广东省科技计划工业攻关项目(73090)
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
- 相关作者：周小棉雷秀霞陈斌刘大渔王秋平更多>>
- 相关机构：广州市第一人民医院中国科学院广州市第八人民医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省医学科学技术研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 芯片电泳快速检测乙型肝炎病毒YMDD变异
- 目的:利用芯片电泳高分辨力和分析快速的优点,建立一种基于芯片电泳的乙型肝炎病毒YMDD耐药性突变的检测方法。方法:利用序列特异性PCR联合芯片电泳检测乙型肝炎病毒YMDD变异。将YVDD、YIDD标准质粒分别按梯度稀释1...
- 王秋平
- 关键词：乙型肝炎病毒
- 血小板参数在血小板减少症鉴别诊断中的价值探讨被引量：3
- 2008年
- 目的探讨血小板参数在鉴别骨髓性和非骨髓性血小板减少症中的作用。方法使用Cell-Dyn3700血细胞分析仪检测血小板减少症（TP）76例、特发性（免疫性、原发性）血小板减少性紫癜（ITP）66例、继发性血小板减少性紫癜（STP）8例、获得性纯巨核细胞再生障碍性血小板减少性紫癜（AATP）8例、造血干细胞疾病（HSCD）（急性白血病、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征）140例、健康体检者100例（对照组）的血小板计数（PIJT）、平均血小板体积（MPV）、血小板压积（PCT）、血小板分布宽度（PDW）。结果①与对照组相比，HSCD患者的MPV显著减少，PDW明显增加；STP患者MPV、PDW显著增大。②AATP患者MPV正常，PDW增大。③ITP组和TP组与对照组的MPV、PCT、PDW差异有统计学意义（均P〈0．01）。④HSCD组与对照组、ITP组和TP组比较，MPV、PCT和PDW差异有统计学意义（均P〈0．01）。⑤骨髓性TP组与非骨髓性TP组比较，其MPV和PDW均有统计学意义（均P〈0．01）。⑥当ITP患者治疗有效时，PIJT升高，其MPV和PDW下降。结论通过观察MPV和PDW数值的升降，特别是MPV的变化可初步判断血小板减少是由骨髓病变（MPV〈参考值）还是由骨髓外病症（MPV〉参考值）所引起。另外，当ITP患者治疗有效时，可用PDW和MPV较早地（比PLT提前5d）观察到疗效。血小板参数的动态观察有助于ITP的鉴别诊断、病情判断及疗效观察。
- 饶沃明王健黄美筠莫建坤周小棉
- 关键词：血小板减少症血小板参数血小板平均体积血小板分布宽度
- 毛细管电泳筛选与集落细胞刺激因子有相互作用的寡聚糖及其生物活性研究被引量：1
- 2008年
- 目的筛选能与集落细胞刺激因子（granulocyte—colony stimulating factor，G—CSF）结合，并能调节血细胞生长的活性物质，为研究药理作用提供实验依据。方法采用毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE）方法研究15种不同链长和不同硫酸基含量的硫酸寡聚糖（Dextran sulfate，DexS）和G—CSF的相互作用。采用细胞生物学实验观察被筛选出的寡聚糖与G—CSF结合后对小鼠白血病细胞（bipotential murine hemopoietic cell line，NFS-60）增生、细胞周期、细胞表面抗原的表达和细胞形态的影响，以证明毛细管电泳所筛选出的DexS具有促进细胞分化等生物学活性。结果除肝素寡聚糖、降解的卡拉胶、低分子量右旋DexS、非硫酸化的寡聚糖以及碱性壳寡糖外，其余10种寡聚糖与G—CSF均有相互作用。DexS500、λ卡拉胶、ι卡拉胶、k卡拉胶和具有抗凝活性的低分子量肝素（LMWH）-1能抑制NFS-60细胞生长，其作用NFS-60细胞后相对吸光度值分别为31．33±2．08、37．67±2．08、45．00±1．20、43．00±2．65、74．67±1．52，与对照组100．00±3．00比较，差异有统计学意义（t值分别为27．94、26．71、26．42、26．61、10．54，P均〈0．01）。形态学结果表明，LMWH、λ卡拉胶和相对分子质量为500000的硫酸葡聚糖能有效地诱导早幼粒细胞过渡到中性晚幼粒细胞。流式细胞术分析结果表明，用LMWH和λ卡拉胶分别处理细胞后，其表面的CD11b和CD18表达量增加。在硫酸葡聚糖（DexS500）和λ或ι卡拉胶作用后，细胞表面CD34含量增加。用不同的寡聚糖作用后，其CD34表达量降低。用壳寡糖处理后，CDs含量几乎保持不变。细胞周期分析结果表明，在LMWH、DexS500和λ或ι卡拉胶作用后，S期NFS-60细胞减少，而壳寡糖处理后其细胞增加。结论毛细管电泳技术能有效地筛选出与G—CSF有相互作用的酸性寡聚糖，相互作用的强弱与寡
- 周小棉梁爱叶王秋艳林炳承
- 关键词：粒细胞集落刺激因子多糖类白血病
- 基于DNA杂交CD式微流控芯片筛查苯丙酮尿症方法的建立被引量：1
- 2010年
- 目的 建立一种基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片技术,用于PKU基因突变快速筛查.方法 设计并加工一种具有12个微通道的CD式微流控芯片,芯片采用PDMS-玻璃双层结构,分别含有微通道和水凝胶结合探针区.探针区包括R243Q、V245V和空白对照.将PAH外显子7扩增产物加入芯片的进样孔,在离心力的作用下进入杂交微通道区.芯片在离心机中交替旋转或暂停从而进行杂交反应.杂交后将芯片置于荧光显微镜下观察结果并分析荧光信号.评价该方法检测特异性、检测限及重复性.对30例疑似PKU孕妇DNA标本进行检测,并将检测结果与测序比较.结果 利用基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片只需1.5μl样品,杂交时间为15 min,杂交检测限为0.7 ng/μl.对于PKU患者组与健康对照组,芯片检测结果与测序结果一致.挑选不同批次的5张芯片及每张芯片内5个微通道重复检测同一V245V突变PKU患者DNA标本,结果均为阳性,说明重复性较好.对30例疑似PKU孕妇标本进行检测,筛查出4例携带V245V突变,1例携带R243Q突变.结论 建立了一种基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片检测PKU基因突变的方法,该方法简便、快速、高灵敏,可以用于PKU产前筛查.
