以天然抗体库中筛选出的Fab基因为模板,分别扩增抗体的重链可变区与轻链可变区基因,经重叠拼接合成Diabody基因,克隆于原核表达载体pBAD/gⅢA中表达。在不同的培养条件下,阳性克隆经IPTG诱导表达,ELISA、SDS-PAGE、Western-blot和细胞免疫荧光分析。结果培养基成分和诱导剂的浓度对目的蛋白的表达未见有明显的影响,低温诱导能够促进可溶性蛋白的产生;但电泳与印迹分析表明,在29kD出现预期大小蛋白条带。双价抗体经表达、变性与复性和IMAC亲和纯化后,用细胞免疫荧光分析表明,Diabody能够与S114细胞表达Met的胞外区特异性结合。结论本研究制备的双价抗体能够与其抗原特异性结合,该抗体有望与其他抗体分子结合,制备双特异性抗体,为肿瘤临床诊断或治疗提供候选分子。
- 徐凛峰朱进唐奇张大为曹伯良管晓虹
- 关键词：抗肿瘤药原癌基因蛋白质C-MET抗体
