广东省粤港关键领域重点突破项目(20054982210)
- 作品数：10 被引量：33H指数：4
- 相关作者：姚志彬汪华侨徐杰李国营胡金家更多>>
- 相关机构：中山大学上海交通大学广东药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省粤港关键领域重点突破项目广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 阿尔茨海默病的免疫治疗被引量：1
- 2006年
- 阿尔茨海默病(AlzheimerIsdisease,AD)是一种中枢神经系统退行性疾病,不仅导致患者的认知、行为、生活能力的全面障碍,严重影响生活质量,也为家庭和社会带来沉重的负担。迄今为止,AD一直缺乏有效的治疗方法。1999年出现的免疫治疗为AD病人带来了希望,本文综述了AD免疫治疗的方法,机制和不同阶段的认识,展望了免疫治疗的进一步发展。
- 吕晓汪华侨姚志彬
- 关键词：阿尔茨海默病Β淀粉样蛋白疫苗免疫治疗
- Aβ_(1-15)肽疫苗接种改善AD转基因模型Tg2576鼠的学习记忆能力被引量：3
- 2006年
- 目的探讨Aβ1-15亚单位疫苗接种对AD转基因模型鼠学习记忆能力的影响。方法将24只AD转基因模型鼠(Tg2576鼠)随机分为Aβ1-15组、Aβ42组和对照组,每组8只。9月龄开始分别皮下接种相应的疫苗,每只鼠共6次(抗原量0.1mg/次),接种时程6个月;对照组皮下注射等量PBS加佐剂。疫苗接种前用Y-迷宫作行为学测试,接种后用Morris水迷宫测作行为学测试。结果疫苗接种前,各组Tg2576鼠的空间学习记忆能力无显著性差异(P>0.05);疫苗接种6个月后,Aβ1-15组,Aβ42组鼠的空间学习记忆能力明显高于对照组鼠(P<0.01);Aβ1-15组鼠与Aβ42组鼠相比差异无显著性(P>0.05)。结论Aβ1-15亚单位疫苗接种和其全肽疫苗一样可以改善Tg2576鼠的学习记忆能力,因而可以替代其全肽疫苗用于AD免疫治疗的进一步研究。
- 李国营汪华侨胡金家徐杰姚志彬
- 关键词：老年性痴呆Β-淀粉样蛋白行为学测试
- 不同表位Aβ亚单位疫苗引起免疫反应类型及疫苗安全性评价被引量：2
- 2007年
- 为了研究不同表位Aβ亚单位疫苗接种Tg2576鼠引起的免疫反应类型和疫苗的安全性,本研究选用32只5月龄Tg2576小鼠,并随机分成对照组、Aβ42组、Aβ1-15组和Aβ36-42组,5月龄时开始分别接种相应疫苗,接种7个月,间接ELISA法测定血液及脑匀浆上清液中抗Aβ42的抗体滴度。分别取4组小鼠的脾细胞进行培养,用刀豆蛋白(ConA)和各自抗原刺激,ELISA法检测培养液中IFN-γ,IL-2,IL-4和IL-10的含量,免疫组化法检测脑内小胶质细胞的增生情况,组织化学法检测脑、肝、脾、肺、肾组织有无病理性改变。结果显示:(1)与对照组相比,疫苗免疫组血清和脑组织匀浆上清液中抗Aβ42抗体的滴度明显有所增高(P<0.01);(2)脾细胞培养,经ConA或各自抗原刺激后,3组疫苗免疫组细胞增殖显著高于对照组(P<0.01)。培养液中免疫因子检测显示Aβ42组IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10均较高,Aβ1-15组中IL-4和IL-10较高,Aβ36-42组IFN-γ和IL-2较高。免疫组织化学法显示4组小鼠大脑皮质与海马部位均有大量OX-42阳性小胶质细胞,疫苗免疫组OX-42细胞数量更多,但4组之间无显著性差异(P>0.05);(3)HE及组织特异性染色显示在疫苗接种组鼠的重要器官未见病理性改变。上述结果表明,Aβ42疫苗可引起Th2和Th1免疫反应,Aβ1-15亚单位主要引起Th2免疫反应,Aβ36-42疫苗主要引起Th1免疫反应。3种疫苗均可进一步激活脑内小胶质细胞,增强其Aβ清除能力,未发现疫苗接种引起的毒副作用。因此,本实验结果提示Aβ1-15亚单位疫苗更符合AD免疫治疗的要求。
- 李国营胡金家汪华侨徐杰姚志彬
- 关键词：阿尔茨海默病疫苗安全性
- 重组四价Aβ_(1-15)蛋白的表达及免疫原性鉴定被引量：5
