教育部科学技术研究重点项目(20040316005)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：黄晓东吴梧桐樊夏雷李忠红更多>>
- 相关机构：中国药科大学江苏省药品检验所更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HPLC-ESI-ITMS在药品质量控制中确证胰岛素和胰岛素B链C端氨基酸序列的应用研究
- 2007年
- 在药品质量控制中应用HPLC-ESI-IT(Ion Trap)MS分别确证胰岛素和胰岛素B链的C端氨基酸序列。取胰岛素标准品溶液或者胰岛素B链溶液适量,加入羧肽酶P及羧肽酶Y溶液适量降解胰岛素或者胰岛素B链C端,在预定的时间点取出酶降解反应液适量,加入等体积1%甲酸停止反应,混旋均匀后制成供试液,供HPLC-ESI-ITMS分析测定。采用Zorbax Prosphere C18柱(2.1 mm×150 mm,300A,5μm)分离,以流动相进行梯度洗脱[A相:水-乙腈-三氟乙酸(98∶2∶0.02),B相:乙腈-水-三氟乙酸(98∶2∶0.02)]。柱后修饰“TFAfix”溶液为丙酸-异丙醇(2∶8)的混合溶液。ESI-ITMS测定供试液中梯度多肽系列(彼此相差1个C端氨基酸残基)的分子质量,计算出分子质量最相近的相邻两肽段的系列分子质量差值,即可得到待测样品C端系列氨基酸残基质量的实验值。胰岛素的B链C端的第1个氨基酸残基丙氨酸残基可以被准确地确证;同样还原修饰的胰岛素B链C端的第1个氨基酸残基丙氨酸残基也能被准确地确证。本研究在nmol样品水平准确地确证胰岛素和胰岛素B链各一个C端氨基酸,符合重组DNA制品中试产品的质量控制要求。本实验方法不必将胰岛素经还原修饰将A链从B链裂解,直接确证胰岛素的C端氨基酸残基,避免还原修饰和纯化的烦琐操作,方法简便。
- 黄晓东樊夏雷吴梧桐李忠红
- 关键词：胰岛素
