国家自然科学基金(30671876)
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 相关作者：龚作炯陈辉刘艳红褚小刚严少南更多>>
- 相关机构：武汉大学湖北省疾病预防控制中心更多>>
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- 载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G在不同慢性乙型肝炎患者中的表达及其细胞内定位被引量：5
- 2010年
- 目的观察载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G（APOBEC3G）在不同慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染类型患者的外周血单个核细胞（PBMC）及肝组织中的表达水平及其细胞内定位。方法用Westernblot及激光扫描共聚焦显微镜，以健康人为对照，检测不同慢性HBV感染类型患者（慢性乙型肝炎、慢性乙型重型肝炎、肝炎肝硬化、HBV相关性肝癌）的PBMC及肝组织中APOBEC3G的表达状况及其亚细胞定位。多组比较采用方差分析，两两比较采用q检验。结果Western blot结果显示，健康人PBMC中APOBEC3G表达水平极低，慢性乙型肝炎、慢性乙型重型肝炎、肝炎肝硬化和HBV相关性肝癌患者PBMC中APOBEC3G蛋白相对表达水平倍数分别为4．12±0．21、4．07±0．28、4．16±0．36、4．21±0．39，均高于健康人。但不同慢性HBV感染类型患者之间两两比较，PBMC中APOBEC3G的表达水平差异无统计学意义（g值分别为0．931、0．744、1．675、1．675、2．606、0．931，P值均〉0．05）。慢性乙型肝炎患者与HBV相关性肝癌患者比较，肝组织中APOBEC3G表达水平差异无统计学意义（4．40±0．34与4．34±0．43，q=0．588，P〉0．05）。激光扫描共聚焦显微镜观察结果显示PBMC中或肝组织中APOBEC3G表达定位于胞质中，胞核中无表达。结论慢性HBV感染患者虽有APOBEC3G的表达升高，可能只是HBV慢性感染的伴随表现，APOBEC3G是否参与机体抵御HBV感染的过程尚不清楚。
- 陈辉王鲁文褚小刚严少南龚作炯
- 关键词：肝炎病毒乙型单核细胞载脂蛋白B
- 干扰素-α诱导HepG2 2.2.15细胞APOBEC3G的表达及其机制
- 2009年
- 目的探讨干扰素（IFN）-α刺激HepG2 2．2．15细胞后，对载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G（apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G，APOBEC3G）表达的影响，以及初步探讨Janus激酶-信号传导和转录激活子OAK—STAT）信号通道是否参与APOBEC3G基因转录调控。方法对HepG2 2．2．15细胞给予不同剂量（0、1、10^1、10^2、10^3、10^4 U／mL）IFN-α刺激8h时，以及10^3 U／mL IFN-α刺激2、4、6、8、10、12h时，收集细胞或培养上清液。应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot检测HepG22．2．15细胞APOBEC3G、STAT-1 mRNA及蛋白的表达水平。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原与e抗原（HBsAg与HBeAg）水平，应用实时荧光定量PCR及RT-PCR分别检测上清液中HBVDNA水平以及细胞中HBVmRNA水平。结果无IFN-α（0 U／mL）刺激时，HepGa2．2．15细胞APOBEC3G表达水平很低。随着IFN-a浓度的升高，APOBEC3GmRNA及蛋白水平逐步升高，IFN-α浓度为10^4 U／mL时，APOBEC3G表达量最高，并且STAT-1分子mRNA及蛋白的表达量亦逐步升高，与APOBEC3G表达量呈现平行相关。随着IFN-a刺激时间的延长，APOBEC3G表达量明显升高，8h时达到最高，其后逐渐下降。10^4 U／mL IFN-α刺激8h时，HepG2 2．2．15细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg、HBVDNA及细胞中HBVmR-NA水平均明显低于无IFN-α刺激的HepG22．2．15细胞。结论WN-a能诱导HepG22．2．15细胞表达APO—BEC3G，在一定范围内，APOBEC3G的表达与IFN—d的剂量、作用时间呈正相关；IFN-α诱导APOBEC3G的表达可能是其发挥抗病毒作用的机制之一；IFN-α是否经JAK-STAT信号通道刺激APOBEC3G的表达，二者之间的关系及其机制尚待进一步研究。
- 王鲁文陈辉褚小刚严少南龚作炯
- 关键词：载脂蛋白B干扰素-ΑHEPG22.2.15细胞STAT-1
