国家自然科学基金(30671875)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：魏红山张斌兰孟东邢卉春梁赟磊更多>>
- 相关机构：北京地坛医院首都医科大学附属北京地坛医院清华大学第一附属医院更多>>
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- Colgalt2敲除对刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎小鼠CD4 T细胞记忆和归巢的影响
- 2022年
- 目的初步探索糖基转移酶Colgalt2基因敲除对刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)小鼠模型中CD4 T细胞记忆和归巢的影响。方法随机抽取无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级6~8周的基因敲除(Colgalt2^(-/-))小鼠与野生型Colgalt2^(+/+)小鼠各18只,建立Con A诱导的AIH小鼠模型。检测小鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平,采用HE染色观察肝组织病理变化,采用体外磁珠分选脾脏CD4^(+)T细胞,采用流式细胞术检测小鼠外周血、脾脏及分选后CD4^(+)T细胞亚型比例。结果与Colgalt2^(+/+)小鼠相比,Con A刺激12 h Colgalt2^(-/-)小鼠血清ALT[(15610±2869)U/L vs(5009±1042)U/L;t=3.474,P=0.006]和AST[(16080±2631)U/L vs(4453±893.7)U/L;t=4.185,P=0.002]水平均显著升高。Con A刺激12 h Colgalt2^(-/-)小鼠肝损伤分级显著高于Colgalt2^(+/+)小鼠[(3.17±0.17)级vs(2.17±0.17)级],差异有统计学意义(t=4.243,P=0.002)。Con A刺激12 h Colgalt2^(-/-)小鼠脾脏CD4^(+)CD28^(-)[(97.80±0.46)%vs(88.85±3.35)%;t=2.650,P=0.024]和CD4^(+)CD62L^(-)[(97.98±0.46)%vs(88.68±3.38)%;t=2.669,P=0.023]均显著高于Colgalt2^(+/+)小鼠。体外脾脏实验表明,Con A刺激12 h Colgalt2^(-/-)小鼠CD4^(+)CD28^(-)[(94.88±1.20)%vs(82.97±2.70)%;t=4.295,P=0.002]和CD4^(+)CD62L^(-)[(99.95±0.02)%vs(99.24±0.26)%;t=2.731,P=0.021]均显著高于Colgalt2^(+/+)小鼠。结论Colgalt2基因敲除使脾脏CD4^(+)CD28^(-)和CD4^(+)CD62L^(-)细胞亚群表达上调从而加重Con A诱导的AIH。
- 刘燃魏红山叶小慧刘维张维燕
- 关键词：自身免疫性肝炎刀豆蛋白ACD4+T细胞
- 平分型GlcNAc糖基化修饰的生物学功能被引量：1
- 2009年
- 平分型GlcNAc（bisecting N—acetylglucosamine）修饰是糖蛋白N-聚糖核心的常见分支修饰形式，哺乳类动物该糖基化修饰由β1，4-N-乙酰葡糖氨基转移酶Ⅲ催化。该修饰对分子结合、信号传导、生殖发育以及肿瘤细胞的生物学行为都有重要影响。相应地，针对平分型GlcNAc修饰N-聚糖的检测也正逐步成为糖生物学领域内的研究热点之一。
- 董芳肖凡魏红山
- 关键词：糖蛋白糖基转移酶
- 血管紧张素Ⅱ相关新基因BC097361融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2009年
- 目的构建血管紧张素Ⅱ相关新基因BC097361的原核表达载体，诱导融合蛋白的表达，并对其进行纯化；制备兔抗BC097361蛋白多克隆抗体并进行鉴定。方法应用RT—PCR技术，以LX02细胞总RNA为模板，扩增BC097361目的基因片段，构建原核表达载体pET-32a（＋）-BC097361。转化大肠埃希菌BL21（DE3），异丙基-β-半乳糖苷诱导并通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析、Western blot分析证实融合蛋白表达的特异性。大量表达后利用Ni^＋亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。纯化蛋白免疫新西兰兔，获得抗BC097361蛋白的多克隆抗体。以纯化的BC097361蛋白为抗原，分别以免疫前后的新西兰兔血清作为第一抗体，利用Western blot和酶联免疫吸附法对多克隆抗体进行特异性分析及效价检测。结果扩增获得BC097361基因片段，成功表达了BC097361相关蛋白，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot分析得到证实。成功获得融合蛋白及兔抗BC097361多克隆抗体。酶联免疫吸附法检测证实多克隆抗体效价〉1：320000，Western blot、免疫组织化学检测证明多克隆抗体的特异性良好。结论利用大肠埃希菌BL21（DE3）能够成功表达BC097361蛋白，获得高特异性、高效价兔抗BC097361蛋白的多克隆抗体，为今后研究BC097361蛋白的生物学特性奠定了基础。
- 王琦梁赟磊魏红山邢卉春成军兰孟东张斌
- 关键词：肝纤维化基因原核表达蛋白纯化
