上海市卫生局科研基金(20124309)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：郑江花丁滔洪斌郭颖程增辉更多>>
- 相关机构：复旦大学附属公共卫生临床中心上海中医药大学附属普陀医院上海交通大学附属第六人民医院更多>>
- 发文基金：上海市卫生局科研基金上海市教育委员会创新基金上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用甲基化基因检测技术分析前列腺癌中HIC1的甲基化状态被引量：4
- 2016年
- 背景与目的:癌高甲基化基因1(hypermethylated in cancer 1,HIC1)因表观遗传甲基化修饰导致其在多种癌细胞和组织中表达沉默,可能与肿瘤的发生、发展有关。而这一现象在前列腺癌研究中的报道甚少。该研究采用甲基化基因检测技术对前列腺癌中HIC1启动子进行甲基化状态分析。方法:采用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)和亚硫酸盐测序PCR(bisulfate sequencing PCR,BSP)技术,对前列腺癌细胞PC3、C4-2B和正常前列腺上皮细胞Pr EC,以及前列腺癌组织标本和正常前列腺穿刺标本,进行HIC1启动子甲基化分析;并使用去DNA甲基化酶5-Aza-Cd R处理PC3、C4-2B和Pr EC,经反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)分析HIC1在基因水平和蛋白质水平上的变化。结果:MSP分析结果发现,在PC3、C4-2B和Pr EC中HIC1甲基化率分别为78.23%、72.15%和10.63%,差异有统计学意义(P<0.05)。对36例人前列腺癌实体瘤和36例人前列腺正常穿刺组织进行BSP测序,统计显示,甲基化率分别是80.30%和31.56%。5-Aza-Cd R处理后的PC3、C4-2B和Pr EC经RT-PCR和Western blot分析发现,与未处理对照相比,HIC1转录水平和蛋白水平表达均显著上调。结论:在前列腺癌中,抑癌基因HIC1启动子呈高度甲基化状态并出现表达沉默或下调,可作为前列腺癌的早期预测指标和潜在的治疗靶点。
- 单孟林丁滔郑江花程增辉郭颖夏前林
- 关键词：甲基化特异性PCR前列腺癌甲基化
- 膜联蛋白A2表达下调在前列腺癌侵袭转移中作用机制的研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨膜联蛋白（Annexin）A2表达下调在前列腺癌侵袭、转移中的作用机制。方法2010年1月至2012年6月我们采用蛋白质印迹法检测较高转移潜能的前列腺癌细胞C4．2B、较低转移潜能的前列腺癌细胞LNCaP和PC3中AnnexinA2表达水平。siRNA技术干扰前列腺癌PC3细胞中AnnexinA2表达后，噻唑盐（MTT）法检测细胞增殖情况，流式细胞技术检测细胞凋亡情况，蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9表达水平的变化，Transwell小室和划痕实验检测前列腺癌PC3细胞体外侵袭能力及迁移能力的变化。结果C4—2B细胞中AnnexinA2表达水平与内参比较的相对灰度值为0．22，明显低于LNCaP和PC3细胞的0．93和O．95，差异有统计学意义（P〈0．01）。将脂质体、AnnexinA2的siRNA干扰载体质粒和对照载体质粒分别转染到PC3细胞株，构建3个细胞株：PC3-Lip、PC3-ControlVector、PC3-ANXA2-siRNA。采用siRNA技术干扰AnnexinA2表达后，MTT法检测PC3-ANXA2-siRNA细胞生长速度快于PC3、PC3-Lip、PC3-ControlVector细胞，差异有统计学意义（P〈0．05）。流式细胞仪检测PC3-ANXA2-siRNA细胞的凋亡率为（6．2±2．6）％，与PC3的（2．3±1．9）％、PC3-Lip的（2．1±2．0）％、PC3-ControlVector的（2．0±1．8）％比较差异无统计学意义（P〉0．05）。蛋白质印迹法检测PC3-ANXA2-siRNA细胞的AnnexinA2表达水平明显降低，而MMP-2、MMP-9表达水平上调，Transwell小室和划痕实验发现PC3-ANXA2-siRNA细胞体外侵袭及迁移能力增加。结论下调AnnexinA2的表达能增加前列腺癌细胞的体外侵袭和转移能力，可能的作用机制是上调MMP．2和MMP-9的表达。
- 丁滔郑江花洪斌何春峰
- 关键词：前列腺癌膜联蛋白A2基质金属蛋白酶类
- 下调AnnexinA2的表达在促前列腺癌进展中的作用被引量：4
- 2014年
- 目的探讨AnnexinA2(ANXA2)的异常表达在前列腺癌(prostate cancer,PC)进展中的作用机制。方法采用免疫组织化学化检测ANXA2在85例PC标本中的表达水平,Western blot检测不同转移潜能的前列腺癌细胞LNCaP、C4-2B和PC-3、PC-3M中ANXA2的表达水平;siRNA技术干扰PC-3细胞中ANXA2表达后,MTT检测细胞增殖,Western blot检测MMP-2、MMP-9表达水平的改变,Transwell小室和划痕试验检测PC-3细胞体外侵袭能力及迁移能力的变化。结果 ANXA2阳性率在Gleason评分为5~6、7、8~10分中的阳性率分别是77.5%(31/40)、58.3%(21/36)、11.1%(1/9),三者之间表达差异有统计学意义(P<0.05),随着前列腺癌细胞转移潜能升高而ANXA2表达水平依次降低(P<0.01);siRNA技术干扰AnnexinA2表达后,PC-3-ANXA2-siRNA生长速度增加(P<0.05),Western blot检测到PC-3-ANXA2-siRNA细胞的ANXA2表达水平明显降低,而MMP-2、MMP-9表达水平上调,Transwell小室和划痕实验分别发现PC-3-ANXA2-siRNA细胞体外侵袭及迁移能力增加。结论下调AnnexinA2的表达能够促进前列腺癌进展,机制上可能是通过上调MMP-2和MMP-9的表达来实现的。
- 丁滔郑江花洪斌邹依珩
- 关键词：前列腺癌基质金属蛋白酶类
