江苏省自然科学基金(BK2004404)
- 作品数：10 被引量：22H指数：2
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- bcr-abl基因疫苗对小鼠SP2/0/bcr-abl移植瘤的影响被引量：9
- 2006年
- 为了研究bcr-abl融合基因疫苗对小鼠SP2/0/bcr-abl移植瘤的影响,采用pVbcr-abl、pVbcr-abl/mIL7两种质粒分别免疫BALB/c小鼠,然后用SP2/0/bcr-abl细胞攻击免疫小鼠,观察疫苗对SP2/0/bcr-abl移植瘤生长的影响,检验其是否具有免疫保护作用。结果表明用基因疫苗免疫的两个实验组与两个对照组(空白对照组和空载体对照组)相比,在移植肿瘤形成时间、肿瘤表面破溃时间、肿瘤体积、荷瘤生存期等指标上均存在明显差异。pVbcr-abl/mIL7免疫小鼠组的荷瘤生存时间比pVbcr-abl免疫组相对延长。常规病理学分析发现,对照组小鼠的移植瘤组织比较致密,瘤细胞体积较大,形状不规则,而两个免疫组的肿瘤组织较为疏松,肿瘤细胞体积相对较小,并有大量炎性细胞浸润。两个对照组小鼠的肝脏组织内发现有大量肿瘤转移灶,而两个免疫组小鼠则未发现。结论接受bcr-abl基因疫苗免疫的小鼠被诱导产生较强的特异性免疫保护力,对SP2/0/bcr-abl移植瘤的体内生长有一定抑制能力。
- 姜扬文钱莉蒋桂花刘伟龚卫娟季明春
- 关键词：慢性粒细胞白血病BCR-ABL融合基因基因疫苗
- 双表达外源性4-1BBL/RANTES的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究
- 2007年
- 目的探讨K562细胞表达外源性蛋白4-1BBL/RANTES后,对T细胞、NK细胞有无活化作用,为进一步构建人工抗原提呈细胞提供前提。方法采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和RANTES基因插入双表达载体pVITRO-2,命名为pV4-1BBL-RANTES。经测序鉴定后,利用脂质体介导的转染及潮霉素筛选,获得稳定双表达4-1BBL、RANTES分子的K562细胞(K562/4-1BBL/RANTES)。经流式细胞仪(FACS)分选后,K562/4-1BBL/RANTES细胞用丝裂霉素C处理,与外周血淋巴细胞孵育24,FACS检测淋巴细胞表面活化性受体CD69的表达;对NK细胞同时检测了活化性受体NKG2D的表达情况。结果受K562/4-1BBL/RANTES细胞刺激后,CD3+T细胞、CD4+T细胞、γδT细胞和NK细胞的活化性受体CD69的表达与未受刺激前相比,均有明显上调;但与单纯K562细胞刺激组相比,无显著差异。另外,CD8+T细胞CD69的表达及NK细胞NKG2D的表达无明显变化。结论将4-1BBL和RANTES共表达于K562细胞,不具备活化淋巴细胞的效应。
- 王丽珩张俊钱莉曹正峰龚卫娟季明春
- 关键词：4-1BBLRANTESK562活化
- 慢性髓细胞白血病BCR-ABL融合基因片段的克隆表达及其单克隆抗体的制备被引量：2
- 2008年
- 目的制备针对慢性髓细胞白血病(CML)bcr-abl融合蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法采用PCR方法扩增包含BCR-ABL(b3a2)融合位点周围约450bp的基因片段,将其定向克隆到pQE-31载体内,转化大肠杆菌M15菌株,诱导表达6×His标签的融合蛋白p18bcr-abl并对其进行纯化,用纯化后的蛋白免疫Balb/c小鼠,采用常规的细胞融合技术制备针对bcr-abl蛋白的mAb并对其特性进行鉴定。结果获得了6株分泌抗bcr-abl融合蛋白mAb的杂交瘤细胞株,所分泌的mAbs均特异性识别bcr-abl蛋白abl端。结论本研究中所表达的融合蛋白p18bcr-abl及其mAb的获得为慢性髓细胞白血病的研究提供了有效的工具。
