广东省社会发展领域科技计划项目(2010-75)
- 作品数：8 被引量：25H指数：4
- 相关作者：王晓红李罡李叶扬孙敬恩梁振文更多>>
- 相关机构：广州市红十字会医院合肥市第一人民医院暨南大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：广东省社会发展领域科技计划项目广州市医药卫生科技项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人增生性瘢痕中整合素连接激酶表达及与血管生成的关系被引量：8
- 2011年
- 目的探讨不同生长期人类瘢痕巾整合素连接激酶（ILK）表达及与血管生成的关系，方法（1）将笔者单位2009年12月-2010年12月收治的15例烧伤瘢痕忠背按德痕生长时间分为：小于6个月组、6～12个月组、大于12个月组．每组5例。采集各组瘢痕绀织，用免疫组织化学法观察ILK的表达分布，实时荧光定量RT—PCR法检测ILK mRNA的表达水平。（2）取小于6个月组瘢痕组织，分离培养瘢痕微血管内皮细胞（MEC），免疫磁珠法纯化后用花青类荧光染料Cy3标记的凝血因子Ⅷ进行鉴定，以人皮肤Fb为对照。取对数牛长期MEC，按随机数字表法分为3组：对照组，仪用含微m管生长添加剂的M131培养液培养；空质粒组，用空载质粒转染；ILK甄补DNA转染组，用ILK互补DNA表达质粒转染。转染24h后，实时荧光定量RT—PCR法榆测各组细胞中ILK、激胁功能区受体（KDR）、fms样酪氨酸激酶1（Flt—1）的mRNA表达情况。对数据进行单闪索方差分析．结果（1）小于6个月组瘢痕组织表皮荩底细胞、MEC及Fh胞质中均有ILK阳性表达，6～12个月组搬痕组织巾仅表皮基底细胞可见ILK阳性表达，大于12个月组瘢痕组织中ILK阳性表达不明显、（2）小于6个月组瘢痕组织中ILKmRNA表达水平（0．34±0．16）明显高于6～12个月组（0．17±0．06）及大于12个月组（0．07±0．13），F=37．007，P=0．000。（3）纯化后MEC旱铺路行样密集生长，胞质中凝血因子Ⅷ呈阳性表达；人皮肤Fb中未见凝血因子Ⅷ表达。（4）ILK瓦补DNA转染纰瘢痕MEC中ILK、KDR及FIt—1的mRNA表达水平分别为57．807±5．556、0．836±0．014、0．162±0．005，均姓著高于对照组的0．018±0．003、0．028±0．020、0．023±0．004和夺质粒组的0.042±0．005、0．039±0．007、0．046±0．003（F值分别为87．110、11．241、18．199，P值均小于0．01）。结论ILK主要表达于小于6个月的早期瘢
- 李叶扬米兰李罡林伟华孙敬恩王仁坤梁振文
- 关键词：瘢痕新生血管化病理性整合素连接激酶微血管内皮细胞
- QLT0267抑制整合素连接激酶对人皮肤成纤维细胞生物学特征的影响被引量：4
- 2013年
- 目的观察不同浓度的QLT0267抑制整合素连接激酶(ILK)的活性对成纤维细胞(Fb)生物学特征的影响。方法收集整形手术后剩余的皮肤标本,采用机械法加酶消化法分离培养Fb,随机分为空白对照组、5 nM组、10 nM组、20 nM组、30 nM组、DMSO组,其中空白对照组常规培养不做任何处理,5 nM组、10 nM组、20 nM组、30 nM组按培养基中QLT0267浓度分别为5、10、20、30 nmol/L加入QLT0267溶液[二甲基亚酮(DMSO)为溶剂],DMSO组加入与30 nM组中QLT0267溶液同体积的DMSO,分组处理12、24、48、72 h后在倒置相差显微镜下观察细胞形态。CellTiter试剂盒检测分组处理24、48、72 h后各组Fb的增殖情况,并与空白对照组比较计算增殖抑制率;在48 h时间点,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况以及Western Blot法观察Fb表达磷酸化蛋白激酶B(pAKT)、总蛋白激酶B(tAKT)蛋白的变化。对数据进行LDS-t检验和重复测量设计方差分析检验。结果经浓度大于10 nmol/L的ILK特异性抑制剂作用下,Fb膨胀,细胞核固缩或破碎,并出现细胞凋亡,随QLT0267浓度的增高和刺激时间的延长,细胞形态的改变更加明显。