浙江省教育厅科研计划项目(20051085)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：刘晓艳阮黎明羊正纲蒋筱凌方红更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乙酰肝素酶基因siRNA表达载体的构建及其沉寂作用被引量：2
- 2007年
- 目的:构建针对人乙酰肝素酶(HPSE)基因的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对HPSE基因的干扰作用。方法:设计HPSE靶向的发夹状siRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pRNATU6.1载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人恶性黑素瘤细胞A375,采用半定量PCR测定HPSE基因RNA水平变化,Western blot检测HPSE蛋白表达的变化。结果:将针对HPSE基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆到pRNATU6.1载体,经过阳性菌落PCR鉴定与测序,结果正确;转染A375细胞后,半定量PCR和Western blot检测显示,HPSE基因和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。结论:成功构建了针对HPSE基因的siRNA载体,转染细胞后可抑制HPSE的表达。
- 刘晓艳方红羊正纲张妤阮黎明蒋筱凌
- 关键词：葡糖醛酸糖苷酶乙酰肝素酶
- 乙酰肝素酶-siRNA表达载体的构建及其抑制黑素瘤细胞株体外侵袭能力的观察被引量：1
- 2007年
- 目的构建针对人乙酰肝素酶(HPSE)基因的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,观察其对A375细胞HPSE基因的干扰作用及其对肿瘤细胞体外侵袭的抑制作用。方法设计并构建了重组质粒pRNATU6.1/HPSE-siRNA,转染A375细胞,用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别测定HPSE基因RNA和蛋白水平的表达变化,Matrigel侵袭实验观察A375细胞体外侵袭能力的改变。结果将针对HPSE基因的siRNA的双链寡核苷酸片段正确克隆到pRNATU6.1载体;转染A375细胞,与对照组比较,HPSE-siRNA组HPSE基因和蛋白的表达均明显降低。转染后肿瘤细胞的体外侵袭能力与对照组相比受到明显抑制。结论成功构建了针对HPSE基因的siRNA载体,HPSE-siRNA转染A375细胞可以显著降低细胞HPSE基因和蛋白的表达。
- 刘晓艳方红羊正纲阮黎明方德仁丁颖果王懿娜张好蒋筱凌
- 关键词：RNA干扰黑色素瘤乙酰肝素酶