- 张保平潘兴元钱莉晋秋孺龚卫娟季明春
- 关键词：慢性髓细胞白血病BCR-ABL融合蛋白克隆表达单克隆抗体
- 利用流式细胞仪检测人外周血NK细胞毒性方法的建立被引量：5
- 2006年
- 目的利用流式细胞仪(FACS)技术检测人外周血NK细胞的毒性。方法首先将pEGFP-N1质粒转染人NK细胞的天然靶细胞K562,经过G418筛选后进一步单克隆化,得到稳定、均一表达绿色荧光蛋白的K562细胞。取对数期的K562-EGFP细胞与人外周血单个核细胞分别按5∶1、10∶1、20∶1、40∶1的比例混合,分别孵育0.5、1、2、4 h后用碘化丙啶(PI)标记,用流式细胞仪分析呈红、绿色荧光的细胞数,最后计算NK细胞的杀伤效率。结果0.5、1、2、4 h均能得到明显的杀伤效果,而且以2h的杀伤率最高。此时杀伤率与传统乳酸脱氢酶法(LDH)具有显著相关性(γ=0.997,P=0.003),而且显示出更强的敏感性。结论利用流式细胞仪检测NK细胞毒活性的方法可作为传统51Cr释放法、LDH法的一个补充,而且具有经济、快速和敏感的特点。
- 张俊钱亚云龚卫娟胡茂志季明春
- 关键词：流式细胞仪NK细胞细胞毒性
- 表达bcr-abl基因片段的可移植小鼠细胞系的生物学特性
- 2006年
- 目的建立稳定表达bcr-abl融合基因的、可移植的小鼠肿瘤细胞系,解决慢性粒细胞白血病疫苗研究的瓶颈问题。方法从重组克隆载体pGEMbcr-abl中酶切出bcr-abl融合基因片段,并将其亚克隆进反转录病毒载体pLXSN中。脂质体介导重组反转录病毒载体pLXSNbcr-abl转染包装细胞PT67,G418筛选后获得稳定产病毒的包装细胞。收集病毒感染NIH/3T3细胞,加G418筛选后进行反转录病毒滴度测定,计算病毒效价为2×107CFU/mL。收集病毒上清感染SP2/0细胞(H-2d),经G418筛选获得稳定表达bcr-abl融合基因片段的SP2/0细胞株。然后用SP2/0/bcr-abl细胞攻击同品系BALB/c小鼠,观察SP2/0/bcr-abl移植瘤生长的情况。结果经特异性PCR扩增和RT-PCR反应扩增,从基因组整合和基因表达水平证实获得了能稳定表达bcr-abl融合基因片段的鼠SP2/0细胞系。SP2/0/bcr-abl细胞能够在同品系小鼠体内形成移植肿瘤。结论该表达bcr-abl融合基因片段的小鼠肿瘤细胞系将作为研究bcr-abl基因疫苗的有效实验工具,为检验bcr-abl基因疫苗激发的小鼠CTL应答研究奠定物质基础。
- 姜扬文钱莉刘伟蒋桂花龚卫娟季明春
- 关键词：髓样融合基因肿瘤移植
- 人工抗原提呈细胞用于肿瘤免疫治疗的研究进展被引量：2
- 2006年
- 人工抗原提呈细胞的制备原理是模拟T细胞活化的双重信号机制,在一定的载体表面展现抗原肽-MHC分子复合物及共刺激分子、黏附分子的配体或抗体构建而成。它能有效活化和扩增抗原特异性T细胞,而且效率高、可行性好。人工抗原提呈细胞不仅对肿瘤的免疫治疗具有重要价值,而且还可用于抗原表位的筛选、效应细胞的检测及T细胞活化信号的研究。本文就人工抗原提呈细胞的研究进展作一综述。
- 王丽珩龚卫娟
- 关键词：抗原呈递细胞T淋巴细胞细胞毒性肿瘤免疫疗法
- 人免疫球蛋白受体FcγRIIa的基因克隆及在K562细胞的表达被引量：1
- 2006年
