广东省科技计划工业攻关项目(73098)
- 作品数：5 被引量：29H指数：3
- 相关作者：万根平黄勇邓秋连谢永强周珍文更多>>
- 相关机构：广州市妇女儿童医疗中心广州市儿童医院重庆医科大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市医药卫生科技项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 儿童感染肺炎克雷伯菌质粒型AmpC酶基因分型及随机扩增DNA多态性分析被引量：2
- 2008年
- 目的了解儿童感染肺炎克雷伯菌的耐药情况、产质粒介导的AmpC酶的基因型别及产酶株的分子流行病学特征。方法采用K-B纸片法检测广州市儿童医院患儿感染的肺炎克雷伯菌的耐药情况;头孢西丁三维试验检测AmpC酶;多重PCR技术检测ampC基因并经DNA测序确定其基因型别;RAPD技术对产酶株进行DNA多态性分析。结果在分离到的110株肺炎克雷伯菌中,产质粒型AmpC酶肺炎克雷伯菌的分离率达17.3%,产酶株对头孢菌素类、头霉素类及复方β-内酰胺类抗生素高度耐药,但对亚胺培南仍全部敏感。多重PCR及DNA测序显示AmpC酶的基因型均为DHA型。多态性分析结果显示19株产AmpC酶菌株可分为15个谱型,其中A型有3株菌,B型、C型各两株,另12株菌谱型各不相同;C型两株产酶株分布于同一病区,而A型、B型产酶株则分布于不同病区。结论本地区儿童感染的肺炎克雷伯菌多重耐药情况严重;质粒介导的AmpC酶的检出率较高,其基因型为DHA型;产酶株主要为散发感染。
- 黄勇万根平顾晓琼邓秋连钟华敏张德纯
- 关键词：儿童随机扩增多态DNA技术
- 儿童肠道感染致病性大肠埃希菌血清型分布及耐药性研究被引量：11
- 2010年
- 目的:了解广州地区儿童细菌感染性腹泻粪便中检出致病性大肠埃希菌(EPEC)的血清型分布及耐药特征,为本地区的流行病学研究及临床合理用药提供依据。方法:采集2007年7月至2009年6月来我院就诊的腹泻患儿大便标本进行常规病原菌的分离培养,对可疑菌株进行生化鉴定和血清学分型,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验。结果:4568例大便标本共检出EPEC113株,检出率2.47%。血清学分型共检测到10种血清型,主要以O55K59、O126K71、O44K74为主,分别占15.93%、15.04%、15.04%。EPEC对氨苄西林耐药率较高,已达85.8%,对复方新诺明、头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶的耐药率分别为69.0%、37.2%、37.2%、15.9%,但对舒普深敏感率仍高达96.5%。结论:广州地区腹泻儿童肠道感染的EPEC血清分型较为分散,以O55K59、O126K71和O44K74为主。EPEC对氨苄西林的耐药率已较高,舒普深可作为临床EPEC感染治疗的经验用药。
- 万根平黄勇邓秋连周珍文谢永强
- 关键词：肠产毒性大肠杆菌血清分型儿童
- 儿童感染肺炎克雷伯菌产AmpC酶和ESBLs的检测及耐药性分析被引量：11
- 2009年
- 目的了解广州地区儿童感染肺炎克雷伯菌产质粒介导的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及其耐药特征,为临床合理用药提供参考依据。方法采用标准纸片扩散法检测ESBLs,头孢西丁三维试验法检测AmpC酶,K-B纸片法测定肺炎克雷伯菌对抗菌药物的敏感性。结果共检出248株肺炎克雷伯菌,其中46株产AmpC酶,阳性率为18.5%;157株产ESBLs,阳性率为63.3%;同时产AmpC酶和ESBLs菌株阳性率为18.1%。产AmpC酶肺炎克雷伯菌对第三代头孢菌素高度耐药,耐药率达80%～100%;对头孢吡肟、含酶抑制剂复合药的耐药率也在56.5%～93.5%之间;但对环丙沙星、阿米卡星的耐药率则在30%以下,对亚胺培南全部敏感。