国家自然科学基金(39570666)
- 作品数：7 被引量：15H指数：3
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- 定点突变对BPI_(23)-Fcγ1重组抗菌蛋白表达和复性率的影响被引量：6
- 2002年
- 为提高BPI2 3 Fcγ1重组抗菌蛋白在原核表达系统中的表达和复性率 ,采用定点突变法改造 pBV BPI60 0 Fcγ1 70 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α后 ,通过温控诱导表达。结果表明 :①突变后BPI2 3 Fcγ1重组抗菌蛋白表达量比突变前提高约 1 0 % ;②表达时间提前约 1h ;③抗菌活性未受影响 ;
- 安云庆柯岩靖学芳杨贵贞
- 关键词：定点突变
- BPI_(23)-Fcγ1重组融合蛋白在E.coli中的表达被引量：4
- 2000年
- 目的 构建pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α诱导表达BPI2 3 Fcγ1抗菌重组蛋白。方法 采用RT PCR技术 ,从HL 6 0细胞和正常人白细胞mRNA中扩增编码BPI2 3 和IgG1Fc(Fcγ1)的基因 ;通过连接反应构建重组克隆载体和重组表达载体 ;转化感受态E .coliDH5α细胞 ,通过温控诱导表达BPI2 3 Fcγ1重组蛋白。结果 (1)RT PCR获得预期的扩增产物BPI60 0bp和Fcγ170 0bp基因片段 ;(2 )成功构建pUC18 BPI180 、pUC18 BPI4 2 0 、pUC18 Fcγ170 0 重组克隆载体 ,DNA测序结果与文献报道一致 ;(3)成功构建pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体 ,酶切图谱分析与预期结果相符 ;(4 )转化感受态E .coliDH5α细胞 ,通过温控诱导表达BPI2 3 Fcγ1重组蛋白 ,表达量约占菌体蛋白总量的 2 0 %～ 30 % ;(5 )复性后重组蛋白具有抗菌活性和结合蛋白A的作用。结论 pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体构建成功 ;在E .coli中得到表达 ,获得具有抗菌活性的BPI2 3
- 柯岩安云庆杨贵贞
- 关键词：聚合酶链反应抗菌蛋白
- BPI_(m23)重组抗菌蛋白在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达被引量：4
- 2004年
- 目的 :采用巴斯德毕赤酵母表达系统表达分泌型功能性rBPIm2 3抗菌蛋白。方法 :利用构建的pUC1 8 synBPI4 1 4质粒和PBV2 2 0 BPIm4 2 0 质粒 ,按分子克隆方法构建pPICZα synBPIm6 0 0 重组表达载体 ;用线性化pPICZα synBPIm6 0 0 质粒电转化PichiapastorisGS1 1 5 ,筛选抗性转化子 ,进行PCR和Mut表型鉴定 ;用甲醇诱导目的蛋白rBPIm2 3的表达 ;用离子交换层析纯化rBPIm2 3,并进行SDS PAGE分析、Westernblot鉴定和用BCA法定量。结果 :①成功构建了pPICZα synBPIm6 0 0 重组表达载体 ;②获得稳定整合目的基因的GS1 1 5菌株 ;③表达产物相对分子量约为 2 3kD ,可与抗BPI抗体特异性结合 ;④培养上清液中目的蛋白表达量约为 2 9mg L。结论 :BPIm2 3重组抗菌蛋白在毕赤酵母GS1 1 5中得到分泌表达。
- 靖学芳安云庆杨贵贞
- 关键词：巴斯德毕赤酵母分泌表达
- rBPI_(23)基因克隆与鉴定
- 2000年
- 目的 :rBPI2 3基因 (BPI60 0bp)克隆与鉴定。方法 :采用RT PCR技术 ,从HL 6 0细胞mRNA中扩增编码BPIN端 199个氨基酸 (rBPI2 3)的基因片段 (BPI60 0bp) ,经酶切后通过连接反应构建重组克隆载体 ,测序鉴定。结果 :RT PCR获得预期的扩增产物—BPI60 0bp基因片段。成功构建PUC18 BPI180 、PUC18 BPI4 2 0 重组克隆载体 ,酶切、酶谱分析与预期结果相符。DNA测序结果与文献报道一致。结论 :PUC18 BPI180 、PUC18 BPI4 2 0 重组克隆载体构建成功 ;BPI60
- 柯岩安云庆杨贵贞
- 关键词：RT-PCR
- BPI_(23)-Fcγ1重组抗菌蛋白的研究
- 2003年
- 该重组抗菌蛋白是采用基因工程技术研制的一种由杀菌/渗透增强蛋白功能性N端片段(BPI23)与IgGlFc片段(Fcγ1)嵌合而成的抗感染生物制剂.目前该课题已取得关键性研究成果,即采用原核表达系统成功地获得了具备BPI和IgG双重功能的非糖基化抗菌蛋白.体外初步研究证实,该重组蛋白不仅具有杀伤G-菌及中和内毒素的作用,而且兼备激活补体和调理作用.
- 安云庆杨贵贞陈金栋柯岩刘振龙靖学芳
- 关键词：阳离子
- 人IgG1FccDNA的克隆与鉴定
- 2000年
- 根据编码人IgG1Fc(Fcγ1 )的基因序列 ,设计合成 1对与之相匹配的引物。采用RT PCR法 ,从正常人白细胞mRNA中扩增获得预期目的基因Fcγ1 70 0bp基因片段 ,成功构建PUC1 8 Fcγ1 70 0 重组克隆载体 ,酶切、酶谱分析与预期结果相符 ;DNA测序结果与GenBank报道一致。
- 安云庆柯岩陈金栋
- 关键词：RT-PCR克隆
- pBV-BPI600重组表达载体的构建及其在E.coli中的表达被引量：1
- 2001年
- ①采用RT PCR技术 ,以HL 60细胞mRNA为模板扩增获得编码BPI氨基端 1 93个氨基酸 (rBPI2 1)的基因片段 (BPI60 0 ) ;EcoRI/BamHI酶切扩增产物获得BPI 2 0 0bp和BPI 4 0 0bp 2个基因片段。②成功构建PUC1 8 BPI2 0 0和PUC1 8 BPI4 0 0重组克隆载体 ,DNA测序分析结果与文献报道一致。③成功构建pBV2 2 0 BPI60 0重组表达载体 ;转化E .coliDH5α感受态细胞 ,诱导目的重组蛋白表达 ;经SDS PAGE电泳和Western blot鉴定 ,证实表达的重组蛋白确为外源基因 (BPI 60 0bp)编码的产物BPI2 1重组蛋白。
- 安云庆刘箐柯岩沈海中
