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多重PCR诊断猪细小病毒、伪狂犬病毒和圆环病毒Ⅱ型方法的建立和应用被引量：2: 2010年; 根据GenBank中已发表的猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)等3种病毒基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PPV VP2、PRVgB、PCV2ORF1基因的保守区为各病毒的诊断靶序列。在建立各病毒单重PCR技术的基础上,优化多重PCR反应条件,建立了三种病毒的多重PCR技术。用78份临床病料对本研究多重PCR技术和单重PCR技术进行对比验证,结果显示,总符合率为97.4%以上。该方法特异性强、敏感性高,为PPV、PRV和PCV2临床诊断和流行病学调查等研究提供了新手段。; 刘洋李俊时建立孙文博徐绍建吴家强李坤于江王金宝周顺; 关键词：PPV PRV PCV2

猪圆环病毒2型感染性DNA的构建及体外拯救: 感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究首次应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将两个PCV2 SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建...; 李俊于周徐绍建程凯慧王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型感染性克隆; 文献传递

猪圆环病毒2型SD2分离株ORF3基因转录分析被引量：2: 2009年; 对PCV2 SD2株(DQ478947)进行了序列分析发现,其含有11个开放阅读框,与以往分离株开放阅读框有较大差异。根据GenBank发表的PCV2序列设计特异性引物,扩增ORF3基因,预计扩增片段大小为209 bp。分别在接毒后12、24、364、8 h,用Trizol法自病毒细胞裂解液提取总RNA,然后用DNase I处理,除去残留的病毒DNA,利用醋酸纤维素分离mR-NA,用上述引物进行RT-PCR扩增。在接毒24 h后扩增出的目的片段大小与预计扩增片段大小相符合,测序结果表明扩增片段与PCV2 SD2(DQ478947)ORF3基因序列相符。由此证实,PCV2山东分离株ORF3基因可在接毒24 h后于转录水平表达,为ORF3基因的深入研究打下了基础。; 丁鹏李俊于周程凯慧吴家强王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型 ORF3基因转录分析

含CpG基序系列猪圆环病毒核酸疫苗的构建被引量：4: 2008年; 人工合成了系列含有1～24个长度不等、序列不同的CpG-ODN基序,经MluⅠ单酶切、连接后插入到已构建好的真核表达载体pVAX1-ORF2的骨架结构中。酶切及测序结果证实,所构建的系列载体正确,表明已经成功构建了系列含有CpG-ODN的表达ORF2编码蛋白的重组质粒pVAX1-ORF2-CpG,为进一步优化和筛选最佳猪圆环病毒核酸疫苗奠定了基础。; 程凯慧李俊于周周顺王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型核酸疫苗

猪圆环病毒2型双拷贝感染性DNA的构建及体外拯救被引量：8: 2009年; 感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将2个PCV2SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外课题组成功构建含单个PCV2全基因组的pSK-PCV2和自身环化质粒ds-PCV2。将所得3种质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经10次连续传代后,间接免疫荧光试验检测显示三者均在细胞核中聚集大量的病毒抗原;经RT-PCR检测都有PCV2特异性基因转录;透射电镜下可观察到直径约为17～20nm的典型PCV2病毒粒子;经测序鉴定所拯救出的病毒与亲本病毒核苷酸同源性为100%。拯救出的PCV2与亲本病毒具有相同的病毒学及分子生物学特性。本研究应用PCR诱变技术成功构建PCV2双拷贝感染性克隆,并经体外拯救证实其具有感染性,为进行PCV2分子特性及致病机理研究打下了基础。; 李俊时建立于周徐绍建丁鹏程凯慧王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型感染性克隆

猪圆环病毒2型毒株的分离鉴定被引量：9: 2009年; 于周李俊程凯慧时建立吴家强温建新王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型多系统衰竭综合征猪皮炎肾病综合征毒株繁殖障碍 PMWS

猪圆环病毒2型全序列分析及感染性克隆的构建被引量：4: 2009年; 徐绍建李俊曹帅时建立周顺徐文张秀美王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型感染性克隆全序列分析断奶仔猪多系统衰竭综合征 PCV-2 传代细胞

PCV2ORF1、ORF2截短基因原核表达载体的构建及表达被引量：2: 2010年; 采用PCR方法,从PCV2双拷贝DNA感染性克隆中扩增出PCV2 ORF1和ORF2截短基因,与pQE30原核表达载体分别经KpnI和HandIII双酶切,连接,经鉴定后证明成功构建pQE30-ORF1、pQE30-ORF2原核表达载体,经IPTG诱导,SDS-PAGE和West-ern-blot检测到目的蛋白表达,为研究蛋白功能和单克隆抗体的研制打下了基础。; 时建立李俊丁鹏吴家强孙文博丛晓燕周顺; 关键词：PCV2 ORF2

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山东省自然科学基金(Y2006D23)