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人截短型凋亡诱导因子的表达对HeLa细胞的促凋亡作用被引量：5: 2003年; 目的:观察人截短型AIF基因的表达对HeLa细胞的促凋亡作用。方法:用RT-PCR法分段克隆全长人AIF基因。经改造截去其N-端线粒体定位信号及部分Spacer区域(1～120位氨基酸)的编码序列,从而获得人截短型AIF(AIF△1-120)基因。将其克隆入pIRES2-EGFP绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察、免疫组织化学检测、间接免疫荧光检测、电镜观察等方法,检测目的基因在转染细胞中的表达,以及对转染细胞的形态及生长状况的影响。结果:成功地构建了人截短型AIF(AIF△1-120)基因的真核表达载体。转染HeLa细胞后,可检测到人截短型AIF分子的表达。随着转染后时间的延长,可观察到表达人截短型AIF分子的HeLa细胞呈现典型的凋亡特征。结论:人截短型AIF基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡。; 于翠娟孟艳玲赵晶王智王成济杨安钢; 关键词：凋亡诱导因子 HELA细胞基因表达细胞凋亡

重组人凋亡诱导因子基因的构建、表达及其对HeLa细胞的促凋亡作用被引量：13: 2002年; 凋亡诱导因子 (apoptosis inducingfactor ,AIF)定位于细胞的线粒体膜间隙 .当凋亡信号刺激时 ,AIF分子从线粒体释放到胞浆 ,然后转位到细胞核内 ,引起染色体核周边凝集和DNA呈大片段断裂 (～ 5 0kb) .用RT PCR法分段克隆得到人全长AIF基因 ,经改造截去其N端线粒体定位信号编码序列 ,代之以不同长度的绿脓杆菌外毒素 (PE)转膜结构域序列 .把这些重组基因克隆入 pIRES2 EGFP真核表达载体 ,脂质体法转染HeLa细胞 ,通过荧光显微镜观察、共聚焦显微镜观察、电镜观察等方法检测了多种重组人AIF基因的表达及其对细胞生长的影响 .证明了重组人AIF基因的表达可引起HeLa细胞死亡。; 于翠娟孟艳玲桂俊豪赵晶金明王智王成济杨安钢; 关键词：HELA细胞促凋亡作用融合蛋白

活性型粒酶B基因的异位表达导致多核巨细胞产生: 2004年; 粒酶B (granzymeB ,GrB)是一种重要的丝氨酸蛋白酶参与细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)和自然杀伤细胞(NK)介导的细胞杀伤过程 .为研究粒酶B在肿瘤细胞中异位表达后能否诱导细胞死亡 ,将构建的活性型粒酶B(GrBa)基因及其酶活性中心突变型 (mGrBa)基因的真核表达载体 ,以脂质体法瞬时转染HeLa细胞 ,通过绿色荧光蛋白 (GFP)共表达、间接免疫荧光、细胞计数、MTT等方法 ,观察到GrBa蛋白的异位表达引起多核巨细胞形态异常 ,并且表达细胞的生长受到抑制 .Percoll分离多核巨细胞后 ,观察到其生长状态较差 ,是导致生长抑制的直接原因 .细胞骨架破坏和具有多极纺锤体的异常有丝分裂 ,推测是多核巨细胞不断产生的根源 .; 赵晶陈蕾许彦鸣张淼丽温伟红王成济杨安钢; 关键词：异位表达多核巨细胞

重构型人caspase-8基因的表达诱导HeLa细胞凋亡被引量：2: 2003年; 以两种大、小亚基基因次序颠倒的重构型人caspase 8基因的pIRES2 EGFP真核表达载体转染HeLa细胞 ,用间接免疫荧光染色、免疫细胞化学染色和电镜观察等方法 ,研究重构型人caspase 8基因在HeLa细胞中的表达及其促凋亡活性 .结果显示 ,两种重构型人caspase; 桂俊豪赵晶许彦鸣于翠娟贾林涛王成济杨安钢; 关键词：HELA细胞细胞凋亡

分泌性靶向促凋亡分子基因构建、表达及其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤作用: 2007年; 杨安钢贾林涛赵晶许彦鸣; 关键词：肿瘤细胞分泌性阳性基因构建杀伤作用靶向