产ESBLs菌株对头孢菌素、含酶抑制剂复合药的耐药率也较高,在50%～91.7%之间,但对阿米卡星、环丙沙星、亚胺培南仍高度敏感。ESBLs阴性肺炎克雷伯菌对所测抗生素的敏感率均在81.2%以上。产酶菌株耐药率明显比非产酶菌株高。结论广州地区儿童感染肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶的状况已十分突出;产酶菌株对常用抗生素的耐药率较高;碳青霉烯类抗生素可作为治疗产AmpC酶和/或ESBLs肺炎克雷伯菌感染的经验用药。
- 黄勇周珍文邓秋连万根平谢永强
- 关键词：AMPC酶超广谱Β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌
- 基质金属蛋白酶-9靶向RNA干扰重组载体的构建和效应检测
- 2009年
- 目的:构建针对人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对川崎病(KD)血清诱导的血管内皮细胞MMP-9高表达的干扰效果。方法:依据siRNA设计原则设计两对MMP-9基因的特异性干扰序列,体外分别合成两端含BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的编码短发夹RNA序列的DNA单链,退火后与pSilencer3.1-HI neo线性质粒连接,转化DH5α感受态菌株,筛选阳性克隆,提取质粒进行双酶切及琼脂糖电泳鉴定。阳性重组质粒测序。将构建的两个MMP-9 siRNA质粒以KD血清作为诱导因子,用脂质法转染内皮细胞ECV-304,应用RT-PCR法测定各实验组血管内皮细胞MMP-9mRNA表达、Western blot检测各组MMP-9蛋白表达情况,对所构建的MMP-9 siRNA质粒进行效应检测。结果:DNA测序证实合成的并被克隆入pSilencer3.1-HI neo表达质粒siRNA插入序列与设计完全符合。KD血清组MMP-9蛋白及mRNA表达水平均较正常血清组明显升高(P<0.05);而所构建的两个MMP-9 siRNA及人血丙种球蛋白均能显著抑制KD血清的上述诱导作用(P<0.05)。结论:成功构建的两个MMP-9 siRNA比人血丙种球蛋白更能高效、特异地抑制MMP-9的表达,为进一步研究MMP-9基因对KD冠状动脉病变的影响及其临床应用奠定了基础。
- 顾晓琼万根平陈兆鸿
- 关键词：基质金属蛋白酶-9RNA干扰靶向冠状动脉扩张川崎病动脉瘤
- 儿童肠道感染志贺菌产β-内酰胺酶耐药基因及耐药性研究被引量：5
- 2010年
- 目的了解儿童肠道感染志贺菌的耐药性及其产β-内酰胺酶耐药基因的分布及基因分型。方法2007年至2008年在广州儿童医院采用K-B纸片法测定腹泻患儿粪便标本分离的66株志贺菌对8种抗生素的耐药情况,采用TEM、OXA、SHV、CTX-M-1组、CTX-M-2组和CTX-M-9组6对通用引物对志贺菌中β-内酰胺类耐药基因进行PCR扩增及DNA测序分析其基因型别。结果志贺菌对氨苄西林耐药率较高,达92.3%,对头孢曲松和头孢噻肟耐药率也达57.8%,但对头孢他啶、环丙沙星、氯霉素相对敏感,耐药率均在30%以下,对舒普深耐药率为0。66株志贺菌中57株扩增到有β-内酰胺酶耐药基因,阳性检出率86.4%,其中CTX-M-9组基因检出率最高,达47.0%,另TEM型检出率33.3%、OXA型31.8%、CTX-M-1组22.7%,CTX-M-2组、SHV型未检出。66株志贺菌中同时携带2种耐药基因者24株(占36.4%),携带3种耐药基因者3株,携带4种耐药基因者1株。结论广州地区儿童肠道感染志贺菌耐药情况较严重,氨苄西林已不适宜作为临床治疗志贺菌腹泻的一线用药。志贺菌β-内酰胺酶耐药基因携带率较高,主要以CTX-M-14型为主。
- 万根平黄勇邓秋连
- 关键词：志贺菌Β-内酰胺酶耐药基因儿童
