国家自然科学基金(30671908)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 相关作者：王晶刘涛李卓娅冯玮于敏更多>>
- 相关机构：华中科技大学更多>>
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- 酶切位点缺失的跨膜型TNF-α突变体的构建及其功能的研究被引量：2
- 2010年
- 采用重叠PCR技术,构建TNF转化酶(TACE)酶切位点缺失的Δ1-12tmTNF-α和Δ1-9,K11EtmTNF-α突变体,并构建Δ1-12tmTNF-α-pcDNA3.0和Δ1-9,K11EtmTNF-α-pcDNA3.0重组质粒。通过ELISA、MTT、Western blot技术,研究2种突变体生物学功能的变化。结果显示Δ1-12tmTNF-α和Δ1-9,K11EtmTNF-α都不能被TACE剪切,Δ1-12tmTNF-α的胞毒效应明显低于野生型,且不能诱导NF-κB活化。而Δ1-9,K11EtmTNF-α既保留了野生型tmTNF-α的胞毒效应,又能诱导NF-κB活化。以上表明Δ1-9,K11EtmTNF-α突变体既丧失被酶解的能力,又能保留tmTNF-α正反向信号传递能力,为进一步研究tmTNF-α生物学功能提供了有力的工具。
- 陈克清刘牧云刘涛于敏冯玮姜晓丹李卓娅王晶
- 关键词：TMTNF-Α酶切位点
- 脂筏对跨膜型TNF-α信号的影响被引量：4
- 2010年
- 目的构建仅定位在脂筏内或外的tmTNF-α突变体,研究脂筏与tmTNF-α生物学功能的关系。方法通过重组PCR,构建C-47A-tmTNF-α-pIRES2-EGFP,cav-tmTNF-α-pIRES2-EGFP重组质粒。采用激光共聚焦观察定位、蔗糖密度梯度离心法提取脂筏、MTT比色法检测胞毒。结果获得了预期突变,且无任何其它点突变,移码及缺失突变的突变体。tmTNF-α部分定位在脂筏内,效应细胞的胞毒与tmTNF-α定位在脂筏内外无关,而破坏靶细胞脂筏结构导致胞毒效应下降,且与ICAM-1相关。结论效应细胞的胞毒与脂筏无关,而靶细胞与脂筏密切相关,该研究有助于进一步认识tmTNF-α介导的生物学功能与脂筏间的关系。
- 刘涛陈克清张述于敏冯玮姜晓丹尹丙姣李卓娅王晶
- 关键词：脂筏信号