- APOBEC3G真核表达载体的构建及其对HBV复制表达的影响被引量：4
- 2009年
- 目的:构建APOBEC3G真核表达载体,在体外初步探讨APOBEC3G对HBV复制表达的影响。方法:应用RT-PCR法从人PBMC细胞中扩增APOBEC3G基因,分子克隆法构建表达APOBEC3G蛋白的真核表达载体pcDNA3.1-APOBEC3G,并脂质体法转染HepG22.2.15细胞。Western-blot鉴定细胞中APOBEC3G蛋白的表达。ELISA法检测细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg水平,实时定量PCR检测HBVDNA和HBV mRNA水平。结果:经酶切鉴定及测序证实APOBEC3G真核表达载体被成功构建,APOBEC3G蛋白可在HepG22.2.15细胞中表达。转染APOBEC3G重组质粒的HepG22.2.15细胞的HBsAg、HBeAg、HBVDNA及HBV mRNA水平均明显低于未转染重组质粒的HepG22.2.15细胞。结论:APOBEC3G明显抑制了HepG22.2.15细胞中HBV的复制与表达,成功构建APOBEC3G真核表达载体,为深入研究APOBEC3G抗HBV的作用机制奠定实验基础。
- 王鲁文楮小刚刘艳红曹廷华龚作炯
- 关键词：APOBEC3G基因构建真核表达乙型肝炎病毒
- 慢性乙型肝炎患者体内病毒基因G→A超突变的检测及分析
- 2010年
- 载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G（APOBEC3G）是一种胞嘧啶脱氨酶，是Sheehy等在对人类免疫缺陷病毒（HIV）进行允许细胞和非允许细胞基因差异表达分析过程中发现的一种新型抗病毒因子；它能使HIV病毒基因组发生鸟嘌呤（G）→腺嘌呤（A）的碱基突变，致使其病毒基因组不能执行正常的功能而具有抗病毒活性。HBV虽属于嗜肝DNA病毒，但在病毒复制过程中也存在逆转录过程，
- 戴锴王鲁文刘艳红龚作炯
- 关键词：突变载脂蛋白B
- APOBEC3G在慢性乙型肝炎、肝癌组织中的表达及其意义被引量：2
- 2008年
- 目的探讨APOBEC3G在慢性乙型肝炎和肝癌组织中的表达，及与慢性乙型肝炎和肝癌的关系。方法应用免疫组织化学方法检测45例肝组织（正常肝组织8例，慢性乙型肝炎肝组织6例，肝癌组织21例，癌旁组织10例）中APOBEC3G的表达，采用半定量积分法判断表达的强度。结果APOBEC3G在正常肝组织中无表达或仅见少量表达（表达阳性率12．5％），而在慢性乙型肝炎肝组织中、肝癌组织中和癌旁组织中均有较强表达（表达阳性率分别为83．3％、66．7％、50．0％），其差异有统计学意义（P〈0．01）。APOBEC3G在肝组织中的表达强度与同组中HBsAg、HBcAg的表达强度无明显相关（P〉0．05）。结论慢性HBV感染能促使肝细胞内APOBEC3G表达增高，但APOBEC3G高水平的表达与HBsAg、HBcAg的表达强度无明显相关。
- 徐威施金枝王鲁文刘艳红沈世强龚作炯
- 关键词：慢性乙型肝炎肝细胞
- APOBEC3G基因对HepG2.2.15细胞生物学行为的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 观察HepG2.2.15细胞在高表达APOBEC3G后,APOBEC3G对细胞生长迁移能力、细胞周期和凋亡现象等生物学行为的影响.方法 将真核表达载体pcDNA3.1-APOBEC3G转染入HepG2.2.15细胞中,应用有限稀释法筛选高表达APOBEC3G的HepG2.2.15细胞,并通过Western blot鉴定.应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡 应用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞株生长能力 应用划痕法观察细胞迁徙运动能力.结果 HepG2.2.15-APOBEC3G细胞（pcDNA3.1-APOBEC3G转染）和HepG2.2.15-pcDNA3.1细胞（空载体转染）,与HepG2.2.15细胞（空白对照）比较,细胞周期无明显变化[各期细胞所占比例分别为：G0/G1：（64.27±1.26）%比（64.18±1.24）%比（64.09±1.30）%,P＞0.05 S：（23.16±1.38）%比（22.67±1.41）%比（23.27±1.43）%,P＞0.05 G2/M：（11.36±1.26）%比（11.84±1.31）%比（11.37±1.22）%,P＞0.05],未见细胞凋亡现象,细胞的生长增殖无明显变化（P＞0.05）,细胞迁徙运动能力无明显变化[24h及48 h细胞迁移抑制率分别为：（7.5±3.7）%比（10.2±5.5）%,P＞0.05 （13.4±6.5）%比（17.8±9.2）%,P＞0.05].结论 高表达APOBEC3G对HepG2.2.15细胞生物学行为无明显影响.
- 陈辉徐威王鲁文褚小刚沈世强龚作炯
- 关键词：肝细胞基因表达细胞生物学
