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P277多肽融合热休克蛋白65提高抗1型糖尿病的作用被引量：4: 2008年; 为了提高P277肽抗1型糖尿病的作用,把P277肽融合在卡介苗热休克蛋白65的C端,构建了pET28a- HSP65-P277高效表达载体,在大肠杆菌中高效可溶性表达。利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱层析分离纯化了融合蛋白HSP65-P277。使用HSP65-P277在没有任何佐剂存在的情况下免疫非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠,通过三次腹腔注射,每月收集被免疫动物的血清,血糖浓度用自动生化分析仪测定。结果显示HSP65-P277免疫组小鼠血糖平均值及糖尿病的累积发病率和其余组相比均有显著差异(P<0.01),融合蛋白HSP65-P277抗NOD小鼠糖尿病的作用显著高于单独的P277和HSP65。为进一步开发能用于临床的1型糖尿病疫苗提供了良好的设计思路,HSP65-P277极有可能进一步发展成为新的抗Ⅰ型糖尿病的疫苗。; 朱爱华鲁勇金亮吴洁李泰明刘景晶; 关键词：热休克蛋白 1型糖尿病融合蛋白血糖

新的生长激素释放激素类似肽Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys的重组和比较活性(英文)被引量：1: 2009年; 目的:为了寻找高活性和长半衰期生的GHRH类似肽。方法:通过使用独特的酸敏感水解位点Asp-Pro的原核表达系统,构建了新的Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys类似肽。通过重组细菌裂解、包含体洗涤、乙醇分级沉淀、酸水解、SP-SephadexC-25和SephadexG-10柱层析等技术,纯化了高纯度的Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys肽。通过使用SDS-PAGE、离子化质谱、雌大鼠垂体和人流产胎儿垂体,测定了多肽的纯度、分子量、生长激素释放活性。结果:Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys肽分子量5373Da与实际值吻合,0.1～10μg/ml的肽剂量不论是对人垂体还是大鼠垂体都增加了垂体生长激素的释放,大鼠垂体生长激素的释放具有剂量依赖性。与标准的hGHRH(1-40)肽比较,新的类似肽有较高的GH释放活性。结果也显示了,Pro-GHRH(1-44)Gly-Gly-Cys与Pro-hGHRH(1-44)肽的GH释放活性无统计学差异。结论:新的类似肽有较好的生长激素释放活性、功能选择性和种属特异性。; 唐松山张娟辉孔欣唐柏山刘景晶

L-天冬酰胺酶表面呈现对P277肽免疫原性及抗NOD小鼠糖尿病作用的影响(英文): 2007年; 将P277多肽融合在L-天冬酰胺酶的C端,中间引入破伤毒素肽(TTP),重组嵌合酶AnsB-TTP-P277能以可溶性蛋白的形式表达于大肠杆菌周质内,且能保持大约80%的天然酶催化活力.用纯化的嵌合酶腹腔注射非肥胖性(NOD)小鼠,可成功诱导小鼠体内产生高水平抗P277抗体.研究表明,P277肽可呈现于L-天冬酰胺酶表面,有效地克服单独P277的弱免疫原性,激发机体产生较强烈的免疫反应.小鼠胰腺病理学切片也显示:重组嵌合酶AnsB-TTP-P277和单纯P277肽相比,能更有效地抑制NOD小鼠糖尿病的发生.; 朱爱华刘文涛龙军吴洁刘景晶李泰明; 关键词：L-天冬酰胺酶胰岛素依赖型糖尿病血糖

N端延伸的人肠生长激素类似物基因的合成、克隆及融合表达被引量：3: 2005年; 目的:合成、克隆及融合表达N端延伸2个Pro,并由Gly取代N端第2个氨基酸Ala的人肠生长激素类似物PP-h[Gly2]GLP-2,初步测定其促肠生长的生物学活性。方法:合成长度分别为53,54及53个碱基的三段寡核苷酸,以中段寡核苷酸为模板,两端寡核苷酸为引物,经PCR合成PP-h[Gly2]GLP-2基因,克隆于pUC18载体。经测序正确后,将该基因与融合表达载体pED连接构建融合表达质粒pEDGLP-2,转化E.coliBL21(DE3),进行诱导表达,用SDS-PAGE分析。融合蛋白经分离纯化和酸切割后,分离获得PP-h[Gly2]GLP-2,用电喷雾质谱法测定其相对分子质量,并对雄性SD大鼠皮下给药14 d,初步测定其促肠生长活性。结果:诱导后融合蛋白表达量占菌体可溶性总蛋白的40%以上。电喷雾质谱法测得:经酸切割获得的PP-h[Gly2]GLP-2的相对分子质量为3 947.97 Da,与预测值3 947.38 Da基本一致。初步动物实验结果显示,0.5 mg/(kg.d)剂量组小肠增重百分比为41.65%,与PBS组相比具有显著差异。结论:制备获得的人肠生长激素类似物PP-h[Gly2]GLP-2,与设计的相对分子质量一致,有明显的促肠生长活性。; 李泰明胡卓逸刘景晶马小驹周慧闵伟伟

重组热休克蛋白65对NOD小鼠糖尿病的预防作用研究被引量：1: 2007年; 目的研究重组热休克蛋白65对NOD小鼠糖尿病发生的预防作用,评价其对人1型糖尿病的作用。方法通过PCR方法克隆出结核分枝杆菌的热休克蛋白65的基因序列,构建了pET28a-HSP65高效表达载体,在大肠杆菌中高效可溶性表达。利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱层析分离纯化重组蛋白HSP65。在没有任何佐剂存在的情况下使用HSP65免疫非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠,通过三次腹腔注射,每月收集被免疫动物的血清,血糖浓度用自动生化分析仪测定。结果HSP65免疫组小鼠血糖平均值及糖尿病的累积发病率和对照组相比均有显著差异(P<0.01)。结论重组蛋白HSP65对NOD小鼠糖尿病的发生有很好的预防作用,可以进一步研究开发这种免佐剂1型糖尿病疫苗。; 朱爱华刘景晶刘文涛鲁勇金亮吴洁; 关键词：热休克蛋白 1型糖尿病疫苗血糖

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国家高技术研究发展计划(2002AA217031-2)