人颗粒酶B融合蛋白基因的诱导表达导致HeLa细胞凋亡: 2004年; 目的　观察诱导表达的颗粒酶B融合蛋白对HeLa细胞形态和生长的作用。方法　用重组PCR法将活性型颗粒酶B基因序列的 5’端连接绿脓杆菌外毒素 (PE)的部分转位肽编码序列。所获融合蛋白基因克隆入pIND诱导表达载体后 ,与辅助质粒pVgRXR共转染HeLa细胞 ,经G4 18和zeocin筛选建系。间接免疫荧光检测蜕皮激素诱导后目的蛋白的表达 ,并通过电镜、TUNEL染色、细胞计数等方法观察细胞的形态和生长速度的变化。结果　建立了可诱导表达人颗粒酶B融合蛋白基因的HeLa细胞系。蜕皮激素诱导后检测到目的蛋白的表达 ,同时观察到细胞出现多核巨细胞的异常形态 ,细胞生长受到抑制。电镜和TUNEL分析表明 ,颗粒酶B融合蛋白基因的诱导表达使部分细胞呈现凋亡的典型特征。; 王智赵晶张莉温伟红王成济杨安钢; 关键词：颗粒酶B 融合蛋白 HELA细胞凋亡

重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用被引量：1: 2008年; 目的:构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv/tBid,并探讨其对骨肉瘤E10细胞的促调亡作用。方法:通过间接免疫荧光染色、流式细胞仪(FCM)检测E10细胞膜表面HER2的表达。将抗HER2单链抗体基因e23sFv与铜绿假单胞菌外毒素PE的转膜结构域基因(PEⅡ)和tBid基因连接,构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv/tBid,将其克隆入真核表达载体pCMV中构建重组pCMV-ScFv/tBid载体,转染骨肉瘤E10细胞。间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,Annexin V染色流式细胞术及TUNEL法检测E10细胞的凋亡情况。结果:流式细胞仪检测到E10细胞膜表面有HER2的表达。成功构建重组融合蛋白基因质粒pCMV-ScFv/tBid。重组质粒转染E10细胞后,间接免疫荧光双标记染色检测到E10细胞中tBid的过表达;细胞色素C在细胞质中出现;细胞出现明显的固缩、核浓缩等形态特征。Annexin V染色后流式细胞仪检测可见实验组细胞凋亡率较对照组明显升高(16.1% vs 4.5%);TUNEL染色显示,E10细胞出现典型的凋亡特征。结论:重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid可以在转染的骨肉瘤E10细胞中表达,并诱导骨肉瘤细胞发生凋亡。; 裘秀春单乐群纪振钢杨彤涛龙华许彦鸣周勇马保安杨安钢范清宇; 关键词：TBID 人表皮生长因子受体2 融合蛋白骨肉瘤细胞

用亲和层析法纯化人精浆蛋白: 2006年; 【目的】用亲和层析法从增生的前列腺组织中纯化人精浆蛋白(-γseminoprotein,-γsm)。【方法】采用超声波粉碎、NP-40提取与两种免疫亲和层析相结合[抗人精浆蛋白单抗(E4B7mAb)亲和层析和蛋白A亲和层析]的新提纯方案,获得了高纯度-γsm抗原。【结果】所纯化的-γsm蛋白经ELISA双抗夹心法和免疫印迹分析检测证明,用此法从增生的前列腺组织中分离到-γsm抗原,而且纯化的-γsm具有生物活性。【结论】这种方法的建立将为分离-γsm抗原提供一种有效途径,为抗精浆蛋白基因工程抗体的研究提供良好的抗原保证。; 孙脊峰杨洁郝晓柯金明赵晶王成济杨安钢; 关键词：纯化

具有自发活性的重组caspase-3对裸鼠SKBr-3肿瘤生长的抑制被引量：5: 2004年; 目的 :探讨具有自发活性的caspase 3分子对乳腺癌肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法 :重构型caspase 3转染SKBr 3细胞后 ,以观察细胞的形态、进行细胞计数和及流式细胞仪分析等方法 ,验证caspase 3大、小亚基顺序颠倒的重构型caspase 3分子的促凋亡活性。将重组真核表达载体 pcDNA3 revcas pase 3直接注射荷瘤裸鼠研究其对肿瘤生长的抑制作用 ,间接免疫荧光染色法检测肿瘤组织中重构型caspase 3基因表达情况 ,用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡。结果 :重构型cas pase 3基因转染后 ,可诱导SKBr 3细胞凋亡 ,将 pcDNA3 revcaspase 3重组质粒直接注射荷SKBr 3瘤裸小鼠后 ,肿瘤的生长明显受到抑制 ,免疫组化染色可检出重构型caspase 3蛋白的表达 ;TUNEL法检测证实肿瘤细胞发生凋亡。结论 :重构型caspase 3基因的体内表达可诱导SKBr; 鲍炜张立红贾林涛曲萍王成济杨安钢; 关键词：凋亡

免疫Caspase-6对HER2阳性肿瘤特异性杀伤的研究: caspase-6是天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶家族的成员,属于效应Caspase分子,是哺乳动物细胞凋亡中重要的执行分子之一。Caspase-6通常以无活性的酶原形式合成,只有当凋亡信号刺激时,上游分子被激活后,才经剪...; 许彦鸣王立锋贾林涛赵晶张立红王成济杨安钢; 关键词：逆转录病毒腺病毒; 文献传递

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