四川省科技厅应用基础研究计划项目(2006J-049)
- 作品数：2 被引量：11H指数：2
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- 相关机构：石河子大学更多>>
- 发文基金：四川省科技厅应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 粪肠球菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用被引量：6
- 2008年
- 利用超声波裂解法制备粪肠球菌的裂解物作为抗原包被酶标反应板，通过棋盘滴定方法筛选最佳反应条件，成功地建立了检测致羔羊脑炎粪肠球菌抗体的间接ELISA。在此间接ELISA中，抗原最佳包被浓度为37．57μg／mL，被检血清的最佳稀释度为1：100。建立的间接ELISA的灵敏度是微量凝集反应的25～100倍。交叉试验、阻断试验、重复性试验表明，该方法具有重复性好、特异性强、操作简便快速等特点。确立的检测ELISA效价的回归方程lg[1／ET]=1．275＋2．730 D405nm，可用于抗体定量测定。利用此方法检测了来自未免疫绵羊场的50份成年绵羊的血清和50份羔羊的血清；结果，2份成年绵羊的血清为阳性，其他样品均为阴性。
- 周霞王晓兰剡根强马勋
- 关键词：间接ELISA粪肠球菌羔羊脑炎
- 致羔羊脑炎粪肠球菌PCR检测方法的建立和应用被引量：5
- 2008年
- 根据肠球菌的保守tuf基因设计引物,以致羔羊脑炎粪肠球菌基因组DNA为模板,扩增出了与设计大小相一致的112bp的基因片段,成功地建立了检测致羔羊脑炎肠球菌的PCR方法。确立的PCR反应最佳条件为:复性温度55℃,Mg2+浓度2.5μmol/L,最佳反应模式为95℃5min;94℃30s,55℃30s,72℃30s,35个循环;最后72℃延伸10min,于4℃结束反应。该方法能检测DNA的最小量为10fg。应用该方法对分离的致羔羊脑炎粪肠球菌、由肠球菌导致发病或死亡羔羊脏器以及人工感染死亡小鼠的主要脏器进行扩增,均能得到特异性的DNA条带;对其他7种病原菌,马腺疫链球菌C群、G群链球菌、A群链球菌、金黄色葡萄球菌、羊源李氏杆菌、绵羊布氏杆菌、绵羊肺炎支原体不能扩增出特异的DNA条带。
- 周霞王晓兰剡根强马勋
- 关键词：羔羊脑炎粪肠球菌聚合酶链式反应