CellTiter试剂盒检测结果显示10 nmol/L以上的QLT0267能明显抑制Fb的增殖,且随着QLT0267浓度的增高和刺激时间的延长,增殖抑制率也升高(F处理组=94.242,P<0.05;F时间=240.490,P<0.05;F处理与时间=11.551,P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示与对照组比较,10 nmol/L以上的ILK特异性抑制剂能诱导Fb凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。Western Blot结果显示在各组tAKT的表达组间差异无统计学意义(P>0.05)的前提下,不同浓度QLT0267组pAKT的表达比空白对照组低,并随着QLT0267浓度的上升而pAKT蛋白生成下降(P<0.05)。结论 10 nmol/L浓度以上ILK特异性抑制剂QLT0267能刺激Fb发生形态改变,抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。推测ILK可能通过影响Fb中pAKT的生成参与创面愈合过程的调控。
- 梁振文李叶扬林伟华李罡孙敬恩王仁坤王晓红
- 关键词：伤口愈合成纤维细胞整合素连接激酶
- 整合素连接激酶对瘢痕成纤维细胞增殖和分化的影响被引量：5
- 2014年
- 【摘要】目的观察整合素连接激酶（integrin—linkedkinase，ILK）对人瘢痕成纤维细胞增殖和分化的影响，以探讨其在瘢痕形成中的作用。方法体外分离培养瘢痕成纤维细胞，并按下述方法处理并分组：①空白对照组，仅含有常规高糖DMEM培养液；②转染试剂jetPRIME。TM对照组（jetPRIME。TM对照组），常规高糖DMEM培养液与200μljetPRIME。TMbuffer及4txljetPRIME。TM反应试剂；③ILK小分子干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）组（ILKsiRNA组），常规高糖DMEM培养液与siRNA转染复合物；④ILK互补DNA（complementaryDNA，cDNA）组（ILKcDNA组），常规高糖DMEM培养液与cDNA转染复合物。分别检测细胞增殖、ILK信使RNA（messengerRNA，mRNA）、仅．平滑肌肌动蛋白（0I—smoothmuscleaetin，d—SMA）mRNA表达及其蛋白表达水平。结果①四唑翁盐（XTT）检测结果表明，转染后48h，各组成纤维细胞增殖水平，空白对照组为0．820±0．065，jetPRIMETM对照组为0．873±0．041，ILKsiRNA组为0．554±0．013，ILKcDNA组为1．296±0．094。各组48h内的细胞增殖曲线见，ILKsiRNA组的细胞增殖极为平缓，而ILKcDNA组的细胞增殖水平从12h开始逐渐升高。转染后48h，ILKsiRNA组细胞增殖水平明显低于其他3组（P值分别为0．021、0．034、0），ILKcDNA组细胞增殖水平明显高于其他3组（P值分别为0．017、0．009、0）。②实时荧光定量聚合酶链式反应（Real—timeqPCR）技术检测结果显示，ILKmRNA和OL．SMAmRNA的表达水平，空白对照组为0．6934-0．412和0．4224-0．037，jetPRIME“对照组为0．621±0．183和0．3884-0．005，ILKsiRNA组为0．0524-0．019和0．0734-0．023，ILKcDNA组为240．1934-35．170和138．056±24．060。ILKsiRNA组ILKmRNA和OL—SMAmRNA表达水平均显著低于其他组，差异有统计学意义（P〈0．05）；而ILKcDNA组ILKmRNA和d—SMAmRNA表达水平均显著高于其他3组，差异有统计学意义�
- 林伟华李叶扬米兰李罡孙敬恩王仁坤梁振文
- 关键词：瘢痕成纤维细胞
