泰安市科技发展计划项目(20132094)
- 作品数：11 被引量：17H指数：2
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- 利用pHsh载体克隆与表达双活性阿拉伯/木糖苷酶被引量：1
- 2014年
- 将来源于嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus JW200)的双活性阿拉伯/木糖苷酶(XarB)构建到新型热激质粒pHsh上,得到重组质粒。将重组质粒pHsh-xarB转入大肠杆菌(Escherichia coli JM109)。SDS-PAGE结果表明,该重组酶的分子量为86 kDa,与理论值相符。基于热激载体pHsh的重组表达系统具有诱导表达简便、诱导方式廉价的优点,且重组酶热稳定性好。
- 彭静静
- 关键词：克隆
- 泰山湖泊浮游动物群落优势种调查及分析被引量：2
- 2014年
- 本文通过对泰安地区的大河水库、泰山学院未了湖6个采样站点的浮游动物及其相关水环境指标进行了初步调查,共鉴定出16种浮游动物,其中轮虫6种,桡足类5种,枝角类2种,原生动物2种,糠虾1种.水域的主要优势种为轮虫和桡足类,而且所出现的优势种多为水体富营养化和渔场天然饵料的指示种.根据优势种指示生物法与理化因子相结合,推断该水域存在水体富营养化.
- 彭静静
- 关键词：浮游动物优势种水体富营养化
- 热纤梭菌内切β-1,4-葡聚糖酶的克隆与表达
- 2014年
- 将来源于热纤梭菌(Clostridium thermocellum)ATCC 27405的编码内切β-1,4-葡聚糖酶的结构基因(celD)与热激表达载体pHsh连接,得到重组表达载体pHsh-celD,并将重组表达载体pHsh-celD转入到大肠杆菌Escherichia coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL中。结果表明,该重组酶的分子质量为66 ku,与预期大小相符。基于表达载体pHsh的重组表达系统具有诱导表达简便、诱导方式廉价的优点,且重组酶热稳定性非常好,对该酶的大规模发酵应用具有重要意义。
- 彭静静
- 关键词：纤维素酶克隆
- 利用pET-20b克隆与表达多功能半纤维素酶
- 2014年
- 将来源于嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus,JW200)的双活性阿拉伯/木糖苷酶(XarB)构建到pET-20b(+)上,得到质粒pET-20b-xarB。将来源于疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus DSM 5826)木聚糖酶A(XynA)构建到pET-20b-xarB上,得到表达质粒pET-20b-xarB-xynA。将重组质粒pET-20b-xarB-xynA转入大肠杆菌Escherichia coli JM109(DE3)进行表达。SDS-PAGE结果显示,该重组酶的分子量为108 kDa,与理论值相符。
- 彭静静
- 关键词：木聚糖酶克隆
- 多功能半纤维素酶的构建及其酶解应用分析被引量：1
- 2014年
- 以前期构建的来源于嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus JW200)的双活性阿拉伯/木糖苷酶(XarB)和来源于疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus DSM 5826)木聚糖酶A(XynA)融合酶为基础,在融合酶的两个催化结构域间插入多肽Linker,并通过优化Linker组成和长度避免催化结构域互相之间的干扰,以增强融合酶的催化效率。通过酶解燕麦木聚糖和麦麸试验发现,带有多肽Linker的融合酶催化效率得到了提高。
- 彭静静
- 关键词：半纤维素木聚糖酶酶解
- 利用pHsh载体克隆与表达多功能半纤维素酶被引量：2
- 2014年
- 将来源于嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus JW200)的双活性阿拉伯/木糖苷酶(XarB)基因构建到新型热激质粒pHsh上,得到质粒pHsh-xarB。将来源于疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus DSM5826)的木聚糖酶A(XynA)基因构建到pHsh-xarB上,得到表达质粒pHsh-xarB-xynA。将重组质粒pHsh-xarB-xynA转入大肠杆菌Escherichia coli JM109进行表达。SDS-PAGE结果显示,该重组酶的分子量为108 000,与理论值相符。Xyn-SDS-PAGE显示该融合酶具备木聚糖酶的活性。基于热激载体pHsh的重组表达系统具有诱导表达简便、诱导方式廉价的优点,且重组酶热稳定性好,这对该酶的大规模发酵应用具有重要意义。
