国家自然科学基金(39770788)
- 作品数：7 被引量：92H指数：6
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- 相关机构：四川大学华西医院遵义医学院附属医院遵义医学院更多>>
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- 可见光对培养的人视网膜色素上皮细胞内碱性成纤维细胞生长因子、成纤维细胞生长因子受体1、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因及caspase-3的影响被引量：9
- 2003年
- 目的 观察可见光诱导的培养人视网膜色素上皮 (RPE)细胞凋亡中 ,RPE细胞内碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、成纤维细胞生长因子受体 1(FGFR1)、B细胞淋巴瘤 /白血病 2基因(bcl 2 )及caspase 3的表达变化。方法 建立可见光诱导培养的人RPE细胞凋亡的模型 ,通过细胞免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、酶联免疫测定等方法 ,对培养的人RPE细胞内bFGF和其受体FGFR1的mRNA表达变化、Bcl 2表达改变以及caspase 3的活性变化进行了检测。 结果(1)光照后 6及 12h ,培养的人RPE细胞胞质内Bcl 2蛋白的表达有一定的下降趋势 ,但与无光照组之间差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。光照后 2 4h ,Bcl 2蛋白表达下降明显 (P <0 0 1)。bcl 2mRNA表达与上述蛋白表达变化相似 ,但早在光照 12h后已能检测到其表达下降。 (2 )光照后 6hbFGF及FGFR1的表达尚无明显改变 (P >0 0 5 ) ,随着时间延长 ,其表达增加的差异具有显著意义(P <0 0 5 )。(3)光照后caspase 3活性随时间延长而明显增加 ,与未光照时比较 ,光照结束后 6、12及2 4h活性差异有显著意义 (P <0 0 5 )。 12和 2 4h间差异无显著意义 (P >0 0 5 )。结论 可见光照诱导培养的人RPE细胞凋亡时 ,RPE细胞内bcl 2表达下降 ,内源性bFGF及FGFR1上调 ,caspase 3?
- 周咏东严密张军军
- 关键词：可见光培养人视网膜色素上皮FGFR1B细胞淋巴瘤CASPASE-3
- 蓝光致人视网膜色素上皮细胞凋亡与线粒体膜电位和细胞色素C的关系被引量：32
- 2006年
- 目的探讨蓝光光照对体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡及对线粒体膜通透性转运功能的影响。方法用蓝光光照体外培养的人RPE细胞。实验分为三部分。第一部分:不同光照度,分为3组,第1组光照度(500±100)lx,第2组光照度(2000±500)lx,第3组光照度(3000±500)lx;光照RPE细胞时间6h,光照结束后24h终止培养。第二部分:同一光照度、不同光照时间,检测RPE细胞亚型时分为3组,第1组光照时间6h,第2组光照时间12h,第3组光照时间24h,光照度均为(2000±500)lx;检测线粒体膜电位时也分为3组,第1组光照时间3h,第2组光照时间6h,第3组光照时间12h,光照度均为(2000±500)lx。第三部分:同一光照度和光照时间,光照度(2000±500)lx,光照RPE细胞时间6h;不同细胞培养终止时间分为4组,第1组终止细胞培养时间为光照后6h,第2组为光照后12h,第3组为光照后24h,第4组为光照后36h。利用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)染色、荧光素标记的AnnexinV-FITC和PI双染流式细胞检测、透射电镜等手段观察RPE细胞凋亡情况。罗丹明123荧光染料孵育人RPE细胞,流式细胞仪检测线粒体膜电位,酶联免疫法测定细胞色素C活性,比色测定法测定Caspase-3的活性。结果第二部分第1组TUNEL染色阳性细胞的体积缩小变圆,胞核浓缩,边聚成新月形或帽状,细胞核碎裂成数个,细胞膜出胞。透射电镜观察发现细胞内线粒体肿胀,线粒体内膜嵴消失,粗面内质网扩张,溶酶体增加。第一部分(500±100)lx光照未引起明显的RPE细胞损伤,但线粒体膜电位明显下降;随着光照度增加,RPE细胞出现凋亡、凋亡继发性坏死及坏死,同时线粒体膜电位逐渐下降。第二部分光照6和12h,凋亡细胞百分比增加,荧光强度明显下降;光照24h凋亡继发性坏死细胞、坏死细胞百分比增加。第三部分光照后6和12h,RPE细胞凋亡百分比逐渐增加;光照后24、36h�
- 蔡善君严密毛咏秋周焰刘关键
- 关键词：色素上皮细胞凋亡线粒体膜电位细胞色素C类