- 整合素连接激酶对含成纤维细胞胶原网格收缩的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨整合素连接激酶（ILK）对含成纤维细胞胶原网格（FPCL）收缩的影响和机制。方法（1）运用人皮肤成纤维细胞（Fb）构建FPCL，观察ILK-AKT信号通路特异性抑制剂LY294002对FPCL收缩的影响。（2）运用Westernblot印迹法检测ILK小干扰RNA（siRNA）转染和LY294002对Fb中ILK和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响。结果第24小时和第48小时LY294002组FPCL收缩率[（20．23±9．57）％、（22．47±10．93）％]明显低于对照组[（48．73±6．60）％、（54．33±12．88）％]（P〈0．05），第72、96和120小时FPCL收缩率为（25．58±7．40）％、（26．67±13．76）％、（28．82±3．48）％明显低于对照组（58．00±7．54）％、（59．67±11．29）％、（66．95±9．98）％和DMSO组（47．34±12．41）％、（52．26±10．90）％、（56．38±10．75）％（P〈0．05）。LY294002组和ILKsiRNA转染组α-SMA蛋白表达（0．992±0．255、1．225±0．323）与各对照组（2．009±0．820、2．190±0．577、1．758±0．732）比较均显著降低（P〈0．05）。结论阻断ILK信号通路可明显抑制Fb构建的FPCL收缩和F}）中α-SMA的表达。
- 李罡李叶扬戴丽冰米兰孙敬恩王仁坤
- 关键词：整合素连接激酶创面Α-平滑肌肌动蛋白
- 整合素连接激酶对增生期瘢痕血管生成的调控作用被引量：2
- 2013年
- 目的探讨整合素连接激酶（intergrin—linked kinase，ILK）对增生性瘢痕血管生成的影响及调控机制。方法收集6例增生期的瘢痕组织标本，体外分离培养瘢痕微血管内皮细胞（HSMECs），取2—4代生长状态良好的细胞，并分成4组：空白对照组，常规细胞培养；阴性对照组，只加入Lipo2000转染试剂；LY294002组，加入终浓度50nmol／L的LY294002；ILK siRNA组，加入终浓度为20nmol／L的ILK siRNA。转染48h后，采用RT—PCR法及Western Blot法检测ILK mRNA和蛋白表达的变化。利用Transwell法，收集转染后的4组HSMECs，用不含血清的DMEM重悬，种入上层小室，下层加完全培养基，10h后终止实验，计算各组细胞迁移数，观察不同处理因素对HSMECs迁移能力的影响。将冻融的ECMatrix基质胶在冰面上均匀的铺人预冷的48孔板中，37℃温箱孵育使其凝胶，然后取转染后的4组细胞种人胶面上，8h后终止实验，依据血管形成模式评分表随机选择8个视野进行评分，分析各组细胞的体外血管形成能力。结果①与空白对照组（ILK mRNA=0．829±0．109、ILK蛋白=1）相对比，ILK siRNA组HSMECs内ILK mRNA表达水平（ILK mRNA=0．002±0．000；t=13．151，P=0．006）及蛋白表达水平（ILK蛋白=0．096±0．049；t：36．656，P=0．000）均明显受到抑制，而LY294002组ILK的表达虽略有降低，但差异无统计学意义。②ILKsiRNA组与LY294002组在10h时的细胞迁移数分别为88．111±3．079、138．667±2．404，较空白对照组322．333±3．712显著降低（P〈0．05）。③在体外血管形成8h时，ILK siRNA组（2．625±0．125）和LY294002组（3．125±0．250）与空白对照组（4．333±0．191）相比，体外血管形成受到明显的抑制，无法形成完整的复杂网络结构（P〈0．05）。结论在ILK表达下调的情况下，HSMECs的迁移能力与体外血管形成能力均受到明显抑制，推论ILK可能参与对瘢痕血�
- 王仁坤李叶扬李罡林伟华孙敬恩梁振文王晓红
- 关键词：整合素连接激酶瘢痕内皮细胞细胞运动
- 整合素连接激酶在瘢痕转化生长因子-β1/Smad3信号通路中的作用被引量：2
- 2014年
