吉林省科技发展计划基金(200705369)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- RNA干扰端粒酶活性对HeLa细胞生物学行为的影响
- 2010年
- 目的观察RNA干扰（RNAi）体外培养的HeLa细胞端粒酶催化亚单位（hTERT）对HeLa细胞生物学行为的影响，进一步探讨端粒酶活性与肿瘤细胞恶性生物学行为的相关性。方法体外转录法设计合成4条针对hTERT基因的shRNA，脂质体转染HeLa细胞后经免疫荧光染色和端粒重复序列扩增一酶联免疫法（TRAP—ELISA）测定端粒酶活性，筛选出端粒酶沉默效果最佳片段即B链shRNA。以B链shRNA转染HeI。a细胞为实验组，转染无关siRNA的HeLa细胞为对照组，显微镜下观察细胞在纤维黏连蛋白（FN）上的铺展；CCK一8细胞计数试剂盒检测细胞在FN上黏附；划痕实验评价细胞迁移；Boyden小室侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果铺展实验显示细胞接种到FN上30min时，对照组铺展细胞的比率为（31．3±7．9）％，而实验组铺展细胞的比率仅为（5．6±2．3）％，两组差异有统计学意义（P〈0．01）；2h后对照组和实验组铺展细胞的比率分别为（79．4±4．8）％和（26．3±6．1）％，两组差异仍有统计学意义（P〈0．01）；24h后两组所有细胞几乎均呈铺展状态。细胞黏附实验显示细胞在FN上黏附30rain时对照组细胞黏附率为（83．7±5．4）％，而实验组的细胞黏附率为（67．2±2．8）％，明显低于对照组（P〈0．05）。划痕实验检测细胞的迁移能力显示实验组细胞24h迁移率为（27．1±6．2）％，明显低于对照组（58．7±15．0）％。Boyden小室侵袭实验显示在Matrigel胶上培养4h后，实验组和对照组侵袭的细胞数分别为75．7±14．5和165．1±11．0，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论降低体外培养HeLa细胞的端粒酶活性使细胞的生物学特性发生改变，表现为减低了HeLa细胞的恶性生物学行为。
- 石英爱赵强张丽红王光兰于晓霞李玉林吴珊
- 关键词：HELA细胞RNA小分子干扰
- 沉默端粒酶活性对HeLa细胞凋亡的影响
- 目的沉默HeLa细胞人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit,hTERT)基因表达、抑制细胞端粒酶活性,观察对细胞凋亡的影响。方法应用RNA干涉技术(RNAinterfer...
- 石英爱吴珊赵强张丽红李玉林
- 关键词：端粒酶HTERTRNA干涉细胞凋亡
- 文献传递
- 沉默HeLa细胞端粒酶活性对其在裸鼠体内移植瘤生长的影响被引量：1
- 2009年
- 目的沉默HeLa细胞人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit,hTERT)基因、抑制细胞端粒酶活性,观察细胞生长状态和其对裸鼠体内移植接种成瘤能力的影响。方法RNAi技术,脂质体转染,筛选沉默hTERT基因稳定转染细胞株和无干扰效果的对照细胞株,端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定法(TRAP-ELISA)测定所筛选的细胞株端粒酶活性;进一步绘制各细胞株的生长曲线;裸鼠移植接种实验观察各株细胞在裸鼠体内成瘤能力。结果成功获得稳定转染具有沉默hTERT基因,端粒酶活性明显降低的实验组细胞株2个即T1,T2,同时获得对照细胞株1个(N1),还以无转染的HeLa细胞为亲本对照。细胞生长曲线显示与相应的对照组相比,实验组细胞(T1,T2)生长速度明显减慢(P<0.05)。裸鼠体内成瘤实验结果显示实验组和对照组均有皮下肿瘤形成,移植接种20天后,处死裸鼠取出肿瘤称量结果显示对照组形成的实体肿瘤平均重量分别为:0.057 7±0.034 9 g和0.054 4±0.033 5 g,而实验组T1和T2组肿瘤重量明显减轻(P<0.05),仅分别为:0.024 5±0.010 9 g和0.027 2±0.007 5 g。结论沉默Hela细胞hTERT基因降低肿瘤细胞的端粒酶活性,使细胞的体外增殖速度减慢,在裸鼠体内皮下成瘤能力受到明显抑制。
- 石英爱赵强张海英张丽红王光兰陈爽王勇
- 关键词：端粒酶HTERTRNA干涉裸鼠
