国家自然科学基金(31100964)
- 作品数：8 被引量：21H指数：3
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- 相关机构：江苏大学上海市肿瘤研究所常州市第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA影响U251细胞中p21稳定性的机制
- 2013年
- 目前已开发的组蛋白去乙酰化酶抑制剂如SAHA表现出了广泛的临床应用前景。然而,其作用机制有待进一步阐明。该研究旨在探明SAHA对p21蛋白稳定性的影响。运用Real-time PCR、免疫共沉淀、泛素化降解实验、免疫印迹和流式细胞技术分析了SAHA对p21 mRNA和蛋白水平、稳定性和泛素化水平的影响;并分析了SAHA通过调节GSK-3β的活性影响p21蛋白稳定性及细胞周期的进程。结果发现,SAHA不但可以上调p21 mRNA水平,还可以稳定其蛋白水平;而且SAHA通过影响GSK-3β的活性降低p21蛋白泛素化水平,从而抑制其降解,并因此改变细胞周期进程,这表明SAHA可以通过抑制GSK-3β的活性增加p21蛋白的稳定性,维持其蛋白水平从而发挥SAHA的生物学效应。该研究结果将为脑胶质瘤的临床研究提供实验依据。
- 龚爱华熊二梦张严杜凤移彭琬昕邵根宝金洁程建军
- 关键词：SAHA胶质瘤细胞P21GSK-3Β
- 全反式维甲酸协同DAPT抑制胶质瘤干细胞的自我更新被引量：1
- 2013年
- 前期研究脑表明,脑胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)是胶质瘤发生和发展的重要因素,探索靶向干预GSCs生长有可能成为脑胶质瘤治疗的有效途径之一。该研究旨在阐明两种药物ATRA和γ-分泌酶抑制剂DAPT协同抑制GSCs自我更新的生物学效应。通过用台盼蓝排染法、克隆球形成试验和免疫印迹分析了两种药物的单独使用或联用对GSC样细胞PGC1和PGC2生长、成球能力和自我更新以及干细胞标志物表达的影响。结果发现,单独使用ATRA对PGC1生长有一定的抑制作用,而对PGC2生长几乎没有影响;DAPT对PGCs的生长抑制作用明显强于ATRA。高浓度ATRA(80μmol/L)能诱导PGCs的分化,降低PGCs成球大小,且成球效率降至5%～8%,而正常对照组为32%～35%;同样,DAPT(40μmol/L)也能降低PGCs成球大小,且成球效率降至2%～3%;低浓度ATRA(20μmol/L)和DAPT(5μmol/L)对PGCs自我更新能力和干性没有明显影响,而联合使用后其明显降低PGCs的成球大小,且成球效率降至3%～5%,促进细胞凋亡,并且明显抑制了干细胞标志物Nestin、CD133、Sox2、Oct4的表达,提高了分化标志物GFAP的表达。该研究证明了低浓度的ATRA和DAPT能协同抑制脑胶质瘤干细胞PGCs的自我更新。研究结果将为脑胶质瘤的临床研究提供实验依据。
- 龚爱华熊二梦张严杜凤移彭琬昕邵根宝金洁程建军
- 关键词：DAPT脑胶质瘤干细胞自我更新
- 去铁胺在甲基汞诱导细胞铁死亡中的作用及其机制被引量：3
- 2020年
- 目的:探讨去铁胺预处理对甲基汞毒性作用的影响及其潜在的机制。方法:选用大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞与大鼠肝BRL细胞,对照组用含10%胎牛血清的高糖培养基培养0.5 h,甲基汞组用不同浓度甲基汞(1.0、2.5、5.0、10.0μmol/L)处理0.5 h,MTT法检测细胞活力,免疫印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPx4)蛋白表达,筛选最适浓度甲基汞。另取PC12细胞与BRL细胞,对照组用含10%胎牛血清的高糖培养基培养6.5 h,去铁胺+甲基汞组分别用0、50、100、200、400μmol/L去铁胺预处理6 h,再用10.0μmol/L甲基汞处理0.5 h,免疫印迹法检测GPx4及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白表达,MTT法检测细胞活力。结果:与对照组相比,10.0μmol/L甲基汞组两种细胞活力降低最显著,以此浓度进行后续实验;随着甲基汞浓度逐渐增加,两种细胞中GPx4表达逐渐降低。与0μmol/L去铁胺+甲基汞组比较,随着去铁胺浓度增加,两种细胞中GPx4和HIF-1α蛋白表达逐渐增加;400μmol/L去铁胺+甲基汞组PC12细胞活力明显增加,200μmol/L去铁胺+甲基汞组BRL细胞活力明显增加。结论:去铁胺可拮抗甲基汞致细胞的铁死亡,可能与上调HIF-1α及铁死亡关键调控因子GPx4表达相关。
- 刘婷婷董丽华张宇徐伟朱海涛李芳王苏华邢光伟陆荣柱
- 关键词：甲基汞去铁胺缺氧诱导因子-1Α
