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国家自然科学基金(81101702)

作品数：2 被引量：0H指数：0
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文献类型

  • 2篇中文期刊文章

领域

  • 2篇医药卫生

主题

  • 2篇源性
  • 2篇人源
  • 2篇人源性
  • 2篇人源性抗体
  • 2篇抗体
  • 2篇G250
  • 1篇肾癌
  • 1篇肾癌细胞
  • 1篇肾肿瘤
  • 1篇全长
  • 1篇肿瘤
  • 1篇重组腺病毒
  • 1篇细胞
  • 1篇显像
  • 1篇腺病
  • 1篇腺病毒
  • 1篇免疫
  • 1篇免疫显像
  • 1篇放射免疫
  • 1篇放射免疫显像

机构

  • 2篇徐州医学院

作者

  • 2篇郑骏年
  • 2篇李望
  • 2篇刘俊杰
  • 2篇程乾
  • 2篇方琳

传媒

  • 2篇徐州医学院学...

年份

  • 2篇2013
共 2 条 记 录，以下是 1-2
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排序方式：
表达抗G250人源性抗体增殖缺陷型腺病毒的构建
2013年
目的构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒。方法通过重叠延伸PCR、常规PCR方法，分别获得G250重链的可变区和恒定区（GH）eDNA序列及G250轻链（GL）eDNA序列，并克隆至pCLON12-IRES载体上，构建质粒pCLON12-GL-IRES—GH。酶切质粒pCLON12-GL—IRES—GH回收GL—IRES—GH片段，克隆至腺病毒载体pDC315，构建pDC315-GL—IRES—GH（pDC315-G250）。将pDC315-G250与腺病毒包装骨架质粒pBHGE3共转染HEK293细胞，重组包装表达G250抗体的增殖缺陷型腺病毒AdDC315一G250。纯化病毒表达的G250抗体，免疫印迹实验检测该抗体能否与细胞表面抗原特异性结合。结果PCR及测序结果表明成功构建质粒pCLON12-GL—IRES—GH及腺病毒穿梭质粒pDC315-G250。PCR鉴定表明重组腺病毒AdDC315-G250含有目的基因，病毒包装成功。免疫印迹实验结果显示，纯化的抗体在G250抗原阳性的细胞中能检测到目的条带。结论成功构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒。
方琳程乾李望刘俊杰郑骏年
关键词：肾肿瘤G250抗体重组腺病毒
表达抗G250人源性抗体腺病毒对肾癌细胞的影响
2013年
目的检测腺病毒Ad-G250表达的G250全长人源性抗体的生物学活性及其对肾癌细胞的影响。方法扩增纯化腺病毒Ad—G250、Ad—EGFP（对照病毒）。病毒感染LO-2细胞，ELISA法检测细胞培养液中抗体的表达量。收集病毒感染后的细胞上清液进行纯化，Westernblotting检测纯化抗体的相对分子质量及其与细胞表面G250抗原的结合能力。免疫组化法检测Ad—G250表达的抗体是否具有生物学活性。CCK-8法检测Ad—G250对肾癌Ketr-3及ACHN细胞增殖的影响。AnnexinV—PE／7-AAD法检测Ad—G250对‘肾癌Ketr-3及ACHN细胞凋亡的影响。结果病毒Ad—G250感染LO-2细胞后G250抗体的表达量随着感染天数的增加而增加。Westernblotting实验显示Ad—G250能够表达G250抗体的轻链和重链，电泳图上该抗体能使G250抗原阳性的Ketr-3和786-O细胞在相对分子质量58×10’附近出现反应条带，而G250抗原阴性的ACHN和HK-2细胞在相应位置无反应条带。细胞免疫组化实验显示Ketr-3细胞膜被染成棕黄色，而ACHN细胞未见着色。CCK-8实验结果显示，Ad—G250对Ketr-3细胞有抑制作用，而对ACHN细胞的抑制作用不明显；Ad—G250抑制Ketr-3细胞增殖存在浓度及时问依赖性。凋亡实验显示，Ad—G250诱导Ketr-3细胞凋亡作用和ACHN细胞相比差异具有统计学意义，Ad—G250诱导Kert-3凋亡作用和Ad—EGFP相比差异有统计学意义。结论腺病毒Ad—G250成功表达出具有生物学活性的人源性G250抗体，且Ad—G250可抑制表达G250抗原的肾癌细胞增殖，诱导其凋亡。
方琳程乾李望刘俊杰郑骏年
关键词：G250放射免疫显像
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