“十五”国家科技攻关计划(2004BA514A)
- 作品数：5 被引量：21H指数：3
- 相关作者：朱绍辉单虎王志亮吴延功张浩更多>>
- 相关机构：中国动物卫生与流行病学中心莱阳农学院青岛农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 抗猪附红细胞体单克隆抗体的制备被引量：4
- 2007年
- 以纯化的猪附红细胞体免疫BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,并用间接ELISA方法进行筛选,经过间接ELISA方法、免疫印迹和间接免疫荧光试验进行鉴定,共获得5株分泌抗猪附红细胞体单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1H1、1H2、3A5、5B1和7E11,其单抗亚类鉴定分别属于IgG2b、IgG1、IgG2b、IgG2b和IgG2b。这5株McAb均能与猪附红细胞体全菌蛋白发生特异性反应,而不与猪肺炎支原体、猪链球菌、大肠杆菌和猪繁殖与呼吸综合征病毒发生反应,并且1H1、3A5和5B1能识别同一抗原位点,1H2和7E11识别另一抗原位点。
- 张浩吴晓东张守富单虎吴延功王志亮刘佩兰朱绍辉
- 关键词：杂交瘤猪附红细胞体单克隆抗体间接ELISA
- 单抗捕捉ELISA检测猪附红细胞体血清抗体方法的建立被引量：7
- 2009年
- 在制备针对猪附红细胞体病的特异性单克隆抗体的基础上,建立了单抗捕捉快速检测猪附红细胞体病抗体的ELISA方法,并对影响ELISA结果的各项反应条件进行了优化。结果表明,猪附红细胞体腹水单抗的最佳稀释度为1∶20 000,猪附红细胞体病抗原工作质量浓度为4.088 mg/L,血清稀释度为1∶40,HRP标记的兔抗猪IgG的工作浓度为1∶5 000。待检血清和酶标二抗的反应时间均为37℃1 h;底物在室温显色时间为10 min。已建立的ELISA方法与PCR平行检测50份样本,总符合率为92%,表明该方法特异性强、快速、敏感性高。用该法检测了各地采集的171份血清,阳性率为40.4%,与镜检的符合率为59.2%;阴性率为47.4%,与镜检的符合率为66.7%,总符合率为67.3%。
- 张浩单虎吴延功张守富吴晓东王志亮刘佩兰朱绍辉
- 关键词：猪附红细胞体病单克隆抗体抗体检测
- 单抗捕捉ELISA检测猪附红细胞体血清抗体方法的建立
- 2008年
- 张浩单虎吴延功张守富吴晓东王志亮刘佩兰朱绍辉
- 关键词：ELISA检测血清抗体抗体方法家畜附红细胞体病ELISA方法
- 单克隆抗体间接免疫荧光(IFA)检测猪附红细胞体被引量：3
- 2007年
- 为建立利用单克隆抗体检测猪附红细胞体病的间接免疫荧光(IFA)方法,用抗猪附红细胞体的单克隆抗体,对48份疑似猪附红细胞体感染的病猪猪血进行免疫荧光检测,并与血涂片镜检及PCR检测方法进行比较,结果显示IFA检测的阳性率为68.75%,与PCR检测阳性率为77.08%符合率较高,比血涂片的瑞氏和姬姆萨染色镜检阳性率高出近30个百分点;而用猪肺炎支原体、猪链球菌和猪巴氏杆菌作对照,结果均呈阴性。建立的用抗猪附红细胞体的单克隆抗体检测猪附红细胞体病的IFA特异性强,敏感性高;检测临床样品的结果准确可靠。
- 朱绍辉吴延功单虎姜同泉张浩
- 关键词：猪附红细胞体间接免疫荧光单克隆抗体
- 抗猪附红细胞体单克隆抗体的制备
- 以纯化的猪附红细胞体(EH)免疫BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,并用间接ELISA方法进行筛选,经间接ELISA方法、免疫印迹和间接免疫荧光试验进行鉴定,共获得5株分泌抗猪附红细胞体单克隆抗体(Mc...
- 张浩吴晓东陈静张守富单虎吴延功王志亮刘佩兰朱绍辉
- 关键词：杂交瘤猪附红细胞体单克隆抗体间接ELISA
- 文献传递
- 单克隆抗体间接免疫荧光(IFAT)检测猪附红细胞体
- 用抗猪附红细胞体的单克隆抗体,时48份疑似猪附红细胞体感染的病猪猪血进行免疫荧光检测,并与血涂片镜检及PCR检测方法进行比较,结果显示IFAT检测的阳性率为62．5％,与PER检测阳性率为64．59％基本相符,比血涂片的...
- 朱绍辉单虎吴延功张浩姜同泉
- 关键词：猪附红细胞体间接免疫荧光单克隆抗体
- 文献传递
- 猪附红细胞体实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：8
- 2007年
- 参照猪附红细胞体16 S rRNA基因序列设计了1对引物,分别以标准株和分离株的基因组DNA为模板,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测猪附红细胞体,确定特异性产物的Tm值,同时做普通PCR。试验结果表明,特异性产物的Tm值为88.5℃,最低能检测到含0.036 fg/μL阳性质粒的标准品。以阳性质粒标准品10倍倍比稀释的模板进行实时荧光定量PCR,通过对反应体系和反应条件进行筛选和优化,建立了检测猪附红细胞体的标准曲线。建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法显示了较好的特异性、敏感性和广谱性,为猪附红细胞体病的临床检测和流行情况调查提供了新的技术手段。
- 朱绍辉吴延功单虎王志亮姜同泉孙承英赵永刚
- 关键词：猪附红细胞体实时荧光定量PCR荧光染料
- 猪附红细胞体荧光定量PCR检测方法的建立
- 参照猪附红细胞体16S rRNA的基因序列,设计引物,建立SYBR GreenⅠ荧光PCR方法检测猪附红细胞体病原,确定特异性产物的Tm值,同时做普通PCR。试验结果表明:特异性产物的Tm值为88.5℃,最低能检测到0....
- 朱绍辉吴延功单虎王志亮孙承英赵永刚
- 关键词：猪附红细胞体荧光PCR荧光染料
- 文献传递
- 猪附红细胞体PCR检测方法的建立与应用
- 从确诊为附红细胞体感染的猪无菌采集血样,经纯化后抽提猪附红细胞体基因组DNA,根据已报道的猪附红细胞体16S rRNA基因序列的特点设计了一对特异性引物,进行PCR扩增,结果扩增出了421bp的猪附红细胞体片断,然后对扩...
- 朱绍辉单虎吴延功张浩姜同泉
- 关键词：猪附红细胞体PCR
- 文献传递
