福建省自然科学基金(C0810017)
- 作品数：6 被引量：28H指数：4
- 相关作者：郑志竑林玲张明芳王春华张燕更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- notch1基因对人胶质瘤U251细胞增殖和周期的影响被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨notch1基因对人胶质瘤U251细胞增殖和周期的影响。方法:体外构建notch1-shR-NA和pNL-NICD/EGFP慢病毒表达载体,采用RT-PCR和Western blotting方法行notch1沉默和高表达notch1胞内段的效果检测,MTT法和PI单染流式细胞术分析notch1对细胞增殖和细胞周期的影响。结果:notch1-shRNA慢病毒表达载体能有效下调notch1表达,而pNL-NICD/EGFP慢病毒表达载体能有效增加NICD的表达。notch1基因表达下调的细胞其细胞增殖能力受到明显抑制(P<0.01),并引起细胞G1期阻滞(P<0.01),S期减少(P<0.01);在NICD表达增加的细胞其增殖能力明显增强(P<0.01),且引起细胞G1期减少(P<0.05),S期增加(P<0.01)。结论:notch1基因与人胶质瘤U251细胞的增殖能力和周期密切相关,有望成为治疗胶质瘤的靶点。
- 郭亚赵能江林玲张明芳郑志竑
- 关键词：神经胶质瘤RNA干扰细胞增殖细胞周期
- 下调Notch1信号抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y的增殖能力被引量：3
- 2013年
- 目的探讨Notch1基因与人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖能力的关系。方法应用-分泌酶抑制剂DAPT或表达Notch1-shRNA慢病毒载体阻断SH-SY5Y细胞Notch1信号的活化,RT-PCR和Western blot法行Notch1及Hes1表达水平的检测,MTT法和裸鼠体内种植检测瘤细胞体内外增殖能力的变化。结果 DAPT处理和表达Notch1-shR-NA慢病毒载体转染均能减少细胞内NICD和Hes1表达,其细胞体外增殖能力受到明显抑制(P<0.01),Notch1 RNAi细胞体内种植瘤重为0.20±0.13 g,明显轻于对照组的0.89±0.58 g(P<0.01)。结论 Notch1信号的活化与人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖能力密切相关,有望成为神经母细胞瘤基因治疗的潜在靶点。
- 郑志竑林玲张燕郑莺凤
- 关键词：神经母细胞瘤NOTCH1基因DAPT
- RNAi沉默Notch1基因对人胶质瘤U251细胞增殖能力的影响被引量：4
- 2010年
- 目的探讨沉默Notch1基因对人神经胶质瘤U251细胞增殖能力的影响。方法采用Notch1-shRNA慢病毒感染人胶质瘤U251细胞,筛选稳定低表达Notch1的细胞单克隆,Western blot法检测细胞Notch1蛋白的表达;CCK-8法测定细胞生长;平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验检测细胞的集落形成能力;裸鼠种植瘤模型观察Notch1沉默对种植瘤生长的影响。结果成功筛选得到Notch1稳定沉默的U251细胞单克隆,其Notch1蛋白下调(65.3±5.1)%。Notch1稳定沉默细胞的生长增殖能力明显受到抑制,生长曲线与对照组相比明显减慢;Notch1沉默组的平板克隆形成率为(18.6±2.5)%,低于对照组(37.0±3.3)%;Notch1沉默组软琼脂集落形成率(51±5)%,低于对照组(80±4)%;Notch1沉默组裸鼠腋下种植瘤生长速度减慢,30d后瘤重(0.31±0.09)g,明显低于对照组(2.35±0.71)g;统计学分析差异均有显著性。结论RNAi沉默Notch1基因可致人胶质瘤U251细胞的体外增殖和体内成瘤能力下降。
- 张明芳郭亚齐元麟郑志竑
- 关键词：NOTCH1细胞增殖种植瘤
- Notch1和Hes1、Hes5在星形细胞瘤中的表达及其相关性研究被引量：13
- 2009年
- 目的探讨Notch1受体和其下游信号分子Hes1、Hes5在人脑星形胶质细胞瘤中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学方法检测62例人脑星形细胞瘤和7例正常人脑组织中Notch1和Hes1、Hes5表达情况。结果星形细胞瘤组Notch1、Hes1和Hes5的表达均显著强于正常脑组织组(P<0.05)。在各级星形细胞瘤中,Notch1和Hes1的表达水平Ⅱ～Ⅲ级显著高于Ⅳ级(P<0.05),Hes5的表达在2组间差别无统计学意义(P>0.05)。在星形细胞瘤组中Notch1的表达与Hes1一致性较好(k=0.503),与Hes5的表达一致性差(k=0.216)。结论Notch1表达与星形细胞瘤的发生有关,与星形细胞瘤的病理分级无关。Notch1可能主要是通过下游分子Hes1而非Hes5发挥作用。
- 王春华郑志竑杨卫忠陈春美
- 关键词：蛋白质类信号传导星形细胞瘤脑肿瘤
- 人notch1-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定被引量：6
- 2009年
- 目的构建人notch1-shRNA慢病毒表达载体,为Notch信号通路的相关研究奠定基础。方法根据人notch1基因mRNA序列设计并合成两条互补的DNA单链寡核苷酸,将退火后形成的双链连接于pENTR/U6质粒,通过与pLenti6/BLOCK-iT-DEST载体的LR重组,构建notch1-shRNA慢病毒表达载体,经脂质体介导入293FT细胞,包装成慢病毒。用该慢病毒感染人神经母细胞瘤系SH-SY5Y细胞,RT-PCR和Westernblot法检测细胞notch1基因的表达。结果目的序列成功连接于载体并包装成较高滴度的慢病毒,细胞mRNA和蛋白质的检测均表明构建的notch1-shRNA慢病毒表达载体LR-ND-A能显著抑制SH-SY5Y细胞notch1基因的表达。结论成功构建人notch1-shRNA慢病毒表达载体。
- 张燕张明芳林玲郑志竑
- 关键词：RNA慢病毒属信号传导
- Hes1和Hes5基因沉默对人胶质瘤细胞系U251增殖的影响被引量：3
- 2010年
- 目的研究Hes1、Hes5基因沉默对神经胶质瘤细胞U251增殖的影响。方法构建Hes1-shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体,分别干扰U251细胞Hes1、Hes5基因表达,用MTT、克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增殖及克隆形成能力。结果沉默Hes1或Hes5基因均能明显抑制U251细胞增殖及集落形成。结论Hes1、Hes5直接参与了U251细胞的增殖调控,可作为胶质瘤基因治疗的潜在作用靶点。二者对U251细胞增殖的影响无显著性差异。
- 王春华林玲郑志竑
- 关键词：HES1胶质瘤RNA干扰慢病毒
