江苏省自然科学基金(SBK200921231)
- 作品数：6 被引量：12H指数：3
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- 相关机构：中国药科大学江苏科技大学安徽农业大学更多>>
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- 相关领域：化学工程生物学轻工技术与工程更多>>
- 产腺苷甲硫氨酸酿酒酵母补料分批培养工艺的优化
- 2017年
- 对酿酒酵母工程菌Saccharomyces cerevisiae mls1△acs2-Met K在20 L发酵罐中合成腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)的补料分批培养工艺进行优化,增加糖蜜的流加时间,提高溶解氧水平;在此基础上,测定发酵过程中前体甲硫氨酸的消耗曲线,在发酵后期流加前体甲硫氨酸以提高SAM产量。结果表明,在32~72 h流加糖蜜发酵,最终SAM产量和生物量分别达到6.16 g/L和20.83 g/L。将溶解氧水平提高至30%,发酵136 h,最终SAM产量和生物量分别达到11.40 g/L和25.24 g/L。在此基础上,从96 h开始流加甲硫氨酸至发酵结束,最终SAM产量和生物量分别达到15.23 g/L和28.81 g/L。与未优化的工艺相比,SAM产量提高了147.24%。通过流加糖蜜、甲硫氨酸,提高溶解氧,可以有效提高酿酒酵母在20 L发酵罐中的SAM产量和生物量;该工艺在工业化生产中具有潜在的应用价值。
- 王志来郭建胥加龙周长林
- 关键词：腺苷甲硫氨酸酿酒酵母补料分批培养糖蜜溶解氧甲硫氨酸
- 全局转录工程法构建产S-腺苷蛋氨酸重组酿酒酵母的研究被引量：5
- 2012年
- 利用全局转录工程(global transcription machinery engineering,gTME)方法对酿酒酵母RNA聚合酶II中的转录因子SPT15和TAF25编码的基因进行克隆并结合易错PCR随机突变,将SPT15和TAF25的易错PCR产物连接改造的pYES2.0表达载体。并用醋酸锂转化的方法转化酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae CGMCC 2846中,研究了SPT15和TAF25的定向进化对酿酒酵母产S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)的影响。经过筛选分别获得了重组酿酒酵母菌株spt15-81和taf25-36。对其发酵性状分别进行了初步研究,在28℃、200 r/min条件下,250 mL摇瓶(50 mL O-medium)发酵48 h时,SAM的产量分别比对照菌株提高了2.0倍和1.8倍。由此表明。
- 曹喜涛陈凯李扬窦洁王慧周长林奚涛
- 关键词：酿酒酵母易错PCRS-腺苷甲硫氨酸
- 酿酒酵母单倍体菌株分离筛选及其产腺苷甲硫氨酸的初步研究被引量：1
- 2015年
- 获得产腺苷甲硫氨酸的二倍体酿酒酵母CGMCC 2842遗传育种单倍体亲本。采用不同产孢培养基考察了酿酒酵母的产孢率,并对酿酒酵母CGMCC 2842进行了生孢培养分离子囊孢子得到单倍体菌株,确定单倍体配型,测定不同单倍体菌株腺苷甲硫氨酸含量。从分离的七株单倍体菌株(6株a型和1株α型)中筛选出一株产腺苷甲硫氨酸较高的a配型的单倍体菌株,经250 m L摇瓶发酵48 h后产腺苷甲硫氨酸1.10 g/L。筛选得到了一株产腺苷甲硫氨酸较高a型的单倍体菌株,为菌株的进一步遗传育种改良和腺苷甲硫氨酸微生物发酵法规模化生产奠定了基础。
- 曹喜涛陈凯李扬窦洁王慧周长林奚涛
- 关键词：酿酒酵母单倍体产孢腺苷甲硫氨酸
- 利用抗CTP合成酶反馈抑制筛选胞苷高产突变株被引量：3
- 2009年
- 目的:通过解除对CTP合成酶的反馈抑制,得到胞苷高产突变株。方法:以胞苷脱氨酶缺失的枯草芽孢杆菌为出发菌株进行亚硝基胍(NTG)诱变,用6-氮杂尿嘧啶(6-AU)、5-氟胞苷(5-FCR)和3-脱杂氮尿嘧啶(3-DU)3种嘧啶结构类似物进行抗性筛选。结果:筛选得到突变株K-215,研究表明其抗6-AU、5-FCR和3-DU的浓度分别是0.9mg/mL,3.5mg/mL和4.5mg/mL;突变株CTP合成酶的活性为出发菌株的6.2倍,37℃培养80h积累胞苷可达6.2mg/mL。结论:突变株K-215能够累积胞苷且CTP合成酶的反馈抑制得到部分解除。
- 李登奎徐晓莉黄雷鸣陈颖窦洁周长林
- 关键词：胞苷抗性筛选
- 高密度发酵解脂假丝酵母生产RNA的工艺研究被引量：3
- 2011年
- 为进一步优化RNA生产工艺,通过对解脂假丝酵母发酵培养,研究了pH、溶氧、还原糖浓度、高密度补料分批发酵和高密度连续发酵等因素对RNA产量及还原糖转化成菌体的转化率(g-DCW/g-reducing sugar)的影响。实验结果表明,最佳培养条件为pH 4,溶氧30%。在分批发酵中,培养基糖浓度为40 g/L时,最高DCW(dry cell weight)可达19.5 g/L,培养时间为8 h,RNA最高含量达到14.3%(g-RNA/g-DCW),转化率为48.2%。在最佳pH和溶氧条件下进行pH-stat补糖分批发酵,控制罐内培养基糖浓度始终维持在15 g/L以下,最高核酸含量达到14.2%,转化率达到43.5%,最高菌体浓度35.6 g/L,比40 g/L糖浓度条件下分批发酵时的菌体浓度提高了75%。在此基础上进行高密度连续发酵,最终结果与高密度分批发酵相似。首次实现了高密度发酵解脂假丝酵母制备RNA。
- 林忠罗众球窦洁王慧邱蔚然曹静周长林
- 关键词：RNA生产工艺溶氧分批补料发酵
- 产腺苷甲硫氨酸酿酒酵母半胱氨酸补料工艺的研究被引量：1
- 2013年
- 对酿酒酵母生物合成腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)发酵过程进行工艺优化,研究了半胱氨酸添加量、半胱氨酸添加时间、碳源对菌体浓度和SAM产量的影响。结果表明,在10 L发酵罐中,发酵16 h时,补加半胱氨酸至浓度2 mmol/L,发酵36 h时菌体(DCW)和SAM浓度分别达到15.40 g/L和4.11 g/L;在此基础上,更换糖蜜为碳源,并在还原糖浓度低于5 g/L时,流加糖蜜,相当于还原糖的流加速率为0.8 g/L.h,发酵36 h时菌体浓度和SAM产量分别为15.50 g/L和5.02 g/L;经过发酵工艺优化,发酵液中SAM浓度提高了43.8%。
- 夏毅杨依顺周长林汪维云
- 关键词：腺苷甲硫氨酸酿酒酵母半胱氨酸碳源糖蜜