- 蓝光诱导体外培养的人视网膜色素上皮细胞凋亡被引量：35
- 2005年
- 目的观察蓝光光照对体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。方法用蓝光照射体外培养的人RPE细胞,分为3组,A组不同光照强度;B组同一光照强度,不同光照时间;C组同一光照强度和光照时间,不同细胞培养终止时间。利用末端脱氧核酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)、荧光素标记的连接素V/碘化吡啶(Annexin V-FITC/PI)双染流式细胞检测、透射电子显微镜等手段观察细胞凋亡。结果TUNEL染色阳性细胞的体积缩小变圆,细胞核浓缩,边聚成新月形或帽状,细胞核碎裂成数个,细胞膜出胞。透射电子显微镜观察发现细胞内线粒体肿胀,线粒体内膜嵴消失;粗面内质网扩张;溶酶体增加,内含代谢产物。A组低于一定阈值[(500±100)lx]的蓝光光照对RPE细胞损伤较轻,细胞凋亡及坏死随光照强度的增强而增加;B组随着光照时间延长,RPE细胞凋亡数量没有增加,而细胞坏死逐渐增加;C组光照后6、12h,损伤以细胞凋亡为主,但随着光照时间延长,凋亡继发坏死细胞和坏死细胞明显增加。结论蓝光照射可引起体外培养的人RPE细胞损伤,损伤形式有凋亡、凋亡继发坏死及坏死;损伤程度呈光照强度和光照时间依赖性。
- 蔡善君严密张军军
- 关键词：眼损伤细胞死亡光刺激临床实验室技术
- 蓝光对人视网膜色素上皮细胞线粒体膜电位及细胞色素C的影响被引量：8
- 2005年
- 目的 探讨蓝光导致人视网膜色素上皮 (retinal pigm ent epithelium,RPE)细胞损伤的分子机制 ,明确在此过程中线粒体膜电位及细胞色素 C(cytochrom e C,Cyt C)是否发生变化。方法 用蓝光照射体外培养的人 RPE细胞 ,罗丹明 12 3荧光染料孵育人 RPE细胞 ,流式细胞仪检测线粒体膜电位 (ΔΨm)。分为 3组 ,A组 :不同光照强度 ;B组 :同一光照强度 ,不同光照时间 ;C组 :同一光照强度和光照时间 ,不同细胞培养终止时间。用酶联免疫法测定Cyt C的活性 ;比色测定 Caspase- 3的活性。分为两组 :(2 0 0 0± 5 0 0 ) lx,光照 6 h为 组 ,光照 12 h为 组。结果 A组线粒体膜电位随着光照强度增加 ,呈逐渐下降趋势 ;B组在光照 3h,RPE细胞荧光强度无明显变化 ,当光照 6 h,荧光强度明显下降 ;C组光照后 6 h,荧光强度开始明显下降 ,一直持续到光照后 4 8h。 组和 组光照后 2 4及 36 h,Cyt C的浓度明显升高 ,光照后 2 4 h,后者 Cyt C浓度的升高值明显高于前者。未检测到 Caspase- 3活性变化。结论 蓝光照射导致培养的人 RPE细胞损伤过程与线粒体膜电位降低、细胞色素
- 蔡善君严密张军军毛咏秋
- 关键词：光损伤视网膜色素上皮线粒体膜电位细胞色素C
- 可见光照对培养的人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响被引量：18
- 2002年
- 目的 研究可见光照对培养的人视网膜色素上皮 (retinal pigment epithelium,RPE)细胞凋亡的影响。 方法 以白色荧光灯为光源 ,用 5 0 0 lx、(2 0 0 0± 5 0 0 ) lx及 (340 0± 2 0 0 ) lx不同光照强度 ,按不同的光照时间 (无光照、6、12、2 4 h)照射培养的人 RPE细胞。利用终末脱氧核糖核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记 (terminal deoxynucleotidyl transferase mediated d UTP nick end labelling,TUNEL)、荧光素标记的连接素 V/碘化丙锭 (Annexin V- fluorescein isothiocyanate/ Propidium iodium,AnnexinV- FITC/ PI)双染色流式细胞测定、相差倒置显微镜等手段观察 RPE细胞凋亡 (分为光照后 6、12、2 4、36 h组 )。 结果 可观察到 RPE细胞出现两种死亡形式 ,凋亡与坏死。 (1)低于一定阈值 (5 0 0 lx)的光照对细胞损伤较轻 ,细胞凋亡及坏死随光照强度的增加而增加。 (2 )在较短的光照时间 (6 h和 12 h)内 ,细胞死亡的增加以凋亡为主 ;随着光照时间的延长 ,细胞坏死逐渐明显。 (3)随着光照后培养时间的延长 ,细胞凋亡明显增加 (P<0 .0 5 )。光照后 6、12、2 4 h的损伤改变以凋亡为主 ,但随时间的延长 ,凋亡继发性坏死的增加显著。光照后 36 h,细胞的坏死数显著增高 (P<0 .0 1)。 结论 可见?