- 2009年
- 目的:制备重组人四价串联Aβ1-15老年性痴呆二代蛋白疫苗,探讨其免疫原性。方法:以本室前期制备的含四价Aβ1-15基因(4×Aβ15)的重组质粒pcDNA-4×Aβ15为模板,PCR扩增4×Aβ15基因并克隆至pGEX-4T-2质粒中,转化大肠杆菌,诱导表达GST-4×Aβ15。经thrombin酶切去除GST后得到纯化的4×Aβ15蛋白。将4×Aβ15免疫BALB/c小鼠,观察其诱导体液免疫反应的能力。结果:经鉴定、测序,获取重组质粒pGEX-4×Aβ15,诱导表达后Western blotting显示在相对分子质量约35×103处有GST-4×Aβ15表达带,thrombin酶切去除GST后得到相对分子质量约9×103的4×Aβ15蛋白。4×Aβ15蛋白免疫小鼠诱导出(964.6±401.3)mg/L抗Aβ抗体。结论:成功构建了pGEX-4×Aβ15原核表达质粒并表达人重组4×Aβ15蛋白,免疫动物证实该蛋白疫苗有较强的免疫原性。
- 邹俊涛姚志彬张革汪华侨徐杰谢瑶袁群芳
- 关键词：阿尔茨海默病原核表达免疫力
- AD转基因模型Tg2576鼠阳性子鼠的病理和认知行为变化被引量：8
- 2006年
- 为探讨老年性痴呆(AD)转基因模型Tg2576(hAPPSWE)鼠阳性子一代鼠的病理和行为学变化,确定其是否具有亲代的性状,为AD研究提供理想的动物模型。本研究随机选取我室繁育并鉴定的子一代hAPPSWE基因阳性鼠(hAPPSWE+)和hAPPSWE基因阴性鼠(hAPPSWE-),分别在4、7、9月龄时经Y迷宫及15月龄时经水迷宫检测其行为学变化和脑内病理变化,并对皮质和海马的淀粉样斑块进行定量研究。结果显示:(1)4月龄和7月龄的子一代hAPPSWE+鼠的空间辨别学习记忆能力与hAPPSWE-鼠相比,差异无显著性(P>0.05),但9月龄时两者之间的差异有高度显著性(P<0.01);(2)在4月龄和7月龄的子一代hAPPSWE+鼠的脑组织切片上免疫组化染色未观察到淀粉样斑块,9月龄时均观察到明显的淀粉样斑块沉积,但hAP-PSWE-鼠无论在任何1个月龄均未观察到淀粉样斑块沉积;(3)定量结果显示9月龄的子一代hAPPSWE+鼠的皮层淀粉样斑块占整个皮层面积的0.21%,海马的淀粉样斑块占海马面积的0.14%,而15月龄时其淀粉样斑块的数量和面积增加明显,占整个皮层面积的4.26%,海马的淀粉样斑块占海马面积的2.51%。上述结果表明子一代hAPPSWE+鼠的行为学变化及脑内淀粉样斑块出现的时间、部位、类型与亲代一致。因此,子一代hAPPSWE+鼠和其亲代一样可用于AD研究,本实验的定量结果也为评价AD的干预治疗效果提供了参考数据。
- 李国营汪华侨胡金家徐杰姚志彬
- 关键词：ALZHEIMER病动物模型病理
- 以β-淀粉样蛋白为靶的单价及二价真核表达载体的构建和表达被引量：2
- 2006年
- 目的构建以β-淀粉样蛋白为靶单价及二价真核表达载体pcDNA3.1-Aβ1-42、pcDNA3.1-Aβ42×2,并在真核细胞中表达目的蛋白。方法PCR法扩增编码β-淀粉样蛋白的目的基因,利用基因克隆技术构建单价及二价真核表达载体;应用酶切及测序鉴定真核表达载体构建成功后,用Westernblot和细胞免疫组化染色检测其在真核细胞中的表达。结果相应的双酶酶切能够获得插入的目的基因片段(分别为137bp和269bp),测序未发现突变;Westernblot结果可见两条约为4ku和8ku的条带,细胞免疫组化染色可见阳性细胞。结论单价及二价真核表达载体构建成功;真核表达载体能在真核细胞中表达出目的蛋白。
- 王烈峰汪华侨张革邹俊涛谢瑶袁群芳姚志彬
- 关键词：老年性痴呆Β-淀粉样蛋白重组质粒真核表达载体
- Aβ亚单位疫苗接种Tg2576鼠对脑内淀粉样斑块沉积和行为学的影响被引量：7
- 2006年