- 目的 观察整合素连接激酶（ILK）在转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad3信号通路中的作用,探讨ILK对瘢痕成纤维细胞分化影响的作用机制.方法 体外分离培养瘢痕成纤维细胞后,实验分为4组：对照组、ILK小分子干扰RNA（siRNA）组、TGF-β1组、ILK siRNA＋TGF-β1组.采用荧光标记的免疫细胞化学法检测各组成纤维细胞中ILK的表达变化,应用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测各组成纤维细胞中ILK mRNA、Smad3 mRNA及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA） mRNA的表达.结果 免疫荧光图像显示,经siRNA沉默后,成纤维细胞的ILK表达水平下调;经TGF-β1（5μg/L）刺激后,ILK表达水平明显上调.FQ-PCR检测结果显示：经ILK siRNA转染后,成纤维细胞的ILK mRNA（0.522±0.113）、Smad3 mRNA （0.222±0.089）及α-SMA mRNA（0.118±0.080）表达水平同时下降;应用TGF-β1刺激后,成纤维细胞的ILK mRNA （2.233±0.511）、Smad3 mRNA（2.891±0.475）及α-SMA mRNA（2.581 ±0.826）表达水平重新上升,与对照组及ILK siRNA组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 在瘢痕成纤维细胞中,Smad3及α-SMA的mRNA水平可以被ILK上调,而TGF-β1又可以诱导ILK的表达,ILK可能参与Smad蛋白的调控,对TGF-β1/Smad3信号通路诱导的促成纤维细胞分化作用产生影响.
- 林伟华李叶扬米兰李罡孙敬恩王仁坤
- 关键词：整合素连接激酶增生性瘢痕成纤维细胞转化生长因子-Β1
- 整合素连接激酶对人瘢痕成纤维细胞中创面收缩相关因子mRNA表达的影响被引量：5
- 2012年
- 创面愈合后瘢痕形成及挛缩可致各种畸形，造成严重功能障碍。创面收缩主要缘于Fb与胶原以及ECM之间的相互作用，创面愈合后这种作用持续存在，导致瘢痕挛缩。
- 孙敬恩李叶扬米兰李罡王仁坤戴丽冰
- 关键词：创面收缩瘢痕成纤维细胞整合素连接激酶MRNA表达创面愈合后瘢痕挛缩
- 整合素连接激酶对瘢痕成纤维细胞VEGF的调控作用被引量：5
- 2011年
- 目的 探讨整合素连接激酶（intergrin-linked kinase,ILK）在人瘢痕成纤维细胞中的表达及对成纤维细胞VEGF的调控作用.方法 8例人增生性瘢痕标本采用组织块法分离培养瘢痕成纤维细胞,选取第5～6代细胞备用.实验分为3组①对照组：不做任何处理,只用含10%FCS的DMEM培养液同步培养;②空质粒组：用空质粒转染人瘢痕成纤维细胞;③ILK cDNA表达质粒转染组：用ILK cDNA表达质粒转染人瘢痕成纤维细胞.首先通过免疫细胞化学染色法检测ILKcDNA转染前后成纤维细胞ILK、VEGF的表达变化;应用实时荧光定量PCR（RT-PCR）及Western blot检测成纤维细胞ILK、VEGF的mRNA和蛋白水平变化;最后采用酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测3组成纤维细胞上清液中的VEGF蛋白含量.结果 免疫细胞化学染色结果显示瘢痕成纤维细胞胞浆中ILK表达阳性,VEGF表达不明显,经ILK cDNA转染细胞后ILK与VEGF表达均增强;RT-PCR显示ILK cDNA转染组VEGF mRNA表达（0.338±0.060）均高于对照组（0.022±0.001）和空质粒组（0.028±0.005,P＜0.05）;Western blot结果显示ILK cDNA转染组VEGF蛋白表达（0.819±0.019）显著高于对照组（0.607±0.033）和空质粒组（0.591±0.024,P＜0.05）;ELISA法检测ILK cDNA转染组的VEGF蛋白含量高于其他两组（P＜0.05）.结论 ILK可以上调VEGF mRNA及蛋白水平,并且促进成纤维细胞分泌VEGF,ILK可能通过提高瘢痕成纤维细胞合成分泌VEGF而促进增生性瘢痕血管生成.
- 米兰李叶扬林伟华李罡孙敬恩戴丽冰王仁坤
- 关键词：整合素连接激酶成纤维细胞血管内皮细胞生长因子血管生成