- 周咏东严密张军军
- 关键词：人视网膜色素上皮细胞凋亡
- 碱性成纤维细胞生长因子对可见光诱导的人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响被引量：12
- 2003年
- 目的 观察外源性碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,b FGF)对可见光诱导培养的人视网膜色素上皮 (retinal pigment epithelium,RPE)细胞凋亡的影响。 方法 以 (2 0 0 0±5 0 0 ) lx白色荧光灯照射培养的人 RPE细胞 ,利用荧光素标记的连接素 V/碘化丙锭 (annexin V- fluores-cein isothiocyanate/ propidium iodium,Annexin V- FITC/ PI)双染色流式细胞测定、细胞免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应 (reverse transcriptional polymerase chain reaction,RT- PCR)、酶联免疫测定等方法 ,检测加入不同浓度的 b FGF后 ,培养的 RPE细胞的凋亡及细胞内 b FGF、成纤维细胞生长因子受体 1(fibrob-last growth factor receptor1,FGFR1)、B细胞淋巴瘤 /白血病 - 2 (B- cell lymphom a/ leukemia- 2 ,bcl- 2 )基因及半胱天冬酶 - 3(caspase- 3)的变化。 结果 (1)分别加入外源性 b FGF10、2 0 ng/ ml时 ,RPE细胞凋亡比单纯光照组明显减少 (P<0 .0 5 ) ;(2 )加入 b FGF 10 ng/ ml组的 bcl- 2蛋白表达比单纯光照组明显增加(P<0 .0 1) ,而与无光照组之间差异无显著性意义 (P>0 .0 5 ) ;(3)光照后 bcl- 2 m RNA表达比无光照组下降 ,但随着加入 b FGF浓度的增高 ,bcl- 2 m
- 周咏东严密张军军
- 关键词：视网膜色素上皮细胞凋亡外源性碱性成纤维细胞生长因子CASPASE类
- YVAD-cmK及DEVD-CHO对培养的人视网膜色素上皮细胞光损伤的影响
- 2003年
- 目的 观察半胱天冬酶(caspase-3)选择性抑制剂天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酰胺醛(Asp-Glu-Val-Asp-CHO,DEVD-CHO),及caspase-1选择性抑制剂酪氨酸-缬氨酸-丙氨酸-天冬氨酰胺(Tyr-Val-Ala-Asp-cmK,YVAD-cmK)对可见光诱导的培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。方法 用(2000±500)lx的白色荧光灯光源,照射培养的人RPE细胞。在培养液中加入YVAD-cmK和DEVD-CHO,利用荧光素标记的连接素V/碘化丙锭双染色流式细胞测定观察RPE细胞的凋亡情况。结果 本研究模型下,DEVD-CHO预处理组的细胞凋亡及坏死与无光照组相比,差异无显著性(P>0.05),与光照组及YVAD-cmK预处理组相比,细胞存活数增高,差异有显著性(P<0.05)。而YVAD-cmK组与无光照组比较,其结果与单纯光照组一样,表现出细胞的明显损伤(P<0.05)。结论 可见光诱导培养的人RPE细胞凋亡的发生机制中,可能不涉及casrpase-1的作用。外源性的caspase-3抑制剂(DEVD-CHO)对RPE细胞光性损伤有一定的保护作用。
- 周咏东严密张军军
- 关键词：光损伤半胱天冬酶
