湖南省自然科学基金(055JJ30060)
- 作品数：5 被引量：69H指数：4
- 相关作者：陈风华方加胜王延金伍军毕长龙更多>>
- 相关机构：中南大学武警总医院杭州市萧山区第一人民医院更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金湖南省卫生厅科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 神经上皮肿瘤中脑肿瘤干细胞的分离培养和原发性多药耐药机制分析被引量：6
- 2009年
- 目的探讨ABC家族转运体耐药基因MDR1、MRP1和DNA修复酶耐药基因MGMT在脑肿瘤干细胞原发性多药耐药中的作用机制。方法以CD133为脑肿瘤干细胞特异性标志物,利用免疫磁珠法分离30例人脑神经上皮肿瘤标本中的CD133+与CD133-细胞,并进行CD133+细胞的体外扩增培养,传代与鉴定。应用半定量RT-PCR法检测CD133+与CD133-细胞中耐药蛋白MDR1、MRP1、MGMT的活性表达情况。结果免疫磁珠法能有效的分选出脑肿瘤干细胞,该类细胞具有异常的增殖能力。MDR1、MRP1与MGMT耐药基因在CD133+细胞中高度表达,并与肿瘤的病理级别正相关,其总体水平分别为CD133-细胞的16.1、19.6及34.0倍。并非所有的脑肿瘤干细胞均有耐药基因的表达,MDR1、MRP1与MGMT的总体阳性表达率分别为76.7%、86.7%t和73.3%。ABC家族转运体耐药基因和DNA修复酶耐药基因在CD133+细胞中的表达有明显的相关性。结论神经上皮肿瘤中存在一定比例的CD133+脑肿瘤干细胞,免疫磁珠法能有效的分选出CD133+细胞。在异质性肿瘤中仅有小部分亚群细胞(CD133+脑肿瘤干细胞)具有原发耐药性,而ABC家族耐药蛋白和DNA修复酶在脑肿瘤干细胞中的共同过度表达是临床上脑肿瘤多药耐药的主要原因之一,脑肿瘤干细胞是神经上皮肿瘤原发性化疗耐药的根源和关键性治疗标靶。
- 毕长龙方加胜陈风华王延金罗湘颖
- 关键词：脑肿瘤干细胞多药耐药基因免疫磁珠CD133
- 神经上皮来源脑肿瘤中肿瘤干细胞的分离培养与鉴定被引量：16
- 2007年
- 目的建立人神经上皮来源脑肿瘤中肿瘤干细胞的体外分离、培养体系，观察其分化现象，鉴定其特异性标志物，为脑肿瘤干细胞的进一步研究打下基础。方法将26例脑肿瘤手术中取出的脑肿瘤细胞，以2×10^5／ml的密度接种于含生长因子的无血清培养基培养，使其中的脑肿瘤干细胞增殖，并进行单克隆形成实验及溴脱氧尿苷掺入实验；然后将增殖形成的脑肿瘤干细胞球接种于无生长因子的含血清培养基诱导分化；利用免疫荧光和免疫组化法检测脑肿瘤干细胞在细胞培养和组织切片中CD133和巢蛋白的表达。结果各类肿瘤标本中仅有少数肿瘤细胞能够在无血清培养基中存活并悬浮生长，并增殖形成克隆性脑肿瘤干细胞球，传代后脑肿瘤干细胞保持很强的自我更新和增殖能力；在含血清培养基中脑肿瘤干细胞贴壁分化；体外培养中脑肿瘤干细胞表达神经干细胞的特异性标志物CD133和巢蛋白，在肿瘤组织切片中存在CD133阳性细胞，其阳性表达率为（21．0±6．2）％～（38．0±7．0）％。结论人神经上皮来源脑肿瘤组织中存在少量具有自我更新和增殖能力、表达CD133和巢蛋白的脑肿瘤干细胞，并能在体外将其分离、培养和诱导分化；脑肿瘤干细胞有可能成为脑肿瘤基础研究的新平台和临床治疗的重要靶细胞。
- 方加胜邓永文李茗初陈风华王延金卢明方芳伍军杨转移周向阳王飞陈诚
- 关键词：肿瘤干细胞
- 人类神经上皮肿瘤中Nestin^+细胞的分离培养和表达被引量：1
- 2009年
- 目的:检测巢蛋白(Nestin)在神经上皮肿瘤组织、细胞中的表达,评价Nestin+细胞体外生物学特性并探讨其意义.方法:采用免疫组化法检测神经上皮肿瘤组织中Nestin的表达情况,免疫磁珠法分选肿瘤组织中的Nestin+细胞,悬浮细胞培养法进行Nestin+细胞的增殖、分化与鉴定,RT-PCR法检测Nestin蛋白在其中的活性表达情况.结果:Nestin在肿瘤内皮细胞中均有阳性染色,而在神经上皮肿瘤细胞中阳性染色比例为9.5%～96.2%,且Nestin+细胞比例及染色强度与肿瘤的恶性程度正相关.Nestin+细胞能在无血清培养基中形成典型的脑肿瘤球,在含血清培养基中分化为成熟的神经细胞系.Nestin蛋白在Nestin+细胞中活性表达强度约为阴性细胞的18.5倍,其表达强度取决于细胞的来源.结论:Nestin表达检测有助于正确评价神经上皮肿瘤的生物学行为和恶性程度,并可作为判断肿瘤病理级别和患者预后的重要依据.