- 目的将外源人免疫球蛋白IgGFc段Ⅱ型受体CD32a分子表达于K562细胞表面,为构建人工抗原递呈细胞提供重要前提。方法自U937细胞RT-PCR得到CD32a的cDNA基因,与T载体连接后亚克隆入表达载体pcDNA3.1(+)。经测序后利用脂质体介导的转染将CD32a分子表达在K562细胞的表面。结果构建的T载体测序后,Genebank比对证实为CD32a的cDNA分子,免疫荧光和流式细胞仪结果均说明CD32a分子在K562细胞得到表达(96.9%)。结论获得的人工构建的表达人免疫球蛋白IgGFc受体的K562细胞,完成人工抗原递呈细胞制备的首要步骤。
- 田芳刘丹胡茂志龚卫娟季明春
- 关键词：K562细胞
- 双表达外源性4-1BBL/IL-15的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究被引量：1
- 2007年
- 为肿瘤过继免疫治疗开发体外激活T细胞、NK细胞的高效途径,研究双表达外源性4-1BBL和IL-15的K562细胞刺激外周血淋巴细胞活化的能力。采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和IL-15基因插入双表达载体pVITRO-2,命名为pV4-1BBL-IL-15。经测序鉴定后,利用脂质体介导的转染及潮霉素筛选,获得稳定双表达4-1BBL、IL-15分子的K562细胞(K562/4-1BBL/IL-15)。经流式细胞仪(FACS)分选后,K562/4-1BBL/IL15细胞和K562细胞分别用丝裂霉素C处理,与外周血淋巴细胞孵育24 h,FACS检测淋巴细胞表面活化性受体CD69的表达。对NK细胞不仅同时检测活化性受体NKG2D的表达,还用乳酸脱氢酶释放法观察NK细胞受不同刺激细胞作用后,细胞毒活性的变化。结果显示受K562/4-1BBL/IL15细胞刺激后,T细胞CD69的表达无明显变化。γδT细胞CD69表达增长5倍。NK细胞CD69表达增长6倍,而NKG2D的表达增加1.5倍;NK细胞受K562/4-1BBL/IL15细胞作用72 h后,细胞毒活性明显提高。提示双表达4-1BBL/IL-15的K562细胞能够高效激活γδT细胞及NK细胞,有望用于肿瘤的过继免疫治疗。
- 曹正锋万兵王丽珩刘丹龚卫娟季明春
- 关键词：4-1BBLIL-15K562活化
- bcr-abl和白介素-7共表达基因疫苗诱导小鼠免疫保护作用被引量：1
- 2007年
- 目的探讨小鼠白介素-7（IL-7）基因对bcr-abl融合基因疫苗诱导机体免疫应答的影响。方法采用pVbcr-abl／mIL-7质粒免疫BALB／c小鼠，检测小鼠血清中bcr-abl特异性抗体水平。以转染bcr-abl融合基因片段的SF2／0细胞为靶细胞，用LDH释放实验检测免疫小鼠脾细胞特异性细胞毒活性。结果pVbcr-abl／mIL-7质粒能诱导小鼠产生血清特异性抗bcr-abl抗体，pVbcr-abl／mIL-7免疫组的血清特异性抗体滴度高于pVbcr-abl免疫组，脾细胞杀伤SP2／0／bcr-abl靶细胞的细胞毒活性明显增强。结论共表达bcr-abl和mIL-7的基因疫苗能在小鼠体内诱导较高的特异性体液免疫和细胞免疫水平，为慢性粒细胞白血病基因疫苗的临床前实验研究提供了依据。
- 季明春姜扬文刘伟管俊钱莉龚卫娟
- 关键词：BCR-ABL基因基因疫苗
- bcr-abl融合基因片段和m IL-7基因双表达载体的构建与表达被引量：1
- 2006年
- 利用重组DNA技术构建bcr-ab l融合基因片段和m IL-7基因双表达载体pV bcr-ab l/m IL 7,转染CHO细胞,通过IFA检测bcr-ab l融合基因片段和RT-PCR检测m IL-7基因,以探讨基因的双表达情况。结果表明:成功构建了双表达载体pV bcr-ab l/m IL 7,并检测到bcr-ab l和m IL-7在真核细胞的暂态表达,这为慢性粒细胞白血病bcr-ab l融合基因疫苗的研究提供了新的工具。
- 刘伟钱莉龚卫娟蒋桂花姜扬文季明春
- 关键词：慢性粒细胞白血病IL-7基因疫苗
