辽宁省自然科学基金(20082179)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 相关作者：方伯言唐甜甜张蕴莉杨锐王庆军更多>>
- 相关机构：辽宁医学院附属第一医院航天中心医院辽宁医学院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
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- 离体SH-SY5Y细胞内酸化对早老素-1表达的影响
- 2012年
- 目的研究早老素-1(PS1)在细胞内pH值降低时的表达情况,探讨细胞内pH值变化对γ-分泌酶活性的影响。方法本研究抑制细胞表面酸碱调节基因Na+-H+交换泵第一亚型(NHE1)的表达和酸化培养基,使细胞内pH值降低,构建细胞内酸化的SH-SY5Y细胞模型,将实验对象分为正常组、阴性对照组、NHE1组和酸化培养基组,应用ELISA法及western blot-ting,检测各组PS1的蛋白浓度及表达,分析细胞内pH值变化对PS1表达和活性的影响及其与γ-分泌酶的关系。结果检测胞膜离子交换蛋白NHE1组和酸化培养基组细胞内的PS1活性和蛋白表达较正常对照组和阴性对照组有显著增高(P<0.05),而NHE1组和酸化培养基组组间比较无明显差异,正常对照组和阴性对照组组间比较也无明显差异。结论细胞内pH值降低可促使PS1表达量增加,活性增高,提示细胞内pH值降低可能促使γ-分泌酶活性增高。
- 高芳峭方伯言
- 关键词：阿尔茨海默病Γ-分泌酶早老素-1细胞内PH值
- 靶向人NHE-1RNAi腺病毒表达载体的构建及细胞内酸化模型的建立被引量：1
- 2011年
- 目的构建靶向人钠氢交换蛋白-1(NHE-1)RNA干扰(RNAi)腺病毒表达载体,感染SH-SY5Y细胞,建立细胞内酸化模型,为进一步研究细胞内pH值变化与散发性阿尔茨海默病间的关系奠定基础。方法利用基因重组技术构建4个含NHE-1前体微小RNA(miRNA)的重组干扰质粒pcDNA^(TM)6.2-GW/miR和阴性对照质粒pcDNA6^(TM)6.2-GW/neg-miR,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NHE-1 mRNA表达变化,筛选最佳干扰靶序列;BP和LR重组系统获得腺病毒干扰质粒pAd-miR-NHE-1,经包装、纯化后检测腺病毒滴度;感染复数(MOI)值梯度试验确定靶向人NHE-1 RNAi腺病毒感染SH-SY5Y细胞最佳MOI值,以最佳条件感染SH-SY5Y细胞,荧光探针法检测不同处理组细胞内pH值。结果聚合酶链反应(PCR)提示最佳靶向人NHE-1 RNAi病毒表达载体构建成功,且能有效抑制NHE-1 mRNA表达;靶向人NHE-1 RNAi腺病毒感染SH-SY5Y细胞最佳MOI值为160。当最佳MOI值为160时,NHE-1 miRNA腺病毒感染24、48和72 h后SH-SY5Y细胞内pH值分别为5.97±0.03、5.98±0.02和5.98±0.02;空载体对照组为6.05±0.04、6.04±0.07和6.03±0.05;空白对照组为6.03±0.06、6.05±0.04和6.03±0.04。不同测量时间点,SH-SY5Y细胞内pH值均显著低于空载体对照组和空白对照组,差异具有统计学意义(24 h:p=0.002,0.015;48 h:p=0.030,0.012;72 h:p=0.018,0.010);但感染RNAi腺病毒后不同测量时间点(24、48和72 h)SH-SY5Y细胞内pH值差异无统计学意义(p=0.762)。结论最佳靶向人NHE-1 RNAi腺病毒表达载体及细胞内酸化模型的成功建立,可为探索细胞内酸碱平衡与β-淀粉样蛋白产生之间的关系提供一种有效工具。
- 方伯言黄美风
- 关键词：酸碱平衡腺病毒科酶链反应
- E-选择素S128R基因多态性与脑血栓形成遗传易感性的关系被引量：7
- 2009年
- 目的研究E-选择素（E-selectin）基因多态性与北方汉族人群脑血栓形成的关系。方法应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PcR—RFLP）技术检测120例脑血栓形成患者和102例健康体检者的E-选择素基因型；生化技术测定血脂、血糖水平；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清E-选择素水平。结果E-选择素S128R．基因型在2组中的分布差异有显著性（χ^2=6．39，P〈0．05），基因型频率的相对风险分析，SR基因型患脑血栓形成的风险是ss基因型的3．05倍，（OR=3．05，95％CI：1．29-7．20）；等位基因频率在2组中差异也有显著性（χ^2=5．94，P〈0．05，OR=2．84，95％CI：1．23--6．55）。结论E—selectin基因$128R多态性与脑血栓形成的发病具有相关性，R等位基因可能是北方汉族人脑血栓形成发病的遗传易感基因，携带SR基因型的个体可能通过促进E-selectin的高度表达进而增加脑血栓形成的发病风险。
- 张蕴莉唐甜甜方伯言
- 关键词：脑血栓形成E-选择素基因
- 依达拉奉对老年痴呆大鼠学习记忆及海马4-羟基壬烯醛表达的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨依达拉奉对老年痴呆大鼠学习记忆及海马组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)及4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,HNE)表达的影响。方法:采用单次双侧脑室注射Aβ蛋白的方法制备老年痴呆大鼠模型,分依达拉奉治疗组(1次/d,3 mg/kg,皮下注射)、空白对照组和模型组。自手术前1 d起给药,第10 d,各组分别进行Morris水迷宫检测后,处死动物并取脑,生物化学方法测定大鼠海马组织MDA含量,免疫组织化学技术检测海马HNE表达。结果:模型组与对照组相比水迷宫实验潜伏期时间显著延长,目的象限停留时间百分比降低,前脑组织MDA含量增加,海马CA1区HNE表达增多。依达拉奉组较模型组水迷宫结果显著改善,前脑组织MDA含量减少,且海马CA1区HNE表达显著减少。结论:依达拉奉能提高老年痴呆大鼠的学习和记忆能力,这种作用可能通过降低MDA及HNE等自由基氧化损伤产物而得以实现。
- 杨锐王庆军
- 关键词：老年痴呆依达拉奉水迷宫4-羟基壬烯醛