- 陈斌王秋平李春宇邹晓雷秀霞周小棉江剑辉刘大渔
- 关键词：苯丙酮尿症苯丙氨酸羟化酶核酸杂交
- 芯片电泳快速检测乙型肝炎病毒YMDD变异
- 目的:利用芯片电泳高分辨力和分析快速的优点,建立一种基于芯片电泳的乙型肝炎病毒YMDD耐药性突变的检测方法。方法:利用序列特异性PCR联合芯片电泳检测乙型肝炎病毒YMDD变异。将YVDD、YIDD标准质粒分别按梯度稀释1...
- 王秋平
- 关键词：乙型肝炎病毒
- 乙型肝炎病毒YMDD变异检测方法的新进展被引量：3
- 2011年
- 乙型肝炎病毒（HBV）感染是导致肝硬化和肝癌的重要因素,但长期接受拉米夫定治疗的患者会产生耐药变异,一般服用拉米夫定〉6～9个月,部分患者可发生耐药变异,并随治疗时间延长而突变率逐渐增高。
- 王秋平周小棉
- 关键词：乙型肝炎病毒YMDD变异
- 芯片电泳快速检测乙型肝炎病毒YMDD变异被引量：4
- 2011年
- 目的利用芯片电泳高分辨力和分析快速的优点,建立一种基于芯片电泳的乙型肝炎病毒YMDD耐药性突变的检测方法。方法利用序列特异性PCR联合芯片电泳检测乙型肝炎病毒YMDD变异;将YVDD、YIDD标准质粒分别按梯度稀释108～100进行检测,将105拷贝/μl YVDD、YMDD质粒及YIDD、YMDD质粒分别按99∶1、50∶50、20∶80、10∶90、5∶95、1∶99混合检测,评价该方法的灵敏度;用芯片电泳法检测86份经拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者血清样品中YMDD突变情况,并将其结果与荧光定量PCR比较;两种方法结果不一致的标本进行DNA测序鉴定。结果芯片电泳法能够在3 min内实现HBV YMDD变异检测,标准YVDD、YIDD质粒的检测限均为101拷贝/μl;不同比例(V∶M或I∶M)的混合质粒,最小比例突变检测率YVDD为5.0%,YIDD为10.0%;在86份标本中,芯片电泳检出总变异65份,突变率为75.6%,其中YVDD变异32份、YIDD变异23份、YVDD+YIDD混合变异为10份,荧光定量PCR检出总变异62份,突变率为72.1%,其中YVDD变异30份、YIDD变异29份、YVDD+YIDD混合变异为3份,两种方法检测结果差异无统计学意义(Kappa=0.609);两种方法检测结果不一致的标本20份,经测序结果显示,YMDD野生株6份、YVDD变异7份、YVDD+YIDD混合变异7份。结论芯片电泳法检测YMDD变异具有简单、快速、灵敏度和准确度高的优点,适合于临床实验室开展乙型肝炎病毒YMDD变异的检测。
- 王秋平陈斌雷秀霞刘大渔魏绍静周小棉
- 关键词：乙型肝炎病毒
- 多重聚合酶链反应联合芯片电泳在人乳头瘤病毒基因分型检测中的应用被引量：4
- 2010年
- 研究证实HPV感染是CIN和宫颈癌的主要病因，而且不同HPV亚型感染的致病性和后果也有差异。HPV分型检测对临床CIN和宫颈癌筛查和评估、病程的进展监测、治疗后的随访、以及人群的流行病学状态和病毒疫苗的研制都有重要意义。目前用于临床的HPV检测技术主要有杂交法与实时荧光定量PCR，但这2种方法存在操作复杂、检测时间较长等不足。
- 陈斌周小棉刘大渔雷秀霞汪安石张佳宇尹爱华
- 关键词：基因分型检测多重聚合酶链反应人乳头瘤病毒实时荧光定量PCRHPV感染宫颈癌筛查
