江苏省自然科学基金(BK2004428)
- 作品数：5 被引量：29H指数：3
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- 相关机构：江苏省人民医院南京医科大学更多>>
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- 新型超微载体FA-PAMAM介导hTERT-siRNA对人脑胶质瘤细胞系U251抑制作用的体外研究被引量：9
- 2008年
- 目的探讨由叶酸(FA)修饰的聚酰胺-胺型高聚物(PAMAM)制成的新型超微载体FA-PAMAM介导人端粒酶催化亚基(hTERT)-siRNA对人脑胶质瘤细胞系U251的抑制作用。方法人脑胶质瘤细胞系U251被分为FA-PAMAM/hTERT-siRNA转染组(干涉组)、FA-PAMAM空载对照组(空载对照组)和空白对照组。利用FA-PAMAM介导hTERT-siRNA体外转染胶质瘤细胞系U251,流式细胞仪检测各组细胞转染效率、细胞增殖活性、hTERTmRNA表达水平、端粒酶活性以及细胞凋亡率。结果FA-PAMAM在体外能够有效地将hTERT-siRNA转染导入胶质瘤细胞系U251,转染效率为67.36%;干涉组细胞存活率随转染时间的延长而逐渐降低,以转染后48h最低,仅为(68.97±1.19)%,与同一时限空载对照组比较,差异有统计学意义(P=0.000);转染后72h,干涉组hTERTmRNA表达水平较空载对照组和空白对照组下调57%,差异有统计学意义(均P=0.000);转染后72h,干涉组端粒酶活性为(52.57±5.34)TPG,与空载对照组和空白对照组比较明显下调,差异有统计学意义(均P=0.000);转染72h后,干涉组细胞凋亡率为(29.63±2.91)%,高于空载对照组和空白对照组,差异有统计学意义(均P=0.000),肿瘤细胞生长明显受到抑制。结论FA-PAMAM作为一种新型超微载体可于体外有效转染hTERT-siRNA,具有高效、低细胞毒性之优点;hTERT-siRNA可作为胶质瘤基因治疗的靶点。
- 李瑞张军霞石磊尤永平傅震鲁艾林陈云祥赵鹏魏栋
- 关键词：神经胶质瘤
- 反义hTERT抑制恶性胶质瘤生长的体内外研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨腺病毒介导的反义hTERT在体内外对恶性胶质瘤细胞生长的影响。方法构建含有hTERT反义序列的腺病毒载体在体内外转染恶性胶质瘤细胞系U251，检测肿瘤细胞生长情况、细胞周期变化、端粒酶活性、hTERT蛋白表达等。结果腺病毒介导的hTERT反义治疗在体外明显抑制肿瘤细胞生长，增殖减慢，凋亡增多，细胞较多聚集在G0／G0期，转染后第6天细胞生存率为46．9％，端粒酶活性和hTERT蛋白表达都明显下降，在体内实验中肿瘤生长明显减慢。结论腺病毒介导的反义hTERT在体内外能明显抑制恶性胶质瘤细胞的生长。
- 尤永平傅震赵鹏王存祖陈云祥陆小明鲁艾林刘宁
- 关键词：反义HTERT基因疗法神经胶质瘤
- 靶向人端粒酶逆转录酶基因小片段干涉RNA慢病毒表达载体的构建与鉴定被引量：9
- 2008年
- 目的通过构建靶向人端粒酶催化亚基人端粒酶逆转录酶基因（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）RNA干涉（RNA interference，RNAi）慢病毒载体，获得可供转染的滴度，为进一步研究该基因缺陷在真核细胞中的影响提供物质基础。方法根据hTERT设计的两条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链插入到pLVTHM质粒，生成含RNAi盒的载体，然后与pCMV—dR8．74和pMD2G病毒包装所必须的元件经脂质体导入T293细胞，包装成慢病毒，收集上清浓缩病毒并检测其滴度。所得病毒感染U87胶质瘤细胞，逆转录PCR和端粒重复序列扩增法（telomeric repeat amplification protocol, TRAP）检测干扰后细胞内hTERT表达变化及端粒酶表达变化，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果将目的序列成功连接到载体上，并经测序分析证实载体构建成功；成功包装成高滴度的慢病毒。逆转录PER和TRAP检测结果证实构建的hTERT-小片段干涉RNARNA （small interference RNA,siRNA）慢病毒表达载体可显著抑制hTERT基因的表达和端粒酶活性并导致细胞凋亡。结论成功构建了携带靶向hTERT基因的RNAi慢病毒载体。该载体能够有效抑制hTERT的表达和端粒酶活性并导致细胞凋亡，为以hTERT为靶点的胶质瘤基因治疗的后续研究奠定基础。
- 赵鹏傅震尤永平王存祖陈云祥陆小明鲁艾林刘宁
- 关键词：慢病毒人端粒酶逆转录酶基因RNA干涉
- 反义hTERT/PTEN联合基因治疗恶性胶质瘤的体内外研究被引量：8
- 2006年
- 目的探讨腺病毒介导的反义hTERT和野生型PTEN联合基因转染对恶性胶质瘤细胞生长的影响。方法用细菌内高效同源重组系统构建的含有hTERT反义序列及野生型PTEN的腺病毒在体内外单独或联合转染恶性胶质瘤细胞系U251,检测肿瘤细胞生长情况、端粒酶活性、蛋白表达、细胞周期变化等。结果在体外试验中单独或联合转染都能明显抑制肿瘤细胞的生长,以联合转染效果最明显,转染后第6天联合转染组的细胞生存率为37.6%,端粒酶活性水平和hTERT蛋白表达水平明显下降,分别为28·8TPG、0.2106,PTEN蛋白表达水平上升为0.9630;在体内试验中肿瘤生长也明显减慢。结论腺病毒介导的反义hTERT和野生型PTEN联合转染能明显抑制恶性胶质瘤细胞的生长。
- 尤永平傅震赵鹏王存祖刘宁鲁艾林
- 关键词：联合基因治疗恶性胶质瘤
- hTERT反义cDNA对人脑胶质瘤细胞的抑制作用被引量：2
- 2006年
- 目的探讨人端粒酶催化亚基(hTERT)反义cDNA(pAdeasy-hTERT)在体外对胶质瘤细胞生长的抑制作用。方法将腺病毒介导的pAdeasy-hTERT作用于人胶质瘤细胞系U251,用MTT法检测细胞存活率、端粒酶重复序列扩增法测定端粒酶活性、Westem杂交鉴定hTERT蛋白的表达、RT-PCR法检测hTERT cDNA水平、PCNA观察肿瘤细胞的凋亡情况以及用流式细胞仪对转染后肿瘤细胞的周期进行分析。结果pAdeasy-hTERT在体外明显抑制肿瘤细胞生长,降低端粒酶活性,抑制hTERT表达。结论pAdeasy-hTERT显著抑制人胶质瘤细胞生长,可成为恶性胶质瘤基因治疗的靶基因。
- 薛祥云刘宁尤永平
- 关键词：神经胶质瘤端粒酶基因治疗