- 毕长龙方加胜朱桂英陈风华王延金霍雷
- 关键词：神经系统肿瘤病理级别脑肿瘤干细胞
- 髓母细胞瘤中脑肿瘤干细胞的分离培养及鉴定被引量：39
- 2006年
- 背景与目的:长期以来,脑肿瘤等实体肿瘤中是否存在肿瘤干细胞一直存在争论,最近已经有报道从胶质瘤和髓母细胞瘤等脑肿瘤及其它系统实体肿瘤中成功分离出肿瘤干细胞。本研究旨在利用简化的无血清培养基和悬浮培养方法,从人髓母细胞瘤中分离培养脑肿瘤干细胞,观察其在体外的增殖、分化,鉴定其特异性标志物CD133和Nestin的表达,验证肿瘤组织切片中CD133阳性细胞的存在,为脑肿瘤干细胞的进一步研究打下基础。方法:术中取11例患者髓母细胞瘤组织,分离成单细胞悬液,接种于含表皮生长因子、成纤维生长因子以及B27添加剂的无血清培养基中悬浮培养,以分离其中的脑肿瘤干细胞;对其增殖形成的脑肿瘤干细胞球连续传代培养;并进行单克隆形成实验,以确定原代肿瘤组织中肿瘤干细胞的百分率,观察脑肿瘤干细胞球的形成过程。然后,将脑肿瘤干细胞球接种于含血清培养基,观察脑肿瘤干细胞的分化现象。最后,利用免疫荧光法检测脑肿瘤干细胞特异性标志物CD133和Nestin在脑肿瘤干细胞球中的表达;利用免疫组化法检测组织切片中CD133阳性细胞的分布,并计算CD133阳性细胞百分率。结果:本组11例髓母细胞瘤中均仅有少数肿瘤细胞能够在无血清培养基中存活并悬浮生长、增殖形成克隆性脑肿瘤干细胞球,传代后脑肿瘤干细胞仍保持很强的自我更新和增殖能力。单克隆形成实验表明原代肿瘤细胞中具有单克隆形成能力的肿瘤干细胞百分率为(31.18±6.18)%。在含血清培养基中脑肿瘤干细胞发生贴壁分化,产生具有多种细胞形态的分化细胞。脑肿瘤干细胞表达神经干细胞的特异性标志物CD133和Nestin;肿瘤组织切片中CD133阳性细胞呈巢状或散在分布,占全部肿瘤细胞的(33.06±8.57)%。结论:人髓母细胞瘤组织中存在一定量的具有自我更新和增殖能力、表达CD133和Nestin�
- 李茗初邓永文伍军陈风华刘劲芳方加胜
- 关键词：髓母细胞瘤肿瘤干细胞细胞分化CD133NESTIN
- CD133^+胶质瘤干细胞化疗耐受机制分析被引量：15
- 2007年
- 目的:探讨ABC超家族转运体蛋白在CD133+胶质瘤干细胞多药耐药性中的作用机制。方法:选取30例人脑胶质瘤标本,利用免疫磁珠法分选标本中的CD133+胶质瘤干细胞(悬浮细胞)和CD133-肿瘤细胞(黏附细胞),并进行分选细胞的体外扩增培养、传代与鉴定,应用免疫组化和RT-PCR法分别检测细胞中MDR1和MRP1的蛋白及其活性表达情况。结果:3例胶质母细胞瘤来源的CD133+细胞能在含血清培养基中形成肿瘤干细胞球,并进行1～3次传代;MDR1与MRP1耐药蛋白在CD133+细胞中高度表达,阳性细胞比例范围分别为18%～67%和23%～73%;MDR1与MRP1在CD133+细胞中的表达活性分别为在CD133-细胞中的16.1倍和19.6倍;多药耐药蛋白的阳性细胞比例和其表达活性与肿瘤的恶性程度呈正相关,而表达阳性率与肿瘤的病理级别无关;MDR1与MRP1在CD133+细胞中的表达有明显的相关性。结论:神经上皮肿瘤中仅有小部分细胞亚型(CD133+胶质瘤干细胞)具有内在耐药性(天然耐药性),而ABC超家族转运体蛋白MDR1与MRP1在CD133+胶质瘤干细胞中的共同过度表达是胶质瘤多药耐药的主要原因之一;CD133+细胞是胶质瘤化疗的关键性治疗标靶。
- 毕长龙方加胜陈风华王延金伍军
- 关键词：CD133胶质瘤肿瘤干细胞免疫磁珠化疗耐受
