国家自然科学基金(30700007)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：杨光吴娜刘玉高亚萍邵宁生更多>>
- 相关机构：军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 金黄色葡萄球菌Efb蛋白的表达、纯化及功能抗体的制备被引量：3
- 2009年
- 目的:利用大肠杆菌重组表达金黄色葡萄球菌外分泌蛋白Efb(extracellular fibrinogen-binding protein,细胞外纤维蛋白原结合蛋白),检测其生物学活性,并制备其功能性抗体,以探讨Efb蛋白在金葡菌感染中的生物学意义。方法:以金黄色葡萄球菌NCTC-8325菌株基因组为模板,PCR扩增efb基因,构建重组表达载体pET28a-Efb,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,通过Ni柱亲和纯化获得Efb;通过补体激活试验及竞争ELISA的方法检测Efb蛋白的生物学活性,免疫动物制备抗体。结果:获得了纯度较高的重组Efb蛋白,重组蛋白能够有效抑制CH50以及AH50,并且制备了Efb的功能性多克隆抗体。结论:Efb蛋白能够抑制补体激活的经典途径及替代途径,其特异性抗体能够阻断对于补体激活经典途径的抑制作用。
- 张鑫高亚萍董洁刘玉吴娜邵宁生杨光
- 关键词：葡萄球菌金黄色EFB抗体
- 金黄色葡萄球菌Hfq蛋白体外聚体生成和生物学功能的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:研究金黄色葡萄球菌中Hfq蛋白的聚体形式以及聚体和单体的不同生物学功能。方法:利用pET28-(a)载体克隆表达金葡菌来源的Hfq蛋白,通过天然凝胶电泳和SDS-PAGE检测不同条件下Hfq蛋白的存在形式。通过点突变的方法获得56和63位突变的Hfq蛋白,利用凝胶阻滞试验检测单体和聚体的RNA结合活性。结果:Hfq蛋白以单体、二聚体、四聚体以及六聚体的形式存在,各种聚体比例不同,长时间的高温、强酸和强碱会影响聚体的稳定性。在常规SDS-PAGE条件下,重组蛋白仅以四聚体形式存在。突变体蛋白不能够形成聚体且只有形成聚体的Hfq蛋白才能特异结合RNA。结论:Hfq蛋白形成聚体的过程是二聚体四聚体六聚体,且不同聚体形成的机制不同。56位和63位酪氨酸是Hfq蛋白聚体形成的关键氨基酸。聚体结构对Hfq蛋白发挥RNA伴侣分子生物学功能至关重要。
- 刘玉吴娜高亚萍董洁杨光邵宁生
- 关键词：葡萄球菌金黄色