- 目的探讨Aβ亚单位疫苗接种对Tg2576鼠淀粉样斑块沉积和行为学损害的影响。方法24只Tg2576鼠随机分为Aβ1-15组、Aβ36-42组、Aβ42组和对照组，9月龄时开始分别接种相应的疫苗，间接ELISA法检测血清和脑匀浆上清液特异性抗体的滴度；免疫组织化学染色观察脑内淀粉样斑块沉积；Morris水迷宫测试行为学变化；组织染色观察脑、肝、脾、肺和肾的组织学变化。结果第2次接种后各实验组即明显有抗Aβ42抗体产生，抗体滴度随接种次数的增加而增加。停止接种，抗体滴度下降。脑匀浆上清液中也检测出低滴度的抗Aβ42抗体；疫苗接种6个月后，Aβ42、Aβ1-15和Aβ36-42组鼠皮层和海马淀粉样斑块沉积量与对照组相比均明显减少（P〈0．01），其认知能力显著高于对照组（P〈0．01）。Aβ1-15组和Aβ42组相比差异无显著性（P〉0．05），但优于Aβ36-42组（P〈0．01）；各组鼠的脑、肝、脾、肺和肾均未发现病理变化。结论邯亚单位疫苗接种能有效阻抑Tg2576鼠淀粉样斑块形成和认知功能退化，未发现不良反应。提示用Aβ1-15疫苗替代其全肽疫苗而用于AD免疫治疗，值得进一步研究。
- 李国营汪华侨胡金家林贤徐杰姚志彬
- 关键词：Β-淀粉样蛋白淀粉样斑块
- Fmoc固相直接法合成Aβ_(1-15)肽疫苗及其免疫活性被引量：5
- 2006年
- 【目的】探讨实验室合成Aβ1-15肽疫苗的方法,并对其进行鉴定。【方法】选取Aβ42主要包含B细胞抗原决定簇的片段Aβ1-15,采用8分支多重抗原肽系统,以Fmoc固相直接法合成MAPAβ1-15;用MAPAβ1-15疫苗免疫接种C57BL/6小鼠,ELISA检测血清特异性抗Aβ抗体。【结果】用Fmoc法直接合成方法成功制备MAPAβ1-15疫苗,质谱检测其主要离子峰的相对分子质量为15458,与理论相对分子质量15451十分接近,但还有其它不同分子质量的离子峰存在。以合成的MAPAβ1-15免疫C57BL/6小鼠后,可产生高滴度的特异性抗Aβ42抗体,第3次接种后抗体平均滴度为1:467±196,第5次免疫接种后,平均滴度为1∶4367±1120。对照组的血清抗体检测基本无明显变化。【结论】Fmoc固相直接法可成功合成出MAPAβ1-15,合成出的MAPAβ1-15具有很好免疫活性。
- 杨学森汪华侨袁群芳谢瑶姚志彬叶小舟吴继明邹爱国
- 关键词：阿尔茨海默病
- 间接偶联法合成Aβ_(1-15)多重抗原肽疫苗及其免疫学活性被引量：1
- 2007年
- 目的探索合成Aβ1-15重抗原肽疫苗的方法,并对其免疫学活性进行鉴定。方法采用间接偶联法合成8分支Aβ1-15重抗原肽（MAP）,通过高效反相液相色谱（RP-HPLC）、SDS-PAGE以及氨基酸成分分析对其进行初步鉴定。以合成的MAP Aβ1-15C57BL/6小鼠,用ELESA法检测血清特异性抗Aβ抗体。结果间接偶联法合成的MAP Aβ1-15RP-HPLC层析后,呈现为一宽大主峰。SDS-PAGE检测显示,共有8条蛋白带,条带梯度比较均匀,分别为1～8分支的MAP Aβ1-15基酸组份及含量基本与Aβ1-15肽的序列一致。以合成的MAP Aβ1-15免疫C57BL/6小鼠后,可产生高滴度的特异性抗Aβ抗体。结论间接偶联法可成功地合成MAP Aβ1-15,且具有很好的免疫学活性,但合成的MAP产物难以纯化。
- 杨学森汪华侨姚志彬叶小舟吴继明邹爱国
- 关键词：多肽合成免疫学活性
- β-淀粉样蛋白真核表达质粒的构建及鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的构建β-淀粉样蛋白真核表达质粒,为进一步开展老年性痴呆DNA疫苗的保护性研究打下基础。方法提取Tg2576转基因鼠基因组DNA,PCR扩增β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)基因,用限制性内切酶KpnⅠ/XhoⅠ分别对扩增产物和真核表达质粒pcDNA3.1酶切,将目的基因定向克隆到pcDNA3.1载体上;对重组质粒进行双酶切初步鉴定后进行序列测定。结果特异扩增出Aβ1-42片段,大小为126bp,片段成功插入pcDNA3.1载体中。经双酶切及序列测定结果表明Aβ1-42目的基因正确重组入pcDNA3.1载体中。结论成功构建Aβ1-42真核表达质粒。
- 王烈峰汪华侨张革邹俊涛徐杰姚志彬
- 关键词：Β-淀粉样蛋白DNA重组