- 彭静静
- 关键词：木聚糖酶克隆
- 耐热纤维素酶在大肠杆菌中的高效表达及酶学特性分析
- 2014年
- 将来源于热纤梭菌（Clostridium thermocellum ATCC 27405）的编码内切β-1,4-葡聚糖酶的结构基因（celD）分别插入到pHsh和pET两个表达系统,分别得到质粒pHsh-celD和pET-20b-celD。将重组质粒转化入大肠杆菌Escherichia coli BL21-CodonPlus（DE3）-RIL中表达,在pET系统表达时形成包涵体,采用热激表达系统pHsh在大肠杆菌表达时实现了纤维素酶的可溶性表达。SDS-PAGE结果显示,该重组酶的分子质量为66kD,与理论值相符。纯化的纤维素酶的最适反应pH为5.4,在特性不同的pH条件下60℃保温30 min,重组纤维素酶在5.4-7.8的pH范围内比较稳定,在75℃下酶的半衰期约为1 h,Ca^2＋可以增强酶活,而EDTA则会抑制酶的活性。基于热激载体pHsh的重组表达系统具有诱导表达简便、诱导方式廉价的优点,且重组酶热稳定性非常好,这对该酶的大规模发酵应用具有重要意义。
- 彭静静
- 关键词：纤维素酶包涵体
- 植物中tRNaseZ同源蛋白的鉴定和分析
- 2014年
- tRNase Z是金属-β-内酰胺酶(MBL)超家族中的一员,它与pre-tRNA 3'末端的成熟加工相关。人们普遍对微生物和动物的tRNase Z研究较多,但对植物的tRNase Z认识很少。为了更好地了解植物tRNase Z,我们对10种已测序植物进行tRNase Z同源检索并分析。研究表明植物中存在3种tRNase Z,细菌型tRNase ZS只存在于低等的陆生植物和绿藻类植物中,真核型tRNase ZL和海栖热袍菌型tRNase ZS广泛存在于各类植物中。海栖热袍菌tRNase ZS具有独特的保守模体:KL模体、EgxSxxG模体、xHxT模体和HxH模体。对开花植物的tRNase ZS定位预测显示,海栖热袍菌型tRNase ZS定位于植物细胞的叶绿体中。进一步分析发现,低等植物中存在一些没有tRNase Z活性的tRNase Z-like蛋白。试验结果显示植物的tRNase Z比真菌和动物的更加丰富。海栖热袍菌型tRNase ZS和tRNase Z-like蛋白的发现,丰富了tRNase Z家族,加深了人们对tRNase Z的认识。
- 彭静静
- 关键词：植物多序列比对
- 两种模式酵母中可分解丙酮醛的GLO3的特性及鉴定
- 2014年
- GLO3是一种不依赖辅助因子就可分解丙酮醛的酶,有研究表明大肠杆菌的EcHsp31和人的HsDJ-1均属于这种GLO3。丙酮醛是细胞糖酵解过程中产生的一种有毒的副产物,乙二醛酶Ⅰ(GLO1)和乙二醛酶Ⅱ(GLO2)在谷胱甘肽(GSH)的辅助下可以降解细胞内丙酮醛,乙二醛酶Ⅲ(GLO3)不需要GSH的辅助可以直接降解MG。研究真菌的GLO3降解丙酮醛的机制,对认识和研究因丙酮醛引起的疾病具有重要的指导意义。研究表明,真菌中GLO3同源蛋白十分复杂,Hsp31在真菌中广泛存在,DJ-1只在部分真菌中存在,进化树结果支持GLO3的同源蛋白Hsp31和DJ-1是一种趋同进化。对模式真菌酿酒酵母的ScHsp31和裂殖酵母SpDJ-1进行GLO3的酶活测定和HPLC产物检测表明,这两种蛋白均具有GLO3的特性。
- 彭静静
- 关键词：真菌丙酮醛趋同进化HPLC
- 植物病原真菌中MAPK级联通路研究进展被引量：9
- 2014年
- 尽管真菌和动植物的生活方式不同,但是它们具有很多类似的信号通路,调节各自细胞活动。在这些进化保守的信号通路中,MAPK信号通路通过蛋白磷酸化方式调控,是十分重要的信号通路。目前对很多植物病原真菌的MAPK级联激酶研究表明,MAPK级联通路涉及该类真菌的有性生殖、菌丝侵染、细胞壁完整、环境胁迫、致病毒力等方面。MAPK信号通路是一个复杂的信号网路,植物病原真菌通过某些重要基因实现不同MAPK通路之间的对话,以应答寄主对自身做出的防御反应。介绍了植物病原真菌的3条MAPK级联通路和它们之间存在的cross-talk的研究进展,并阐述了MAPK信号通路在植物病原真菌侵染和寄主防御中的重要作用。
- 彭静静
- 关键词：MAPK植物病原真菌信号通路CROSS-TALK
