黑龙江省科技攻关计划(GB01C10601)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：周令望赵文然钟学宽刘艺孙辉更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人类磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶的真核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2006年
- 目的在真核细胞中表达人磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)并制备抗PHGPx多克隆抗体。方法用特异引物从人睾丸组织cDNA文库中扩增出人线粒体型PHGPxcDNA,与真核表达载体pcDNA3.1/His重组,在COS-1细胞内表达PHGPx。用大肠杆菌表达的突变的PHGPx免疫动物,制备抗PHGPx抗体。结果重组体pcDNA-PHGPx转染的COS-1细胞表达了人PHGPx融合蛋白,PHGPx活性为111.5μmol·mg-1·min-1,高于对照组5倍。免疫扩散测得抗PHGPx多克隆抗血清滴度为1∶16;用于蛋白印迹时稀释倍数为1∶500,可见特异免疫沉淀条带。结论人PHGPx在COS-1细胞内获得了表达,抗PHGPx多克隆抗体有特异性,可以用于重组表达的PHGPx的鉴定。
- 赵文然钟翔宇孙辉周令望曲章义钟学宽
- 关键词：基因表达抗体硒
- 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶的克隆及在大肠埃希菌中的表达被引量：4
- 2004年
- 目的在大肠埃希菌中表达磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(phospholipidhydroperoxideglutathioneperoxidase,PHGPx),以期用于抗PHGPx抗体的制备。方法用特异引物从基因文库中扩增出PHGPxcDNA,与表达载体重组,转化大肠埃希菌。重组体中的PHGPx经点突变作用,编码硒半胱氨酸的密码子UGA变为编码半胱氨酸的UGU。结果序列分析表明,克隆载体中包含PHGPx的完整编码序列及3'未翻译区序列;经SDS鄄PAGE及WesternBlot证实PHGPx在大肠埃希菌中获得了成功表达。结论突变的PGPGx可以在大肠埃希菌中高效表达并可用于制备抗PHGPx抗体。
- 赵文然周令望刘艺钟学宽
- 关键词：克隆基因表达大肠埃希菌点突变抗体