- Tet-off诱导表达Egr-1HEK293稳定细胞株的建立和鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的:利用大肠埃希菌Tet-off诱导表达调控系统构建多西环素调控的稳定细胞株。方法:以pEGFPEgr-1质粒为模板,扩增含早期生长反应蛋白(early growth response-1,Egr-1)完整开放阅读框的DNA序列,经酶切后插入含四环素反应元件(tetracycline responsive element,TRE)序列的表达载体pTRE2hyg,获得重组质粒pTRE2hyg-Egr-1,将其转染293Tet-off细胞株,并用G418和多西环素筛选稳定表达Egr-1的细胞株。蛋白质印迹法检测多西环素诱导表达Egr-1情况;流式细胞术检测细胞增殖能力。结果:蛋白质印迹结果显示,外源性Egr-1蛋白表达受细胞培养液中多西环素调控,当从细胞培养液中去除多西环素后,Egr-1表达量明显升高。流式细胞检测结果显示Egr-1高表达细胞的增殖能力明显高于Egr-1低表达细胞。结论:利用Tet-off体系成功构建Egr-1诱导表达的细胞株,细胞的增殖能力受Egr-1表达水平的影响。
- 彭琬昕孟凡力金洁龚爱华
- 关键词：多西环素
- pDsRED-LC3真核表达载体的构建及其在肝癌细胞系HepG2中的表达和定位
- 2012年
- 本实验根据已知的人MAP-LC3序列,以人脑胶质瘤U251细胞cDNA为模板扩增出去除终止密码子的MAP-LC3片段,定向克隆至红色荧光融合蛋白载体pDsRed-N1质粒中,构建了重组质粒pDsRed-LC3.将pDsRed-LC3转染HepG2细胞,48 h后用Western Blot、激光共聚焦显微镜检测融合蛋白在细胞内的表达和分布情况,并观察血清饥饿时细胞发生自噬的情况.结果表明:(1)成功构建pDsRFP-LC3真核表达载体,该载体能在人肝癌细胞中表达;(2)血清饥饿应激实验证明,该载体可以良好地指示自噬泡的形成过程,为研究肿瘤细胞的自噬发生情况提供了一个重要而方便的工具.
- 彭琬昕孙瑶湘陈琛金洁邵根宝王嫘
- 关键词：红色荧光蛋白自噬肝癌
- SAHA诱导的p21表达致U251MG细胞抗凋亡效应被引量：4
- 2013年
- 目的探讨SAHA诱导的p21在脑胶质瘤细胞U251MG中的生物学作用。方法采用免疫印迹技术、RAN干扰技术和流式细胞技术分析了p21的表达水平与SAHA引起的U251MG细胞周期阻滞和细胞死亡的相关性。结果与对照组相比较,p21-ShRNA组明显提高了U251MG细胞凋亡的比例,达到45%左右,活化的凋亡相关蛋白Caspase-3,-8,-9表达水平明显增加;p21-ShRNA组细胞周期调控蛋白cdc25c、cdc2的磷酸化水平和总蛋白质水平也明显上调,clycinB1和磷酸化的H3水平明显提高。结论在SAHA处理条件下,p21下调使U251MG细胞阻滞于细胞周期G2/M期,促进了细胞凋亡。
- 龚爱华熊二梦张严杜凤移彭琬昕邵根宝金洁程建军
- 关键词：SAHA胶质瘤细胞P21组蛋白去乙酰化酶
- siRNA干扰即刻早期基因Egr-1对汉防己甲素诱导的胰腺癌细胞自噬、凋亡的作用研究被引量：1
- 2015年
- 本实验将胰腺癌细胞Pa Tu8988分别转染无关干扰对照组(si RNA-Scramble)和干扰即刻早期基因Egr-1组(si RNA-Egr-1),再用不同浓度的汉防己甲素处理24 h后,CCK-8法检测不同浓度的汉防己甲素对细胞活力的影响;Western blot检测细胞自噬和凋亡相关蛋白表达水平的改变.结果表明:(1)低浓度的汉防己甲素能显著激活Pa Tu8988细胞自噬,但对增殖和凋亡无明显影响;(2)与对照组相比,转染了si RNA-Egr-1组自噬相关蛋白Be-clin-1表达量显著下降,LC3II/LC3I比值下调;凋亡相关蛋白Bcl2/Bax的比值降低.上述结果表明,干扰即刻早期基因Egr-1的表达可以有效抑制低浓度汉防己甲素引起的胰腺癌细胞Pa Tu8988自噬,促进细胞凋亡.
- 彭琬昕万燕雅葛璐金洁龚爱华吴朝阳
- 关键词：胰腺癌汉防己甲素EGR-1细胞自噬
- 姜黄素联合顺铂对人肝癌细胞HepG2增殖、自噬和凋亡的影响被引量：11
- 2014年
- 目的探讨姜黄素联合顺铂对人肝癌细胞HepG2增殖、自噬和凋亡的影响。方法将不同浓度的姜黄素、顺铂单独或联合处理体外培养的人肝癌细胞HepG2。24h后,MTT法检测细胞活性,免疫荧光观察细胞内自噬泡形成情况,Western blot检测自噬、凋亡相关蛋白表达。结果与姜黄素或顺铂单药给药组相比,姜黄素联合顺铂更能明显抑制HepG2细胞的增殖(P<0.05),促进微管相关蛋白LC3的点状分布,提高自噬相关蛋白Beclin1的表达和LC3Ⅱ/Ⅰ的比值(P<0.05),降低凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的比值(P<0.05),并激活半胱天冬氨酸蛋白酶3(P<0.05)。结论姜黄素联合顺铂可诱导HepG2细胞的自噬和凋亡,显著提高HepG2细胞对顺铂的敏感性。
- 熊二梦龚爱华金洁邵根宝彭琬昕
- 关键词：姜黄素顺铂肝细胞肝癌细胞自噬
